赋予宿主抗病性的新菌株及细菌细胞组合物制造技术

本发明专利技术提供了包含具有产生丁酸能力的溶纤维丁酸弧菌（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ　　ｆｉｂｒｉｓｏｌｖｅｎｓ）细胞、其培养物或其提取物的新细菌细胞组合物、以及使用其抑制癌发生的方法、免疫刺激的方法、预防或治疗病原体的方法、预防或治疗炎性肠病的方法和预防或治疗变应性疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含具有高丁酸产生能力的溶纤维丁酸弧菌(Butyrivibriofibrisolvens)(下文中也称为B.fibrisolvens)细胞并且在抑制癌发生、提高免 疫、预防和治疗致病性感染、预防和治疗炎性肠病以及预防和治疗变应性 疾病中有用的新型细菌细胞组合物。
技术介绍
近年来，报道了使用乳杆菌属(Lactobacillus)、双歧杆菌属 (Bifidobacterium)等具有高乳酸产生能力的益生菌制剂(专利文献l)， 并且它们中的许多已经上市。制剂的基本功能是调节肠的功能。当宿主摄 取制剂时，由于制剂中包括的产乳酸菌林产生乳酸，所以降低了肠道中的 pH。因此，认为降低了在该低pH环境下不能生长的不利细菌数量，并作 为其结果显示为调节肠功能。益生菌剂通过此微生物功能赋予宿主例如健 康改善和疾病^^抗效果的一般观念得到社会上的广泛接受，并且效果也得 到认可。根据本专利技术的益生菌剂是指对动物和人健康显示出有用活性的有 活力微生物。最近，不仅报道了由乳酸细菌(lactic acid bacteria)产生的乳酸，而 且报道了下列事实，即乳酸细菌通过肽聚糖等蛋白质对宿主具有免疫刺激 活性，其中所述的肽聚糖等蛋白质包含在所提供的微生物细胞自身，并且 也^^艮道了对某些特定细菌显示窄范围抗菌活性的细菌素(非专利文献l)。此外，通过人和动物中的肠发酵产生的短链脂肪酸引起了注意。对于 短链脂肪酸，它们表现出降低肠道中的pH的功能、促进肠运动(非专利 文献2)以及促进Na吸收等的效果。在短链脂肪酸中，丁酸尤其引起了注意。作为其功能，其显示为是结肠上皮细胞重要的能量源(非专利文献3)， 并且其赋予宿主非常有用的效果例如其抗癌活性(非专利文献4)，以及 其促进肠粘膜细胞分化的效果。然而，当丁酸直接经口施用时，其在特征性气味和安全性上存在问题。 因此，为了使如此重要的生理学活性物质更加有效地作用于宿主，使其在 宿主肠中小量地产生并持续吸收而非进行直接的经口腔施用是有效的。作为使用微生物的肠内丁酸浓度的促进剂，已经公开了那些使用嗜酸 專L杆菌(Z^rcto6tfc///ws )和/或长双歧杆菌(5诉^fo6fl"eWw附to/lg"/M)细胞作为有效成分的促进剂(专利文献2)。然而，文献中没有对其关于实际疾病效果的描述，并且施用细胞对疾病的抵抗程度也不清楚。同样地，也公开了使用丁酸梭菌(C7<w/riV//"/fJ 6w印r/c"w)(下文也称 为C. 6"0^'c"附)作为具有产生丁酸能力的微生物的方法(非专利文献5)。 才艮据此已知文献，已经作为产丁酸细菌私改市场的丁酸梭菌能够调节肠功 能。然而，其在抑制癌前病变细胞的效果方面存在如下问题，即单用^L生 物效果低，因此其需要与特定基质一起施用来获得足够效果(非专利文献 6)。同样地，作为对以相同方式进行的对炎性肠病的预防效果的研究结果， 也存在单用微生物效果低的问题，此外，这些文献没有清楚地描述使用溶纤维丁酸弧菌作为益生菌的示 例性方法，并且其中也没有表明其效果。基于上述，大量注意力已指向具有对宿主更高的改善健康、抗癌和免 疫刺激功能、因而具有高疾病抵抗活性并且也具有产生丁酸能力的细菌菌 林。专利文献l: JP-A-2002-306125 专利文献2: JP-A-10-84909非专利文献1: Kawai等人Cwr/v尸wte/汰jP印/L Sd， 2004， 5(5)， 393-8， "The circular bacteriocins gas sericin A and circulacin A"非专利文献2: Cherbut， C.等人,y4附m'cfl" Jo"mfl, ^P/r拜V^ gv， 1998,275， G1415 -G1422, "Short-chain fatty acids modify colonic motility through nerves and polypeptide YY release in the rat"非专利文献3: Cummings， J.H.， GW, 1981,22,763 -779， "Short- chain fatty acids in the human colon"非专利文献4 Hague, A.等人，Gfl^wewten /ogy， 1997， 112， 1036 -1040，"Butyrate acts as a survival factor for colonic epithelial cells: further fuel for the 7i Wvo versusvf.加debate"非专利文献5: Kanauchi O.等人，C"/ro尸/r"r肌Dm" 2003， 9(4)， 333-346， "Modification of intestinal flora in the treatment of inflammatory bowel disease"非专利文献6: Nakanishi S.等人，Micro6"/: /imim""o/" 2003， 47(12)， 951 -958， "Effects of high amylose maize starch and Clostridium butyricum on metabolism in colonic microbiota and formation of azoxymethane-induced aberrant crypt foci in the rat colon",本专利技术的公开 本专利技术解决的问题本专利技术的目的是提供新分离的具有抑制癌发生效果、免疫刺激效果、 病原体感染的预防和治疗效果、预防和治疗炎性肠病效果以及变应性疾病 的预防和治疗效果的溶纤维丁酸弧菌的细菌细胞。另外，由于细菌菌林具 有高丁酸产生能力，并且能够用作益生菌剂，所以其进一步的目的是提供 抑制癌发生的方法、用于免疫刺激的方法、预防和治疗病原体的方法、预 防和治疗炎性肠病的方法以及预防和治疗变应性疾病的方法。解决问题的方法
本专利技术的专利技术者进行了大量研究来探寻具有进一步改善人和动物健 康、抗癌和免疫刺激功能、并且也具有安全且可以费用不高地提供的在肠中产生丁酸的益生菌制剂。他们发现溶纤维丁酸弧菌具有此类功能，从而 完成了本专利技术。即，本专利技术显示如下。(1) 以保藏号FERM BP-10463保藏于独立行政法人产业技术综合研究 所专利生物保藏中心的溶纤维丁酸弧菌MDT-1林及其突变抹。溶纤维丁酸弧菌MDT-1株及其突变林优选作为益生菌剂，并且具有 高的产丁酸能力。(2) 细菌细胞组合物，其包含至少一种属于丁酸弧菌属(5m印Wv幼/7V ) 微生物的细菌细胞、其培养物或其提取物。(3) 根据(2)的细菌细胞组合物，其中所述属于丁酸弧菌属的微生物 是溶纤维丁酸弧菌。(4) 根据(3)的细菌细胞组合物，其中所述的溶纤维丁酸弧菌为属于I型 溶纤维丁酸弧菌(具有高丁酸产生能力的类型)的菌林。(5) 根据(3)的细菌细胞组合物，其中所述的溶纤维丁酸弧菌为以保藏号 FERM BP-10463保藏于独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏 中心的本文档来自技高网...

【技术保护点】
以保藏号ＦＥＲＭ　　ＢＰ－１０４６３保藏于独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心的溶纤维丁酸弧菌（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ　　ｆｉｂｒｉｓｏｌｖｅｎｓ）ＭＤＴ－１株，以及其突变株。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：三轮岳宏，渡边宏，石原守，日野常男，浅沼成人，
申请(专利权)人：明治制果株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]