一种细胞培养收获液中病毒颗粒的电镜定量检测方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体公开了一种细胞培养收获液中病毒颗粒的电镜定量检测方法。本发明专利技术建立的检测方法，由于加入了非吸附型纳米颗粒，在超速离心过程中可通过其表面非特异性吸附的形式吸附低密度病毒颗粒，使得病毒颗粒更多地聚集到铜网上，检测下限由原先的1×10

【技术实现步骤摘要】
一种细胞培养收获液中病毒颗粒的电镜定量检测方法
本专利技术属于生物
，具体的，本专利技术涉及一种细胞培养收获液中病毒颗粒的电镜定量检测方法。
技术介绍
一、细胞培养的外源因子污染生物制品是采用生物技术制备而成的具有生物活性的药品、疫苗、抗体、生化产品等的总称，其生产工艺复杂且受多种因素影响，生产过程中使用的各种材料来源复杂，可能污染细菌、真菌、支原体和病毒等外源因子，引起产品安全性问题。其中生物制品生产用细胞是生物制品生产的一个关键要素，目前国内外许多生物制品均是以细胞基质材科为基础生产生物制品。同时，使用细胞基质生产生物制品过程及其复杂，加之周期长、易污染等客观因素，导至外源因子污染成为影响生物制品生物安全性的一个极其重要的因素。因此，对生物制品生产用细胞基质及过程进行严格的质量控制，排除外源因子污染，是生物制品生产的重要环节。鉴于生物制品的应用对象是人体免疫或疾病治疗。因此，生物制品终产品的质量与生物安全性密切相关，是各国药品管理机构最为关注的问题，各国药典中最严格控制的指标之一。生物制品生产用细胞基质需建立各级细胞库，细胞库质量是产品质量的上游保证，《中华人民共和国药典，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞培养收获液中病毒颗粒的电镜定量检测方法，包括下述步骤：1）预处理：按照常规离心方式去除待测样品中的细胞碎片和杂质，经超速离心浓缩后的病毒，用MEM或PBS溶解；2）上样检测：将经过步骤1）预处理的待测样品与纳米颗粒混合，将铜网置于该混合物中后超速离心；将铜网取出，清洗后的铜网磷钨酸负染，电镜观察；3）计数：若发现病毒样颗粒，则对不同网格中的纳米颗粒或病毒样颗粒进行计数，每个网格至少观察5个视野，结果中会给出网格中纳米颗粒和病毒样颗粒各自的数目，并根据两者的比例关系计算出检测样品中病毒样颗粒的浓度。

【技术特征摘要】
1.一种细胞培养收获液中病毒颗粒的电镜定量检测方法，包括下述步骤：1）预处理：按照常规离心方式去除待测样品中的细胞碎片和杂质，经超速离心浓缩后的病毒，用MEM或PBS溶解；2）上样检测：将经过步骤1）预处理的待测样品与纳米颗粒混合，将铜网置于该混合物中后超速离心；将铜网取出，清洗后的铜网磷钨酸负染，电镜观察；3）计数：若发现病毒样颗粒，则对不同网格中的纳米颗粒或病毒样颗粒进行计数，每个网格至少观察5个视野，结果中会给出网格中纳米颗粒和病毒样颗粒各自的数目，并根据两者的比例关系计算出检测样品中病毒样颗粒的浓度。2.根据权利要去1所述的方法，所述的步骤1）的步骤包括：1）、先取待检测样品5~10ml，转入15ml离心管中，于4℃，3000g离心10分钟；2）、将离心好的上清转入新的15ml离心管中，于4℃，6000g离心20分钟；3）、将离心好的上清转入新的15ml离心管中，于4...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁冰，张智，李姣，
申请(专利权)人：武汉珈创生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42