一种腐霉属菌种及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种腐霉属菌种（Ｐｙｇｈｉｕｍ　　ｇｕｉｙａｎｇｅｎｓｅ　　Ｓｕ）及其用途，该菌形成的菌落在ＫＰＹＧ培养基上呈放射状与玫瑰花状的混合型，有大量气生菌丝；菌丝无隔分支，较细，孢子囊为球形、卵形或梨形，顶生，顶端有一乳突，泡囊形成于乳突顶端；每个孢子囊可产生８～２４或更多的游动孢子，游动孢子双鞭毛、肾形；有孢子囊层出现象，孢子囊有时直接萌发产生芽管；卵孢子为球形、平滑、满器或几乎满器，有一个藏卵器内产两个卵孢子的现象，这两个卵孢子的发育可以不同步。该菌对自然环境条件的适应范围广，容易培养和保存，灭蚊效果好，不污染环境，不破坏生态平衡。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及腐霉属菌种(Pythium guiyangense Su)及其在灭蚊方面的用途。
技术介绍
农业害虫每年给人类的农业、林业生产带来严重的损失。卫生害虫不但骚扰人群，而且可以传播疾病，威胁人类健康。由于化学农药的专利技术，人们从虫口里夺回了粮食，也控制了媒介昆虫的数量，减少了虫媒传染病的流行。然而长期大量使用化学杀虫剂带来了严重问题。1)环境污染由于化学农药多数不溶于水，进入动、植物体内不易排除，越是高等的动物，农药成分越容易在体内富集(积累到很高的浓度)，对身体造成危害。农药中的重金属残留在土壤中，造成土地变质，农业减产；农产品残毒含量高，出口受阻；2)生态平衡被破坏经过长期进化和相互适应，自然界各种生物的相对数量达到动态平衡。使用化学农药，把害虫和益虫全杀死，使自然界控制害虫的天敌大大减少，害虫数量反弹，造成更大的危害；3)害虫产生抗药性昆虫基因有很强的突变能力。在化学农药的诱导下，昆虫很快就产生抵抗农药毒性的能力，使农药施用的剂量越来越大，甚至农药完全失效。一般来说，一种新农药使用2年，害虫就产生明显抗药性。而开发新的化学杀虫剂要花大量资金和时间(把统计，约1亿美元和10年时间开发一种新农药)。生物防治是采用害虫天敌或可对害虫致病的微生物来控制或杀灭害虫。它有对害虫高度特异性，对非靶生物无毒无害，不污染环境，不破坏生态平衡，不易诱导害虫的抗药性的优点，所以，是很理想的害虫防治方法。无论国际国内，农业害虫的生物防治较之医学昆虫的生物防治要发达很多。医学昆虫的生物防治是薄弱环节。到目前为止，市场上尚没有灭蚊真菌的商品。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述缺点而提供的一种新的腐霉属菌种-贵阳腐霉(Pythium guiyangense Su)。本专利技术的另一目的在于提供该腐霉属菌种在灭蚊方面的用途。一种腐霉属菌种，其形态特征菌落在KPYG培养基上呈放射状与玫瑰花状的混合型，有大量气生菌丝；菌丝无隔分支，较细，孢子囊为球形、卵形或梨形，顶生，顶端有一乳突，泡囊形成于乳突顶端；每个孢子囊可产生8～24或更多的游动孢子，游动孢子双鞭毛、肾形；有孢子囊层出现象，孢子囊有时直接萌发产生芽管；卵孢子为球形、平滑、满器或几乎满器，有一个藏卵器内产两个卵孢子的现象，这两个卵孢子的发育可以不同步。该菌种已于2005年3月7日提交中国典型培养物保藏中心(地址武汉大学)保藏。(一)贵阳腐霉(Pythium guiyangense Su)的分离步骤(1)取贵医花园土壤1000克，加自来水10升，置塑料水桶中浸泡，加1000只白纹伊蚊卵于水中；(2)约一周以后，卵孵化成幼虫，并发育至三龄，幼虫大量死亡悬浮于水面下，取死幼虫，用75％酒精体表消毒，无菌蒸馏水清洗3次，然后置于KPYG2(成分见后)琼脂培养基上，每平板中央放1只死幼虫，将接种后的平板置25℃培养；(3)2～3天后有大量菌丝从幼虫体内长出，菌落在KPYG培养基上呈放射状与玫瑰花状的混合型。有大量气生菌丝；菌丝无隔分支，较细；孢子囊为球形、卵形或梨形，顶生，卵形和梨形的孢子囊，顶端有一乳突，泡囊形成于乳突顶端；每个孢子囊可产生8～24或更多的游动孢子，游动孢子双鞭毛、肾形；有孢子囊层出现象，孢子囊有时直接萌发产生芽管；卵孢子为球形、平滑、满器或几乎满器，有一个藏卵器内产两个卵孢子的现象，这两个卵孢子的发育可以不同步；(4)无菌条件下，切取带菌丝的琼脂块转种至新KPYG2或SFE琼脂培养基上；(5)反复从平板上切取纯的菌丝转种，最后就得到纯化的贵阳腐霉。(二)培养贵阳腐霉采用的琼脂培养基KPYG2琼脂培养基将1.5克蛋白胨、1.5克酵母粉、3.0克葡萄糖、0.025克胆固醇、0.11克无水氯化钙、1.0克玉米油加入水中，加水至1000毫升。SFE(葵花籽培养基)生葵花籽100克加水1000毫升，粉碎，6层纱布过滤，滤液再加水至2000毫升；分装冷冻于-20℃。用时，取出解冻，加水一倍即可以上为液体培养基。固体培养基需按1.5％加琼脂。高温高压消毒后倒在培养皿中，冷却即可。(三)菌种的保种和传代保种用的培养基为KPYG2或SFE两种培养基中的一种。保存方法有3种(1)每周一次，从已长满的平板上切取一块带菌丝的琼脂培养基块转种到新的平板上。(2)用15×200mm的试管，盛琼脂培养基5ml，做成斜面，接种真菌，25℃培养2～3天，倒10ml左右灭菌石蜡油覆盖其上，置25℃保存。3个月转种一次。(3)水保存法。用10×100mm带盖试管，加蒸馏水3ml，亚麻籽3粒，高温消毒，冷却，无菌条件下取2带菌丝的琼脂块(约50mm2)加于其中，加盖，置25℃，半年转种一次。(四)菌种的生态特征菌落在KPYG培养基上呈放射状与玫瑰花状的混合型。有大量气生菌丝；菌丝无隔分支，较细；孢子囊为球形、卵形或梨形，顶生，卵形和梨形的孢子囊，顶端有一乳突，泡囊形成于乳突顶端；每个孢子囊可产生8～24或更多的游动孢子，游动孢子双鞭毛、肾形；有孢子囊层出现象，孢子囊有时直接萌发产生芽管；卵孢子为球形、平滑、满器或几乎满器，有一个藏卵器内产两个卵孢子的现象，这两个卵孢子的发育可以不同步。(五)菌种的培养特性(1)培养温度5℃～35℃，最适温度25℃～27℃；(2)培养pH5～12；最佳范围为9～11。对照腐霉属的特征(《中国真菌志)》第55页)，本真菌按形态结构应该属于腐霉属。由于其综合特征与已经描述的腐霉属真菌有明显的不同，因此应该是尚未认识的新种，特根据首先发现的地名命名为贵阳腐霉(Pythiumguiyangense Su)。本专利技术的贵阳腐霉对对温度、pH等自然环境条件的适应范围广，对不良环境的耐受力强，容易培养和保存及工业化生产，生产成本低，灭蚊效果好，经多种动、植物测试证实其无毒无害，对非靶生物是安全的。不污染环境，不破坏生态平衡。具体实施例方式本专利技术的腐霉属菌种贵阳腐霉(Pythium guiyangense Su)的分离方法(1)取贵医花园土壤1000克，加自来水10升，置塑料水桶中浸泡，加1000只白纹伊蚊卵于水中；(2)约一周以后，卵孵化成幼虫，并发育至三龄，幼虫大量死亡悬浮于水面下，取死幼虫，用75％酒精体表消毒，无菌蒸馏水清洗3次，然后置于KPYG2琼脂培养基上，每平板中央放1只死幼虫，将接种后的平板置25℃培养；(3)2～3天后有大量菌丝从幼虫体内长出，菌落在KPYG培养基上呈放射状与玫瑰花状的混合型。有大量气生菌丝；菌丝无隔分支，较细；孢子囊为球形、卵形或梨形，顶生，卵形和梨形的孢子囊，顶端有一乳突，泡囊形成于乳突顶端；每个孢子囊可产生8～24或更多的游动孢子，游动孢子双鞭毛、肾形；有孢子囊层出现象，孢子囊有时直接萌发产生芽管；卵孢子为球形、平滑、满器或几乎满器，有一个藏卵器内产两个卵孢子的现象，这两个卵孢子的发育可以不同步；(4)无菌条件下，切取带菌丝的琼脂块转种至新SFE琼脂培养基上；(5)反复从平板上切取纯的菌丝转种，最后就得到纯化的贵阳腐霉。取在SFE琼脂培养基上生长6天的贵阳腐霉，用打孔器(为了保证琼脂块的面积规范)取带菌丝琼脂块，每块面积约200mm2，取容积为200ml的白色塑料杯，每杯盛自来水100ml，加琼脂块2块，2～3龄蚊幼虫25只，4％本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种腐霉属菌种（ＰｙｔｈｉｕｍｇｕｉｙａｎｇｅｎｓｅＳｕ），其特征在于：菌落在ＫＰＹＧ培养基上呈放射状与玫瑰花状的混合型。有大量气生菌丝；菌丝无隔分支，较细，孢子囊为球形、卵形或梨形，顶生，顶端有一乳突，泡囊形成于乳突顶端；每个孢子 囊可产生８～２４或更多的游动孢子，游动孢子双鞭毛、肾形；有孢子囊层出现象，孢子囊有时直接萌发产生芽管；卵孢子为球形、平滑、满器或几乎满器，有一个藏卵器内产两个卵孢子的现象，这两个卵孢子的发育可以不同步。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：苏晓庆，
申请(专利权)人：贵阳医学院，
类型：发明
国别省市：52[中国|贵州]