茉莉酸通路激活剂制造技术

提供增加植物或植物部分中目标异源蛋白的表达的方法。所述方法包括用茉莉酸类通路激活剂处理所述植物或植物部分，以及将可操作地连接至来源于DNA植物病毒的调控区并编码目标异源蛋白的核苷酸序列引入所述植物或植物部分。可选地，所述植物或植物部分可以包含编码目标异源蛋白的核酸，以及用所述茉莉酸类通路激活剂处理所述植物或植物部分。在一定条件下培养处理的植物，以允许编码目标异源蛋白的核苷酸序列的表达。

Jasmonic acid pathway activator

Provides a method for increasing the expression of target heterologous proteins in the parts of plants or plants. The method includes using jasmonic pathway activator to process the plant or plant parts, and operatively connecting to the regulatory region derived from the DNA plant virus and coding the nucleotide sequence of the target heterologous protein into the plant or plant part. Optionally, the plant or plant part can contain nucleic acids encoding target heterologous proteins, and the plant or plant parts can be treated with the jasmonic pathway activator. The plants are treated under certain conditions to allow the expression of the nucleotide sequence of the encoded target heterologous protein.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】茉莉酸通路激活剂专利
本专利技术涉及植物中蛋白的产生。本专利技术还涉及茉莉酸通路激活剂在增加植物或植物部分中异源蛋白的产生中的用途。专利技术背景植物逐渐被用作用于产生临床可用的重组蛋白的生物工厂。与植物产生的重组蛋白表达相关的优势包括，蛋白骨架的哺乳动物样翻译后成熟、较低的基础设施成本(与基于工业规模发酵罐的经典系统相比)和降低的关于产品的微生物毒素或人病原体污染的生物安全问题。在植物提取物中富集重组蛋白的方法通常依赖合适的提取缓冲液pH或离子强度的选择，以优先移出宿主蛋白并促进进一步纯化。低pH下的硫酸铵沉淀和提取可用于绿色组织提取物，以沉淀污染物，如细胞碎片和光合色素。这些程序还可用于沉淀非常丰富的酶核酮糖1，5-二磷酸羧化酶加氧酶(RuBisCO)(Peckham等人，2006)，其代表叶片中高至50％的总的可溶性蛋白(TSP)，并且通常使高度纯化的蛋白产物的制备复杂化(例如，Gaeda等人，2007)。茉莉酸甲酯(MeJA)是应激激素茉莉酸的挥发性衍生物(Okada等人，2015)。报道了MeJA和茉莉酸诱导的信号如创伤、食草动物或昆虫口腔分泌物对光合作用相关基因的转录的下调作用(Hermsmeier等人，2001；Jung等人，2007；Bilgin等人，2010；Zubo等人，2011；Duceppe等人，2012)。MeJA还显示促进叶片中核糖体基因的升高的表达，推测可用于维持响应于茉莉酸类信号传导通路的细胞中蛋白生物合成机制的活跃(Noir等人，2013)。专利技术概述本专利技术涉及植物中蛋白的产生。本专利技术还涉及茉莉酸通路激活剂在增加植物或植物部分中蛋白的产生中的用途。本专利技术的目标是提供在植物或植物部分中产生目标异源蛋白的改善的方法。描述了增加植物或植物部分中目标异源蛋白的表达的方法(A)。所述方法包括：i)用茉莉酸类通路激活剂处理所述植物或植物部分；ii)将包含编码所述目标异源蛋白的核酸并可操作地连接至来源于DNA植物病毒的调控区的核苷酸序列引入所述植物或植物部分；以及iii)在一定条件下培养所述植物或植物部分，以允许编码所述目标异源蛋白的核苷酸序列的表达，当将提取自所述植物或植物部分的所述目标异源蛋白的量与包含相同的核苷酸序列并且未用所述茉莉酸类通路激活剂处理的第二植物或第二植物部分中产生的所述目标异源蛋白进行比较时，观察到表达增加。以上概述的方法(A)中所述的DNA植物病毒可以是虫媒DNA植物病毒。此外，以上方法(A)中所述的茉莉酸类通路激活剂可以是茉莉酸甲酯，茉莉酸，冠菌素或者茉莉酸甲酯、茉莉酸或冠菌素的任何生物活性衍生物。本文还描述了以上限定的方法(A)，其中在处理步骤(步骤i)中，将所述茉莉酸类通路激活剂作为气体应用于植物或植物部分，或者作为液体应用并喷涂到植物或植物部分上，或者添加至维持植物或植物部分的生长培养基中。可选地，可将处理步骤(步骤i)和引入步骤(步骤ii)组合，以将茉莉酸类通路激活剂以及核苷酸序列引入植物或植物部分。以上所述的方法(A)中使用的茉莉酸类通路激活剂可以是气体或液体。此外，提供如以上所限定的方法(A)，其中利用植物或植物部分所浸入的液体培养基，以瞬时方式将核苷酸序列引入植物或植物部分，并将茉莉酸类通路激活剂引入处理步骤(步骤i)中的液体培养基中。可选地，可将处理步骤(步骤i)和引入步骤(步骤ii)组合，以将茉莉酸类通路激活剂以及核苷酸序列引入液体培养基中，并将茉莉酸类通路激活剂和核苷酸序列共同引入植物或植物部分。还提供降低植物或植物部分中总的宿主可溶性蛋白的方法(B)，其包括：i)用茉莉酸类通路激活剂处理所述植物或植物部分；ii)将包含编码目标异源蛋白的核酸并可操作地连接至来源于DNA植物病毒的调控区的核苷酸序列引入所述植物或植物部分；以及iii)在一定条件下培养所述植物或植物部分，以允许编码所述目标异源蛋白的核苷酸序列的表达，当将提取自所述植物或植物部分的总的宿主蛋白的量与包含相同的核苷酸序列但是未用所述茉莉酸类通路激活剂处理的第二植物或第二植物部分中产生的总的宿主蛋白进行比较时，观察到总的宿主蛋白降低。以上概述的方法(B)中所述的DNA植物病毒可以是虫媒DNA植物病毒。此外，以上方法中所述的茉莉酸类通路激活剂可以是茉莉酸甲酯，茉莉酸，冠菌素或者茉莉酸甲酯、茉莉酸或冠菌素的任何生物活性衍生物。本文还描述了以上限定的方法(B)，其中在处理步骤(步骤i)中，将所述茉莉酸类通路激活剂作为气体应用于植物或植物部分，或者作为液体应用并喷涂到植物或植物部分上，或者添加至维持植物或植物部分的生长培养基中。可选地，可将处理步骤(步骤i)和引入步骤(步骤ii)组合，以将茉莉酸类通路激活剂以及核苷酸序列引入植物或植物部分。以上所述的方法(B)中使用的茉莉酸类通路激活剂可以是气体或液体。此外，提供如以上所限定的方法(B)，其中利用植物或植物部分所浸入的液体培养基，以瞬时方式将核苷酸序列引入植物或植物部分，并将茉莉酸类通路激活剂引入处理步骤(步骤i)中的液体培养基中。可选地，可将处理步骤(步骤i)和引入步骤(步骤ii)组合，以将茉莉酸类通路激活剂以及核苷酸序列引入液体培养基中，并将茉莉酸类通路激活剂和核苷酸序列共同引入植物或植物部分。此外，提供增加转基因植物或转基因植物部分中目标异源蛋白的表达的方法(C)，其包括：i)用茉莉酸类通路激活剂处理所述转基因植物或转基因植物部分，所述转基因植物或转基因植物部分包含可操作地连接至来源于DNA植物病毒的调控区的编码所述目标异源蛋白的核苷酸序列；以及ii)在一定条件下培养所述转基因植物或转基因植物部分，以允许编码所述目标异源蛋白的核苷酸序列的表达，当将提取自所述转基因植物或转基因植物部分的所述目标异源蛋白的量与包含相同的核苷酸序列并且未用所述茉莉酸类通路激活剂处理的第二转基因植物或第二转基因植物部分中产生的所述目标异源蛋白进行比较时，观察到表达增加。以上方法(C)中描述的茉莉酸类通路激活剂可以是茉莉酸甲酯，茉莉酸，冠菌素或者茉莉酸甲酯、茉莉酸或冠菌素的任何生物活性衍生物。本文还描述了如以上所限定的方法(C)，其中在处理步骤(步骤i)中，将所述茉莉酸类通路激活剂作为气体应用于转基因植物或转基因植物部分，或者作为液体应用并喷涂至转基因植物或转基因植物部分上，或者添加至维持转基因植物或转基因植物部分的生长培养基中。本文描述了茉莉酸类通路激活剂(例如茉莉酸甲酯(MeJA))在引发重组目标异源蛋白的富集中的用途。可以通过调整重组蛋白与宿主(天然)蛋白的比例来改善植物中表达的异源蛋白的下游处理的总效率，包括纯化收率和终产物被宿主蛋白或其蛋白水解碎片污染、降低粗提物或培养基中的蛋白降解以及优化用于蛋白富集的回收方案。如本文所述，发现茉莉酸类通路激活剂的应用改变了植物叶片中的蛋白质组。在不希望受理论束缚的情况下，这一改变可能影响植物组织中目标异源蛋白产生的具体和相对收率。MeJA处理诱导RuBisCO大亚基和小亚基池的消耗，并增加茉莉酸类可诱导的防御蛋白(例如硫素、Ser蛋白酶抑制剂和抗微生物水解酶)的水平。利用农杆菌浸润降低茉莉酸类可诱导的防御蛋白的增加。但是，在农杆菌浸润的叶片中维持RuBisCO消耗的细胞环境，这允许目标异源蛋白的有效富集。与未本文档来自技高网...

【技术保护点】
增加植物或植物部分中目标异源蛋白的表达的方法，其包括：i)用茉莉酸类通路激活剂处理所述植物或植物部分；ii)将包含编码所述目标异源蛋白的核酸并可操作地连接至来源于DNA植物病毒的调控区的核苷酸序列引入所述植物或植物部分；以及iii)在一定条件下培养所述植物或植物部分，以允许编码所述目标异源蛋白的核苷酸序列的表达，当将提取自所述植物或植物部分的所述目标异源蛋白的量与包含相同的核苷酸序列并且未用所述茉莉酸类通路激活剂处理的第二植物或第二植物部分中产生的所述目标异源蛋白进行比较时，观察到表达增加。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.02 US 62/188,1821.增加植物或植物部分中目标异源蛋白的表达的方法，其包括：i)用茉莉酸类通路激活剂处理所述植物或植物部分；ii)将包含编码所述目标异源蛋白的核酸并可操作地连接至来源于DNA植物病毒的调控区的核苷酸序列引入所述植物或植物部分；以及iii)在一定条件下培养所述植物或植物部分，以允许编码所述目标异源蛋白的核苷酸序列的表达，当将提取自所述植物或植物部分的所述目标异源蛋白的量与包含相同的核苷酸序列并且未用所述茉莉酸类通路激活剂处理的第二植物或第二植物部分中产生的所述目标异源蛋白进行比较时，观察到表达增加。2.如权利要求1所述的方法，其中所述DNA植物病毒是虫媒DNA植物病毒。3.如权利要求2所述的方法，其中所述茉莉酸类通路激活剂是茉莉酸甲酯、茉莉酸、冠菌素或以上的任何生物活性衍生物。4.如权利要求1所述的方法，其中在处理步骤中，将所述茉莉酸通路激活剂喷涂在所述植物或植物部分上，或者添加至维持所述植物或植物部分的生长培养基中。5.如权利要求1所述的方法，其中将处理步骤和引入步骤组合，将所述茉莉酸类通路激活剂以及所述核苷酸序列引入所述植物或植物部分。6.如权利要求4所述的方法，其中所述茉莉酸类通路激活剂是气体。7.如权利要求4所述的方法，其中所述茉莉酸类通路激活剂是液体。8.如权利要求5所述的方法，其中所述茉莉酸类通路激活剂是气体。9.如权利要求5所述的方法，其中所述茉莉酸类通路激活剂是气体。10.如权利要求1所述的方法，其中在处理步骤(步骤i)中，将所述茉莉酸类通路激活剂作为气体应用于所述植物或植物部分，或者将所述茉莉酸类通路激活剂作为液体应用并喷涂到所述植物或植物部分上。11.如权利要求5所述的方法，其中将所述植物或植物部分浸入包含所述核苷酸序列和所述茉莉酸类通路激活剂的液体培养基中。12.如权利要求1所述的方法，其中所述目标异源蛋白是人病原体、病毒蛋白、白介素、细胞因子、红细胞生成素、胰岛素、G-CSF、GM-CSF、hPG-CSF、M-CSF、干扰素、凝血因子、受体、受体激动剂、抗体、神经多肽、生长因子、生长调节剂、抗原、自身抗原、单克隆抗体、嵌合单克隆抗体、单链单克隆抗体、病毒样颗粒(VLP)或其组合。13.降低植物或植物部分...

【专利技术属性】
技术研发人员：马克安德烈·道斯特，斯蒂芬妮·罗伯特，玛丽克莱尔·古利特，多米尼克·米考德，弗兰克·塞恩斯伯里，
申请(专利权)人：莫迪卡戈公司，拉瓦勒大学，
类型：发明
国别省市：加拿大,CA