水产品中副溶血弧菌的PCR-ELISA检测方法技术

一种水产品中副溶血弧菌的ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ检测方法，是由提取标本ＤＮＡ、ＰＣＲ反应、ＥＬＩＳＡ反应和结果检测四个步骤实现的。本发明专利技术通过提供副溶血弧菌ｔｌｈ、ｔｄｈ两组特异性的地高辛标记引物、区分两个基因的生物素标记的探针以及用于定量的含有ｔｌｈ基因特定序列的质粒，进而对水产品中副溶血弧菌进行检测。本发明专利技术可在９６孔酶标板中进行，所提供的方法成本低廉、特异性好、灵敏度高，适用于对副溶血弧菌进行大规模、高通量的检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及水产品中微生物的安全检测技术，是一种PCR-ELISA检测并 定量水产品中副溶血弧菌的方法。
技术介绍
副溶血弧菌是一种重要的食源性致病菌，主要存在于近海岸的海水、 海水沉积物和鱼类、贝类等海产品中，能引起急性肠胃炎和原发性败血症。 1992年至2001年食源性疾病监测网(包括13个省份)的数据显示，副溶 血弧菌引起的疾病暴发率位居微生物性食源性疾病之首。另外副溶血弧菌， 也是威胁海水养殖业的主要病原菌之一。副溶血弧菌可产生多种溶血毒素，有热稳定直接溶血素(Thermostable direct hemolysin, TDH)、热不稳定溶血素(Thermolabile hemolysin, TLH) 和相对热稳定直接溶血素(TM-relatedhemolysin， TRH)。大量的流行病学 研究表明，几乎所有的临床分离林都可产生神奈川现象(KP+)，即在特殊的 血琼脂培养基上菌落周围有一条溶血环。这种现象是由分离抹产生的TDH引 起的，因而TDH被认为是该菌的一种主要的毒力因子，W力基因可用于检测 致病性副溶血弧菌。日本科学家Hatsumi等于1985年研究发现无论是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水产品中副溶血弧菌的ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ检测方法，包括ＤＮＡ模板的制备、ＰＣＲ反应、特异探针进行ＥＬＩＳＡ反应和结果的检测，其特征在于：　（１）、ＤＮＡ模板的制备：　ａ、待测标本无菌操作：贝类取含内脏的全部贝肉、鱼类取鱼体不同 部位、甲壳类取包括鰓及肠的部分或整体；称取待测标本２５ｇ，加入３．５％无菌ＮａＣｌ溶液２２５ｍＬ，均质后，取１０ｍＬ加入９０ｍＬＮａＣｌ浓度３．５％的改进碱性蛋白胨水中。置于３７℃恒温培养箱，１２０ｒ／ｍｉｎ增菌培养７ｈ；　ｂ、取１． ０ｍＬ增菌后的细菌培养物，置于１．５ｍＬ离心管中，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃去上清液，加入１...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周德庆，赵峰，刘琦，柳淑芳，苏来金，曹慧慧，马丽萍，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]