一种养血清脑制剂的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种养血清脑制剂的检测方法，所述方法为高效液相色谱法，包括以下步骤：步骤1，供试品溶液的制备，步骤2，对照品溶液的制备，步骤3，色谱条件；步骤4，含量测定，将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图。本发明专利技术提供的方法供试品经过固相色谱柱处理后，成分经富集、纯化后再分析，使得对应色谱方法的分析时间更短的同时，更保证了色谱峰的分离度和方法的重现性；且本发明专利技术清晰定义了指纹图谱的相对定量方式，共明确了含量测定的绝对定量指标(2个)和指纹图谱的相对定量指标(19个)的控制要求，控制指标更全面，对产品的质量属性进行了更量化的描述。

A method for the detection of nourishing blood and clearing the brain

The invention relates to a method for detecting the brain preparation cleaning a blood, the method for high performance liquid chromatography, which comprises the following steps: 1, test solution preparation, step 2, standard solution preparation, step 3, step 4, chromatographic conditions; Determination of content, commodities will be tested solution and standard solution was injected into the HPLC chromatograms obtained. The invention provides a method for the test after the solid phase column after treated by enrichment, purification and composition analysis, the corresponding chromatographic methods of analysis time shorter at the same time, but also to ensure that the resolution and reproducibility of the chromatographic peak method; and the invention is clearly defined relative quantitative fingerprint, total the absolute determination of the quantitative index (2) relative quantitative index and fingerprint (19) control requirements, control index is more comprehensive, on the quality attributes of the product are more quantitative description.

【技术实现步骤摘要】
一种养血清脑制剂的检测方法
：本专利技术涉及一种中药制剂的检测方法，特别涉及一种养血清脑制剂的检测方法。
技术介绍
：养血清脑制剂(包括丸、颗粒等)是由当归、川芎、白芍、熟地黄、钩藤、鸡血藤、夏枯草、决明子、珍珠母、延胡索、细辛十一味中药和辅料制成的中成药，目前已经上市。养血清脑制剂具有养血平肝，活血通络的功效，可用于血虚肝亢所致的头痛、眩晕眼花、心烦易怒、失眠多梦等病症，在临床上具有显著的疗效。可以改善软脑膜微循环，增加脑血流量，缓解血管痉挛与止痛。目前，该药已成为临床上治疗CCCI(慢性脑供血不足)引起的头晕头痛失眠等症状的首选现代中药。养血清脑水提浸膏是养血清脑颗粒和养血清脑丸的制剂中间体。制备工艺为：当归、川芎、延胡索、决明子加乙醇加热回流提取，滤过，除杂，回收乙醇并浓缩，备用；白芍加乙醇加热回流提取，滤过，回收乙醇并浓缩，备用；熟地黄、钩藤、鸡血藤、夏枯草、珍珠母、细辛加水煎煮，滤过，浓缩，加乙醇静置，滤过，回收乙醇并浓缩，将所有提取物混合，即得养血清脑水提浸膏。养血清脑制剂主要药味当归、川芎、夏枯草、白芍等均含有酚酸成分。近年来的研究表明酚酸类化合物不仅具有显著的抗氧化、抗自由基、抑制低密度脂蛋白的氧化以及预防心血管疾病的作用，而且具有抗癌、抗炎症和血小板凝聚等功能，在医药方面有广泛的用途。另一重要药味——决明子，其主要成分蒽醌类物质，如橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚等，也具有降血压、降血脂、抗动脉粥样硬化等功效。中药产品作为一种多靶向作用制剂，其质量应综合评价。中药指纹图谱技术，作为一种综合宏观分析的可行手段，目前已成为国内外广泛接受的全面评价中药质量的方法。美国FDA在植物药制品指导原则中允许申报者提供产品的色谱指纹图谱资料，德国药用植物学会、英国草药典、印度草药典以及加拿大药用及芳香植物学会也都把指纹图谱作为质量控制标准的内容之一。针对养血清脑颗粒，之前通过高效液相色谱(李文博等，养血清脑颗粒的高效液相色谱指纹图谱研究，分析化学研究简报，2011(3)：387～391，以下简称文献1)及气相色谱(李文博等，养血清脑颗粒中挥发性成分的GC指纹图谱研究，中草药，2011，42(7)：1321，以下简称文献2)分别进行过指纹图谱的研究。然而，文献1存在如下缺陷：(1)分析时间过长(90分钟)，不利于实际生产中对养血清脑颗粒的质量评价和控制；(2)因监测波长所限(327nm、280nm)，所选定量成分含量较低(分别为阿魏酸、咖啡酸、迷迭香酸、黄芩苷)；方法未对含量较大的芍药苷进行定量测定(一般检测波长为230～240nm)；(3)未明确方法用于质量控制的评价方式。文献2存在如下缺陷：①仅针对挥发性成分进行了定性分析，无定量监测成分，多可用于产品的定性鉴别。②本研究共识别了10个共有峰，除一个较大成分峰(Z-藁本内酯)外，各成分所占比例相对较少，且仅来源于当归、川芎两味药材，不能做于本品整体质量评价的代表图谱。因此，专利技术人对养血清脑制剂(包括养血清脑颗粒、养血清脑丸等)建立了一种更为全面的、可进行整体评价的指纹图谱，以更好的反映养血清脑制剂的质量。
技术实现思路
：本专利技术提供了一种养血清脑制剂的检测方法，所述方法为高效液相色谱法，包括以下步骤：步骤1，供试品溶液的制备，步骤2，对照品溶液的制备，步骤3，色谱条件，步骤4，测定，将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图。其中，所述高效液相色谱条件如下：所述色谱条件为：用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.01％～0.5％磷酸或甲酸溶液为流动相B，将供试品溶液Ⅰ和供试品溶液Ⅱ分别按表1所述的梯度洗脱条件进行梯度洗脱；流速为每分钟0.4ml。表1：梯度洗脱条件优选的，本方所述方法，其中，所述供试品的制备包括以下步骤：取养血清脑制剂的粉末适量，加入50％～70％乙醇，使供试品溶液的终浓度为0.4g/10ml～0.4g/50ml，超声处理15～35分钟，放冷后离心，吸取上清液，过反相固相萃取柱，用70％乙醇洗脱，收集流出液，摇匀滤过，即得供试品溶液Ⅰ，继续用乙腈洗脱，收集洗脱液，摇匀滤过，即得。优选的，本方所述方法，其中，对照品溶液的制备包括以下步骤：取芍药苷对照品适量，加70％乙醇制成浓度为0.006～0.400mg/ml对照品溶液；取橙黄决明素对照品适量，加70％乙醇制成浓度为0.800μg/ml～100μg/ml对照品溶液；优选地，本方所述方法，其中，含量测定方法为：芍药苷含量的测定如下：分别精密吸取芍药苷对照品溶液与供试品溶液Ⅰ各2μl，注入液相色谱仪，按照梯度洗脱条件Ⅰ进行测定，即得；橙黄决明素含量测定如下：分别精密吸取橙黄决明素对照品溶液与供试品溶液Ⅱ各4μl，注入液相色谱仪，按照梯度洗脱条件Ⅱ进行测定，即得。更优选的，本专利技术所述方法，所述供试品的制备包括以下步骤：取养血清脑制剂的粉末适量，加入70％的乙醇溶液，使供试品溶液的终浓度为0.4g/10ml～0.4g/50ml，超声处理15分钟，放冷后离心，吸取上清液，过反相固相萃取柱，后用70％乙醇洗脱，收集所有流出液，摇匀滤过，即得供试品溶液Ⅰ；继续用乙腈洗脱，收集洗脱液，摇匀滤过，即得供试品溶液Ⅱ。最优选的，本专利技术所述方法，其中，供试品溶液的制备：取养血清脑制剂的粉末适量，加入70％的乙醇溶液，使供试品溶液的终浓度为0.4g/50ml，超声处理15分钟，放冷后离心，吸取上清液5ml，过已处理好的反相固相萃取柱，后用70％乙醇5ml洗脱，收集上述所有流出液定容至10ml，摇匀滤过，即得供试品溶液Ⅰ；继续用乙腈15ml洗脱，收集洗脱液，加纯化水定容至25ml，摇匀滤过，即得供试品溶液Ⅱ；最优选的，本专利技术所述方法，其中，对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，加70％乙醇制成浓度为0.05mg/ml对照品溶液；取橙黄决明素对照品适量，加70％乙醇制成浓度为5μg/ml对照品溶液；最优选的，本专利技术所述方法，其中，芍药苷含量：分别精密吸取芍药苷对照品溶液与供试品溶液Ⅰ各2μl，注入液相色谱仪，按梯度洗脱条件Ⅰ进行测定，即得；橙黄决明素含量：分别精密吸取橙黄决明素对照品溶液与供试品溶液Ⅱ各4μl，注入液相色谱仪，按梯度洗脱条件Ⅱ进行测定，即得。本专利技术所述方法，优选的，色谱条件及系统适应性试验：用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，具体为WatersACQUITYUPLCBEHC18，100mm×2.1mm，1.7μm，以乙腈为流动相A，以0.05％的磷酸溶液为流动相B，用表1的梯度洗脱条件进行洗脱；流速为每分钟0.4ml；本专利技术所述方法，其中供试品的制备中所用的反相固相萃取柱为DIKMAPLS固相萃取柱。本专利技术所述标准指纹图谱是经过对多批合格样品进行高效液相色谱检测，记录色谱图，并参考参照物的色谱图经过计算机统计计算，生成得到的标准高效液相色谱图。本专利技术所述的检测方法是对未知样品进行高效液相色谱检测，得到色谱图，将所得色谱图和上述标准指纹图谱进行对比，相似度高于90％则为合格样品，否则为不合格样品。本专利技术进一步研究出一种高效液相指纹图谱，其建立方法包括如下步骤：1)对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，加70％乙醇制成浓度为0.006～0.400本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种养血清脑制剂的检测方法，所述方法为高效液相色谱法，包括以下步骤：步骤1，供试品溶液的制备，步骤2，对照品溶液的制备，步骤3，色谱条件；步骤4，测定，将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图。

【技术特征摘要】
1.一种养血清脑制剂的检测方法，所述方法为高效液相色谱法，包括以下步骤：步骤1，供试品溶液的制备，步骤2，对照品溶液的制备，步骤3，色谱条件；步骤4，测定，将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中，所述供试品的制备包括以下步骤：取养血清脑制剂的粉末适量，加入50％～70％乙醇，使供试品溶液的终浓度为0.4g/10ml～0.4g/50ml，超声处理15～35分钟，放冷后离心，吸取上清液，过反相固相萃取柱，用70％乙醇洗脱，收集流出液，摇匀滤过，即得供试品溶液Ⅰ，继续用乙腈洗脱，收集洗脱液，摇匀滤过，即得。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，其中，所述供试品的制备包括以下步骤：取养血清脑制剂的粉末适量，加入70％的乙醇溶液，使供试品溶液的终浓度为0.4g/10ml～0.4g/50ml，超声处理15分钟，放冷后离心，吸取上清液，过反相固相萃取柱，后用70％乙醇洗脱，收集所有流出液，摇匀滤过，即得供试品溶液Ⅰ；继续用乙腈洗脱，收集洗脱液，摇匀滤过，即得供试品溶液Ⅱ。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，其中，供试品溶液的制备：取养血清脑制剂的粉末适量，加入70％的乙醇溶液，使供试品溶液的终浓度为0.4g/50ml，超声处理15分钟，放冷后离心，吸取上清液5ml，过已处理好的反相固相萃取柱，后用70％乙醇5ml洗脱，收集上述所有流出液定容至10ml，摇匀滤过，即得供试品溶液Ⅰ；继续用乙腈15ml洗脱，收集洗脱液，加纯化水定容至25ml，摇匀滤过，即得供试品溶液Ⅱ。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中，对照品溶液的制备包括以下步骤：取芍药苷对照品适量，加70％乙醇制成浓度为0.006～0.400mg/ml对照品溶液；取橙黄决明素对照品适量，加70％乙醇制成浓度为0.800μg/ml～100μg/ml对照品溶液。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，其中，对照品溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛丹丹，苏娟，李芳明，高展，孙玉侠，
申请(专利权)人：天士力医药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12