一种妊娠期酒精暴露对胎儿脑损伤的体外模型建立方法技术

一种妊娠期酒精暴露对胎儿脑损伤的体外模型建立方法，该方法主要结合了新兴的hiPSCs来源的3D脑组织和生物材料海藻酸钠丝，通过加以适度的酒精刺激，模拟妊娠期酗酒对胎儿早期脑发育的影响。该模型作为创新的体外器官发育疾病模型，不仅利于直观观察酒精对脑发育的形态学影响，也可以借鉴各种检测方法，研究酒精对脑发育影响的分子学和细胞学机制，弥补了传统细胞实验和动物实验的不足，为研究妊娠期酒精对胎儿早期脑发育的影响提供了有力的工具。

【技术实现步骤摘要】
一种妊娠期酒精暴露对胎儿脑损伤的体外模型建立方法
本专利技术微流控芯片技术，具体涉及一种妊娠期酒精暴露对胎儿脑损伤的体外模型建立方法。
技术介绍
研究病理条件的分子学和细胞学机制研究为我们更好地了解、控制和治疗疾病提供了基础。传统的生物方法主要包括2D的细胞培养方式和动物模型。2D的细胞培养无法模拟生理条件下细胞的微环境，包括三维细胞外基质、间隙流、细胞间相互作用等，因此与生理条件下相比细胞的形态功能有很大不足，不能完全反映病理条件下分子层面和细胞层面的异常变化。而动物实验目前主要是使用鼠、兔、果蝇、线虫等模式生物，虽然模式生物来源方便、培养条件简单，但是基于人与动物的极大不同，因此很难完全反映各种条件下人体的生理变化。而对于人体的研究在保证最低损伤和方便观察的前提下，较为常用的有核磁共振、CT等，但是这些方法不具实时监测特点，并且很多都无法应用于胎儿发育、近几年来各种干细胞来源的类器官发育得到了有效发展，包括神经干细胞、肠干细胞、胚胎干细胞以及iPSCs。类器官的特征是干细胞或原代细胞自发形成的3D细胞团结构，其含有相应组织器官的多种功能细胞，这些细胞自组装成具有一定结构功能特异性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种妊娠期酒精暴露对胎儿脑损伤的体外模型建立方法，其特征在于其主要步骤分为：(1)海藻酸钠中空丝的制备；(2)3D脑前期诱导；(3)3D脑包裹在海藻酸钠中空丝内；(4)酒精处理3D脑。

【技术特征摘要】
1.一种妊娠期酒精暴露对胎儿脑损伤的体外模型建立方法，其特征在于其主要步骤分为：(1)海藻酸钠中空丝的制备；(2)3D脑前期诱导；(3)3D脑包裹在海藻酸钠中空丝内；(4)酒精处理3D脑。2.按照权利要求1所述妊娠期酒精暴露对胎儿脑损伤的体外模型建立方法，其特征在于：步骤(1)海藻酸钠中空丝的制备，具体为：(1)利用套管形式的微流控芯片制备具有中空结构的海藻酸钠丝，内径为600-1000μm，管壁厚度为50-200μm，所用液体无菌处理；(2)制备的海藻酸钠丝需浸泡在DMEM/F12培养基中，使其完成在培养基中的溶胀过程，并在4℃低温保存，便于后续操作。3.按照权利要求2所述妊娠期酒精暴露对胎儿脑损伤的体外模型建立方法，其特征在于海藻酸钠丝制备涉及到的仪器和溶液都必须无菌，实验前可进行相应的灭菌操作，具体为高温高压灭菌、UV照射或0.2μm孔径滤膜过滤。4.按照权利要求1所述妊娠期酒精暴露对胎儿脑损伤的体外模型建立，其特征在于：步骤(2)3D脑前期诱导，具体为：(1)使用带有坑状结构的PDMS芯片制备拟胚体：坑状结构的芯片置于24孔板内，小坑结构直径为600-800μm，深度为100-300μm，用于拟胚体的形成；(2)第1天，制备拟胚体，将2×105-6×105个hiPSCs消化成单细胞，并转移至(1)所述的芯片中，500-2000rpm离心3-5min，所用培养基为KSR培养基，并加入5μMY27632；(3)第2天，将形成的拟胚体转移至低粘附的培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦建华，朱玉娟，于跃，尹方超，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁,21