本发明专利技术公开了一种具有植物毒活性的产黄青霉属真菌及其制备方法和应用。该真菌为PenicilliumChrysogenum，具辐射状皱纹，边缘菌丝体白色，质地绒状，分生孢子结构大量，蓝绿色，有些许浅黄色渗出液和可溶性色素，菌落反面呈浅黄褐色。真菌的代谢物对其他植物具有明显的植物毒活性以及线虫触杀活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种具有植物毒活性的产黄青霉属真菌及其制备方法和应用，属于微生物农药
技术介绍
据联合国粮农组织报道，全世界有杂草约5万种，其中农田杂草为8000种。杂草是在长期适应当地作物、栽培、耕作、土壤、气候等生态环境及社会条件中生存下来的，从多方面危害作物。它们与农作物争夺水、肥、光等，侵占地上和地下的空间，影响作物光合作用，干扰作物生长，影响产量和质量。此外，许多杂草又是危害作物的病菌、害虫的中间宿主，如稗草是稻飞虱、稻叶蝉、黏虫等的中间寄主。杂草是农业生产的大敌，杂草不除，最终导致作物减产，造成的损失则是不容忽视的。化学除草剂具有作用迅速、使用方便等特点，在杂草治理中发挥了重要作用（张玉聚，孙化田，王春生. 除草剂及其混用与农田杂草化学防治[M]北京：中国农业出版社， 2000：3-6）。但化学除草剂的不断应用，也引起作物的药害，耐药杂草种群的上升，环境污染日趋严重。利用微生物代谢产物，特别是植物病原真菌毒素，开发微生物除草剂一般为多靶标作用, 不容易引起杂草抗性的产生, 具有靶标针对性强、开发成功率高、易于生产加工等特性, 已成为生物除草剂研究的热点之一, 并显示出良好的开发应用前景（张红玉. 植物病原真菌毒素除草活性研究现状. 草业科学，2009，26-10，160-164）。松材线虫病，又称松树萎蔫病、松树枯萎病、松材线虫萎蔫病, 是严重危害我国松林安全的最主要外来入侵有害生物病害, 是引起松树毁灭性的重大森林生物灾害病害, 素有松树“癌症”之称, 世界四大森林病害之一, 并可危害36种松属植物和8种非松属植物。由于该病发病迅速, 危害严重, 死亡率高, 防治极其困难, 世界各国给予高度重视, 它一直作为我国对外和对内的林业有害生物检疫对象，也是全国林业有害生物防治工作重点之一。据国家林业局统计( 2002年) , 该病发生817 万hm2, 累计造成3500多万株松树死亡, 主要威胁着林业生产和生物多样性, 严重破坏森林生态效应，直接经济损失达25亿元，间接经济损失达250亿元(陈守常，松材线虫病病原与致病机理研究进展，四川林业科技，2010，31-1，18-25)。近年来, 我国许多地方发现不明原因枯死松树现象, 经研究人员分离，发现不少枯死松树中存在与松材线虫形态极为相似的拟松材线虫[魏素珍, 史延梅, 陈凤毛，拟松材线虫及其致病性，安徽农业科学，2010, 38( 36) : 20666- 20667]。从近几年的研究结果看，拟松材线虫往往比松材线虫分布范围更广, 在同一地区常常是拟松材线虫先出现, 然后才有松材线虫出现。在我国也发现许多非松材线虫病疫区的松树上存在拟松材线虫, 并且一些地方的马尾松发生大面积死亡, 但死松中却无松材线虫，防治拟松材线虫的研究也成为新的研究热点。植物内生真菌来源于植物体，通过产生抵抗多种病原菌的抗生素类物质或毒素，帮助宿主植物抵抗生物类侵害，包括病原细菌、真菌、病毒及线虫等，是重要的植物病害防治菌种资源。因此植物内生真菌代谢物具有环境友好性，对靶标生物不易产生抗药性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供具有植物毒活性的产黄青霉属真菌及其制备方法和应用。本专利技术从植物体内分离出菌株，并将菌株的代谢物作用于其他植物。一种具有植物毒活性的产黄青霉属真菌，菌株为产黄青霉属Penicillium Chrysogenum真菌；该菌株F18已于2013年4月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编是100101，保藏编号为CGMCC No. 7451；菌株F18属产黄青霉属真菌Penicillium Chrysogenum，具辐射状皱纹，边缘菌丝体白色，质地绒状，分生孢子结构大量，蓝绿色，有些许浅黄色渗出液和可溶性色素，菌落反面呈浅黄褐色。一种具有植物毒活性的产黄青霉属真菌的制备方法，其特征在于该方法先后用酒精、无菌水冲洗红车轴草（Trifolium pratense）叶片，然后在无菌条件下将叶片组织碾碎，加入无菌水，获得红车轴草叶片组织悬浮液，对悬浮液进行系列梯度稀释，得到不同浓度的稀释液，分别取一定体积的不同浓度稀释液，均匀涂抹在细分离马丁氏培养基平板上，将平板在特定的培养条件下培养，待长出肉眼可见的真菌菌落后，挑取适合计数的浓度平板，进行计数，并将所有的菌落在新鲜的马丁氏培养基上纯化，得到纯的真菌菌株后，在低温冰箱做短期或长期保存。本专利技术所述的制备方法中，将红车轴草叶片完全浸入酒精中，充分振荡，然后用无菌水反复冲洗。本专利技术所述的制备方法中，红车轴草叶片组织悬浮液的梯度稀释方法，以10倍体积为单位，用无菌水进行系列稀释，得到浓度梯度为10-1、10-2直至10-8的系列稀释液。本专利技术所述的制备方法中，取一定体积的系列稀释液的方法，从浓度梯度为10-4-10-8的系列稀释倍数中，分别取0.1 ml均匀涂布在马丁氏平板培养基上。本专利技术所述的制备方法中， 马丁氏真菌分离培养基是由K2HPO4·3H2O 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，蛋白胨5g，葡萄糖l0g，琼脂15～20g，水1000mL，自然pH。本专利技术所述的制备方法中，特定培养条件为在马丁氏平板培养基上，28±2℃避光培养。本专利技术所述的制备方法中，选择适合计数的浓度平板方法，在直径为90 mm的培养皿中，肉眼可见的单个分散的菌落数在100-150 CFU。所述的真菌菌株保存方法，短期保存可采用马丁氏斜面培养基划线在4℃下保存，如果做长期保存，可在马丁氏液体培养基和甘油的混合液中在-70℃下保存，马丁氏液体培养基和甘油的体积比为1:1。本专利技术提供的产黄青霉属真菌F18的代谢物对其他植物具有明显的植物毒活性。本专利技术提供的产黄青霉属真菌F18的代谢物对其他植物具有明显的线虫触杀活性。本专利技术的除草剂原材料来源于植物根际土壤，对于环境及植物、人、动物等所有生物无不良影响，而且生产成本低，生产过程简单，不污染环境。本专利技术对于杂草的生物防治、微生物除草剂的开发应用和农产品的无公害生产，具有极其重要的意义，适合于推广应用。本专利技术的线虫触杀物质原材料来源于植物内生真菌，对于环境及植物、人、动物等所有生物无不良影响，而且生产成本低，生产过程简单，不污染环境。本专利技术对于松材线虫和拟松材线虫的防治，对于解决困扰林业发展的松材线虫病，具有极其重要的意义，适合于应用推广。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法，如无特殊说明均为常规方法。实施例1. 利用系列梯度稀释法分离植物根际土壤真菌1、产黄青霉内生真菌的分离从购于兰州种子市场的红车轴草种子中分离菌株F18。其方法如下：1 g种子浸入1体积的酒精中，充分振荡5 min，滤去酒精，用无菌水冲洗后滤去溶液，加入800μL水后将种子研磨至粉末，然后以10倍体积为单位进行系列稀释，直到得到最小浓度为10-8的系列稀释液，从浓度梯度为10-4本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有植物毒活性的产黄青霉属真菌，菌株为产黄青霉属Penicillium Chrysogenum真菌；该菌株F18已于2013年4月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编是100101，保藏编号为CGMCC No. 7451；菌株F18属产黄青霉属真菌Penicillium Chrysogenum，具辐射状皱纹，边缘菌丝体白色，质地绒状，分生孢子结构大量，蓝绿色，有些许浅黄色渗出液和可溶性色素，菌落反面呈浅黄褐色。
【技术特征摘要】
1.一种具有植物毒活性的产黄青霉属真菌，菌株为产黄青霉属Penicillium Chrysogenum真菌；该菌株F18已于2013年4月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编是100101，保藏编号为CGMCC No. 7451；菌株F18属产黄青霉属真菌Penicillium Chrysogenum，具辐射状皱纹，边缘菌丝体白色，质地绒状，分生孢子结构大量，蓝绿色，有些许浅黄色渗出液和可溶性色素，菌落反面呈浅黄褐色。
2.如权利要求1所述的一种具有植物毒活性的产黄青霉属真菌的制备方法，其特征在于该方法先后用酒精、无菌水冲洗红车轴草叶片，然后在无菌条件下将叶片组织碾碎，加入无菌水，获得红车轴草叶片组织悬浮液，对悬浮液进行系列梯度稀释，得到不同浓度的稀释液，分别取一定体积的不同浓度稀释液，均匀涂抹在细分离马丁氏培养基平板上，将平板在特定的培养条件下培养，待长出肉眼可见的真菌菌落后，挑取适合计数的浓度平板，进行计数，并将所有的菌落在新鲜的马丁氏培养基上纯化，得到纯的真菌菌株后，在低温冰箱做短期或长期保存。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于将红车轴草叶片完全浸入酒精中，充...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘权，秦波，金辉，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62
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