本发明专利技术涉及黄青霉酰胺的制备方法和用途。本发明专利技术用从新鲜中药肉苁蓉肉质鳞茎中分离得到的产黄青霉Ｎｏ．００５ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ生产出黄青霉酰胺（ＣｈｒｙｓｏｇｅｎａｍｉｄｅＡ）。经实验证实，该化合物对Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］损伤的ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞具有显著的保护作用，有望开发成为抗老年痴呆症药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用产黄青霉No.005户训'c朋柳c/!，oge"腦制备黄青霉酰胺的方法，该菌株已于 2007年11月29日保藏在(中国典型培养物保藏中心，保藏编号是CCTCC M207186);本发 明还涉及该化合物在保护由&02损伤的SH-SY5Y细胞方面的用途。
技术介绍
含有二环二氮杂辛烷片断的氧化吲哚生物碱已有一些文献报道，如Baiiks，R.M.， Blanchflower, S. E., Everett J. R.， Manger, B.R.， and Reading, C., Novel anthelmintic metabolites from an A戸g/肠species; the aspergillimides. >/. Jw版of.， 1997， 50, 840-846; Polonsky, J., Merrien, M. A.， Prange, T.， Pascard， C. and Moreau， S.. Isolation and structure (x-ray analysis) of marcfortine A， a new alkaloid from jPe/w.d///w/w ro《we々W/.G CTie附.C*o;w/m.' 1980， 13， 601-602; Wilson, B. J., Yang, D. T. C. and Harris, T. M.， Production, isolation, and preliminary toxicity studies of brevianamide A from cultures of尸ewz'c!7/z'w加Vz>7'c !'caft//m. ^P/ /. Af/cro6/o/.， 1973， 26， 633-635;该类化合物最主要的结构特征是有一个吲哚片断组成的螺环片断和一个 二环的二氮杂辛垸片断。吲哚部分常有一个异戊烯基都是通过氧原子与其相连， 或者是环合在吲哚的苯环片断上。这类化合物显示了许多生物活性，如抗寄生虫活性，抑 制肿瘤生长活性和细胞毒性等。本专利技术人研究发现产黄青霉(/>em'c////"/ c/w^ogemw/) No.005液体发酵产物经超声破碎后的粗提物对H202引起的神经细胞(SH-SY5Y)损伤具有 保护活性，遂对其活性成分进行了研究，结果发现了一个新的具有神经细胞保护活性的黄 青霉酰胺化合物(ChrysogenamideA)。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一个结构独特的具有神经细胞保护活性的新化合物。本专利技术的目的还在于提供一个化合物的制备方法及其在经细胞保护活性或抗老年痴呆症方面的用途。本专利技术首次从产黄青霉No.005 c/w;ywge""附)发酵物中发现了一个新的黄青霉酰 胺(ChrysogenamideA),如式I所示其结构特征是含有二环二氮杂辛垸片断的氧化吲哚生物碱 上述专利技术中的化合物是由中药肉苁蓉内生真菌产黄青霉No.005 (Pe"&!7//"/ c/y"oge""/w)的液体发酵物经硅胶柱层析，以石油醚-丙酮为溶剂进行梯度洗脱，石油 醚-丙酮3: 2洗脱物，再经反相硅胶柱层析，进一步经HPLC，以甲醇-水80: 20洗脱 得式I化合物。本专利技术釆用MTT法测试了式I化合物拮抗H202引起的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋 亡活性。实验证实，式I化合物对SH-SY5Y细胞具有保护作用。 因此本专利技术的式I化合物可用作神经细胞保护剂。式I化合物与各种药物可接受的载体、赋形剂或辅料配伍，可制成抗老年痴呆症药物, 用于老年痴呆症的治疗。本专利技术的式I化合物可通过微生物发酵培养，然后从发酵物中分离纯化而得到；也可 由上述优选化合物经本领域技术人员熟知的化学修饰方法合成获得。 需要特别说明的是，经发酵微生物制取本专利技术式I化合物的方法可采用其它任何能生 产该类化合物的微生物，只要能生产该类化合物的微生物均可作为生产菌用于制备式 I化合物。 具体实施例方式在如下的实施例中所指的化合物1的化学结构分别是(结构式中的阿拉伯数字是化学结 构中碳原子的标位)实施例1化合物1的发酵生产及分离精制 1发酵生产生产菌的发酵培养按培养微生物的常规方法，取产黄青霉No.005 (Pe"z'cz7//M/n c/^犯ge"薩)(中国典型培养物保藏中心，保藏编号是CCTCC M207186))适量，接种到 PDA斜面培养基上，在28'C培养箱中培养4天。取斜面培养4天的产黄青霉No.005 (Pem'a7/!'柳c/iowgew廳)适量，接种到35个装有300mL培养液的lOOOmL锥型瓶中，在24'C条件下静止培养30天， 获得产黄青霉No.005 (Pe"/ci7/i'wn c/w^ogem/附)的菌丝体和发酵液。 2浸膏的获得用棉布将菌丝体和发酵液分离。将菌丝体用丙酮浸提三次，减压浓縮至不含丙酮，所 得水层用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液减压浓縮，得粗浸膏。发酵 液减压浓縮为四分之一体积后，用乙酸乙酯萃取三次，合并菌丝体和发酵液的浸膏， 共9.5克。 3化合物的分离精制浸膏(9.5克)用氯仿-甲醇(9:l)混合溶剂溶解后，加20克200-300目硅胶(青岛海洋 化工集团公司产品)拌样，减压除去溶剂后，用硅胶柱层析，以石油醚-丙酮为溶剂进 行梯度洗脱，分为15个流份。Fr-4(26mg，石油醚-丙酮3: 2洗脱物)，经多次反相硅 胶柱层析(甲醇-水)，再经制备HPLC,以甲醇-水80: 20洗脱得ChrysogenamideA (2.6mg)。ChrysogenamideA,淡黄色粉末，分子式为C28H37N302。 &及13CNMR数据见表1 。 表1 NMR Data for Chrysogenamide A (ppm inNo.13C1-NH10.36s——2—183.1, qC3一62.3， qC47.18d(7.3)123.6, CH56.90dd (7.3， 7.3)120.8， CH66.94d (7.3)127.7, CH7—122.1， qC8—140.4， qC9一129.9, qC10a2.20ma39.9， CH210b2.09ma11—60.4 qC12a3.32d (8.7)64.9， CH212b2.22ma—13—58.7, qC14a1.44ma20.7， CH214b1.15ma15a2.08m31.8, CH215b10.36s16a1.52m34.3， CH216b1.08m172.02m58.7， CH18—172.3, qC<table>table see original document page 6</column></row><table>实施例2抗老年痴呆活性的测试1实验样品及实验方法被测样品溶液的配制测试样品为上述实施例1中分离精制的纯品化合物 Chrysogenamide A。准确称取适量样品，用DMSO配制成所需浓度的溶液，供活性测 试。细胞系及细胞的继代培养活性测试采用SH-SY5Y细胞系。用含10%PBS的DMEM 培养基，在本文档来自技高网...
【技术保护点】
式Ⅰ化合物 ＊＊＊ 式Ⅰ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：方玉春，顾谦群，林贞建，朱天骄，朱伟明，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]
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