一种环肽Alaptide的液相合成方法技术

本发明专利技术公开了一种环肽Alaptide的液相合成方法，该方法采用液相合成法中的Boc策略，将N端Boc保护的L‑环亮氨酸与N‑羟基丁二酰亚胺、N,N′‑二环己基碳二亚胺反应得到活化酯后，与丙氨酸甲酯的盐酸盐缩合成N端Boc保护的环亮氨酰丙氨酸甲酯，再脱除Boc保护基，在碱性条件下使氨基和羧酸酯基进行环合反应，即可得到环肽Alaptide。本发明专利技术操作步骤简单、成本低廉且产品收率高，克服了现有合成方法原料成本高、产品收率低、规模化困难、环境压力大等问题。

A method for the synthesis of cyclic peptide Alaptide by liquid phase synthesis

The invention discloses a cyclic peptide Alaptide liquid phase synthesis method, the method of using liquid phase synthesis method in the Boc strategy N end Boc protection L ring and N two hydroxy leucine imide, N, N 'dicyclohexylcarbo two imine activation ester, and alanine the synthesis of N methyl ester hydrochloride shrinkage - Boc protection ring leucyl alanine methyl ester, and then removal of the Boc protecting group of the amino and carboxylate radical cyclization reaction under alkaline conditions can be obtained by cyclic peptide Alaptide. The invention has the advantages of simple operation steps, low cost and high product yield, and overcomes the problems of high cost of raw materials, low yield, large scale and environmental pressure.

【技术实现步骤摘要】
一种环肽Alaptide的液相合成方法
本专利技术属于多肽液相合成
，具体涉及一种环肽药物Alaptide的液相合成方法。
技术介绍
Alaptide又称CPA，是一种环亮氨酸和丙氨酸的环肽，作为一种化学药物，曾用于治疗皮肤疾病，在消炎和抗菌化学领域有着积极的治疗作用。当前临床三期研究表明，Alaptide在上呼吸道疾病的治疗方面有着很大的潜力，同时，对高血压病人的血压也有积极的治疗潜力。CPA可作为脑功能改善促智药物，它的许多衍生物具有明显增强记忆的活性，可延长雌鼠的记忆保留时间。呼吸窘迫综合征是指肺内、外严重疾病导致以肺毛细血管弥漫性损伤、通透性增强为基础，以肺水肿、透明膜形成和肺不张为主要病理变化，以进行性呼吸窘迫和难治性低氧血症为临床特征的急性呼吸衰竭综合征。属于急性肺损伤的严重阶段或类型，临床试验显示，环肽Alaptide对呼吸窘迫综合征有着积极的治疗作用。阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)是高血压患者的一种非常普遍的疾病。肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)在血压控制中起着核心作用。血管紧张素-离子拮抗剂Losartan是一种有效的降压药物。然而，有些病人对这种药物的反应比其他病人更糟，这是一种临床实践，要么增加剂量，要么增加另一种药物。临床试验显示，环肽Alaptide的注入，可以有效缓解OSA患者的病情，同时，在注入Alaptide后，患者的血压持续平稳降低，达到一个理想的检测结果。GB2127807A公开了一种Alaptide的液相合成方法，该方法采用Cbz保护的丙氨酸和L-环亮氨酸的甲酯，用N,N′-二环己基碳二亚胺缩合成直线二肽，采用钯/碳氢化，脱去Cbz基团，在甲苯体系回流得到Alaptide。该方法合成成本较高，且Alaptide收率仅为39％。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种低成本、高收率、易规模化的液相合成环肽Alaptide的方法。解决上述技术问题所采用的技术方案由下述步骤组成：1、将L-环亮氨酸(H-Cycloleucine-OH)与二碳酸二叔丁酯进行氨基端保护反应，得到N-叔丁氧羰基-L-环亮氨酸(Boc-Cycloleucine-OH)。2、以甲醇为溶剂，将丙氨酸(H-Ala-OH)与二氯亚砜或草酰氯反应，生成丙氨酸甲酯的盐酸盐(H-Ala-OMe·HCl)。3、采用液相合成法，将Boc-Cycloleucine-OH与N-羟基丁二酰亚胺(HOSu)、N,N′-二环己基碳二亚胺(DCC)反应得到活化酯，再与H-Ala-OMe·HCl在碳酸钠水溶液或碳酸氢钠水溶液中进行缩合反应，得到N-叔丁氧羰基-环亮氨酰丙氨酸甲酯(Boc-Cycloleucine-Ala-OMe)。4、脱除Boc-Cycloleucine-Ala-OMe的Boc保护基，然后在碱性条件下使氨基和羧酸酯基进行环合反应，得到环肽Alaptide。上述步骤1中，所述氨基端保护反应的具体方法为：将H-Cycloleucine-OH溶于四氢呋喃与水的混合溶液或二氯甲烷与水的混合溶液中，加入碳酸钠或碳酸钾，在5～15℃条件下滴加二碳酸二叔丁酯，滴加完后常温反应5～8小时，过滤掉难溶物，减压脱除四氢呋喃或二氯甲烷，用柠檬酸调节pH为3～4，萃取、盐洗、干燥、脱除溶剂，得到Boc-Cycloleucine-OH；其中所述H-Cycloleucine-OH与碳酸钠或碳酸钾、二碳酸二叔丁酯的摩尔比优选1:1.5～2.5:1.3～2.0。上述步骤2的具体操作方法为：将H-Ala-OH溶于甲醇中，在0～5℃条件下滴加二氯亚砜或草酰氯，滴加完后在0～10℃条件下反应1～2小时，然后自然升至室温反应6～8小时，旋干，得到H-Ala-OMe·HCl，其中H-Ala-OH与二氯亚砜或草酰氯的摩尔比优选1:2～3。上述步骤3中，所述缩合反应的具体方法为：以四氢呋喃为溶剂，将Boc-Cycloleucine-OH与N-羟基丁二酰亚胺(HOSu)、N,N′-二环己基碳二亚胺(DCC)在-5～10℃条件下反应3～8小时，然后加入H-Ala-OMe·HCl和碳酸钠水溶液或碳酸氢钠水溶液，常温反应6～10小时，分离纯化，得到Boc-Cycloleucine-Ala-OMe；其中所述Boc-Cycloleucine-OH、HOSu、DCC、H-Ala-OMe·HCl、碳酸钠或碳酸氢钠的摩尔比优选1:1～1.3:1.1～1.5:1～2:3～5。上述步骤4中，采用HCl-乙酸乙酯或HCl-1,4-二氧六环体系脱除Boc保护基。上述步骤4中，所述的碱性条件是指pH＝9～11，其优选通过碳酸钠、碳酸氢钠、N-甲基吗啉、N,N′-二异丙基乙胺或N-甲基吡咯烷酮调节。本专利技术的有益效果如下：1、本专利技术采用Boc策略，将N端Boc保护的L-环亮氨酸和丙氨酸甲酯的盐酸盐经缩合成N端Boc保护的环亮氨酰丙氨酸甲酯，再脱除Boc保护基，在碱性条件下使氨基和羧酸酯基进行环合反应，得到环肽Alaptide，中间体不需要经过柱层析纯化，相对于传统的合成方法，氨基酸用量少，避免了较为昂贵树脂的使用和高毒溶剂哌啶的使用，合成成本较低，易于规模化，对环境压力小。2、本专利技术将H-Cycloleucine-OH的N端采用Boc保护，避免了较为昂贵且危险的钯碳和高毒性溶剂甲苯的使用，保护基便于脱除，反应条件温和，易于操作，且Alaptide收率可达到73％以上。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进一步详细说明，但本专利技术的保护范围不仅限于这些实施例。实施例11、在500mL单口瓶中加入12.9g(0.1mol)H-Cycloleucine-OH、100mL四氢呋喃、150mL水，搅拌至固体溶解后加入21.2g(0.2mol)碳酸钠，然后在5～15℃条件下缓慢滴加35mL(0.15mol)二碳酸二叔丁酯，滴加完后常温反应6小时，TLC显示反应完全，过滤掉难溶物，减压脱除四氢呋喃，用柠檬酸调节pH＝3后用乙酸乙酯萃取(100mL×3次)，有机相经饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥后，减压脱除溶剂，得到20gBoc-Cycloleucine-OH。2、在500mL单口瓶中加入17.8g(0.2mol)H-Ala-OH、200mL甲醇，搅拌至固体溶解，在0～5℃条件下滴加29mL(0.4mol)氯化亚砜，滴加完后在0～10℃条件下反应2小时，然后自然升温至室温反应7小时，旋干溶剂，得到24gH-Ala-OMe·HCl。3、在1L单口瓶中加入20g(0.087mol)Boc-Cycloleucine-OH、500mL四氢呋喃、11g(0.095mol)HOSu、26.8g(0.130mol)DCC，在-5～5℃条件下反应7小时，TLC显示反应完全，过滤掉不溶物，向滤液中加入20g(0.143mol)H-Ala-OMe·HCl、30g(0.360mol)碳酸氢钠、80mL蒸馏水，常温搅拌反应8小时，TLC显示反应完全，过滤掉难溶杂质，旋干溶剂，加入200mL蒸馏水和300mL乙酸乙酯，萃取有机相，有机相经饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥后旋干溶剂，得到27gBoc-Cycloleucine-Ala-OMe。4、在1L反应瓶中加入27gBoc-Cycloleucine-Al本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种环肽Alaptide的液相合成方法，其特征在于该方法由下述步骤组成：(1)将L‑环亮氨酸与二碳酸二叔丁酯进行氨基端保护反应，得到N‑叔丁氧羰基‑L‑环亮氨酸；(2)以甲醇为溶剂，将丙氨酸与二氯亚砜或草酰氯反应，生成丙氨酸甲酯的盐酸盐；(3)采用液相合成法，将N‑叔丁氧羰基‑L‑环亮氨酸与N‑羟基丁二酰亚胺、N,N′‑二环己基碳二亚胺反应得到活化酯，再与丙氨酸甲酯的盐酸盐在碳酸钠水溶液或碳酸氢钠水溶液中进行缩合反应，得到N‑叔丁氧羰基‑环亮氨酰丙氨酸甲酯；(4)脱除N‑叔丁氧羰基‑环亮氨酰丙氨酸甲酯的叔丁氧羰基保护基，然后在碱性条件下使氨基和羧酸酯基进行环合反应，得到环肽Alaptide。

【技术特征摘要】
1.一种环肽Alaptide的液相合成方法，其特征在于该方法由下述步骤组成：(1)将L-环亮氨酸与二碳酸二叔丁酯进行氨基端保护反应，得到N-叔丁氧羰基-L-环亮氨酸；(2)以甲醇为溶剂，将丙氨酸与二氯亚砜或草酰氯反应，生成丙氨酸甲酯的盐酸盐；(3)采用液相合成法，将N-叔丁氧羰基-L-环亮氨酸与N-羟基丁二酰亚胺、N,N′-二环己基碳二亚胺反应得到活化酯，再与丙氨酸甲酯的盐酸盐在碳酸钠水溶液或碳酸氢钠水溶液中进行缩合反应，得到N-叔丁氧羰基-环亮氨酰丙氨酸甲酯；(4)脱除N-叔丁氧羰基-环亮氨酰丙氨酸甲酯的叔丁氧羰基保护基，然后在碱性条件下使氨基和羧酸酯基进行环合反应，得到环肽Alaptide。2.根据权利要求1所述的环肽Alaptide的液相合成方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述氨基端保护反应的具体方法为：将L-环亮氨酸溶于四氢呋喃与水的混合溶液或二氯甲烷与水的混合溶液中，加入碳酸钠或碳酸钾，在5～15℃条件下滴加二碳酸二叔丁酯，滴加完后常温反应5～8小时，过滤掉难溶物，减压脱除四氢呋喃或二氯甲烷，用柠檬酸调节pH为3～4，萃取、盐洗、干燥、脱除溶剂，得到N-叔丁氧羰基-L-环亮氨酸。3.根据权利要求2所述的环肽Alaptide的液相合成方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述L-环亮氨酸与碳酸钠或碳酸钾、二碳酸二叔丁酯的摩尔比为1:1.5～2.5:1.3～2.0。4.根据权利要求1所述的环肽Alaptide的液相合成方法，其特征在于：所述步骤(2)的具体操作方法为：将丙氨酸溶于甲醇中，在0～5℃条件下滴加二氯...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晨，陈科，王惠嘉，张忠旗，苏晨灿，杨小琳，赵金礼，
申请(专利权)人：陕西慧康生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61