一种前列腺癌症早期的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种前列腺癌症早期的原位杂交检测试剂盒，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物、增效剂，其中所述的杂交探针序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示。本发明专利技术还提供了一种ＰＣＡＤＭ－１基因的原位杂交检测方法，该方法包括以下步骤：ａ．将试剂盒中的杂交探针与底物中待测ＲＮＡ接触，形成杂交复合体；ｂ．检测ａ步骤得到的杂交复合体。本发明专利技术另外还提供了试剂盒在制备检测前列腺癌症早期疾病药物中的应用。本发明专利技术优点在于：本发明专利技术提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点。本发明专利技术的检测方法操作方便、简单，能在区级以上医院普遍使用和推广。

【技术实现步骤摘要】
一种前列腺癌症早期的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用
本专利技术涉及一种试剂盒，具体地说关于一种前列腺癌症早期的原位杂交检 测试剂盒及其检测方法和应用。
技术介绍
根据国内外权威机构提供的资料，我国每年癌症的新增人数170万，死亡 人数近160万，患者600万，全球每年新增癌症患者800万，死亡人数接近800 万，患者约有8400万人，到2020年以上人数将翻一番，这是一组可怕的数字。2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等多家单位做了一个年度 报告，"认为人类在抗癌大战中是失败"，也就是说癌症死亡率没有降低，其列 举出造成抗癌大战失败的几个因素是1.肿瘤细胞异质性；2.肿瘤细胞耐药性； 3.抗癌药物设计思路不完善等。同时，该报告中亦提出应重新审视现有诊治癌 症的措施。本专利技术人在研究中发现，导致癌症死亡率不降的另二个重要原因 是l.不能做到真正的早期诊断；2.转移的病理机制不清楚。依照传统的医学影像及和其它生化(如蛋白标记物)指标来诊断癌症，认为占 位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断(更小些有时无症状体 征)，这一概念值得认真讨论。影像医学的2公分以下癌块属早期这 一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度，l公分的肿块约有一亿 个肿瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿 瘤细胞，从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病理演变过程相当长，可能是一年或两年、甚至三年以上，很难证实的 是在这个过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶。临床上已 证实 一旦形成肿块的同时，其他癌细胞通过不同途径迁移到其他部 位克隆生长； 一旦切除原发灶后，其他器官复发灶或多发癌块灶先后 形成或转移。因此，在临床上以2公分以下的肿块大小来界定早期与 否，不够严谨(有些病例，在发现原发病灶时，同时发现转移病灶， 不在我们表述的内容中)，这时已经是晚期了，这是导致癌症死亡率 不降的真正原因。随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研 究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊 断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)或突破血管壁早期转移时， 就能做到早期预测诊断。几十年来，PSA在前列腺癌的诊断和治疗中具有划时代的意义。 然而，近些年来越来越多低丰度PSA前列腺癌被诊断，PSA对前列腺 癌诊断的敏感性和特异性越来越受到质疑。Stamey等对1317例前列 腺癌根治患者分析发现，1983-1988年间与1999-2003间相比直肠 指诊阳性率由91%降到17%;患者平均年龄由64岁降至59岁；肿瘤 的体积由5. 3cm降至2. 4cm;平均PSA水平由25ng/ml降至8nh/ml; 前列腺体积由44g增至53g。研究者认为，1983-1988年间PSA前列 腺癌密切相关，而1999-2003年间PSA仅与前列腺增生(体积)相关。 Bader等报告1493例前列腺癌根治术患者中，有相当部分的前列腺 癌患者PSA水平低(8ng/ml)，而且这部分病人与前列腺增生难以鉴 别。2004年Stearns ME等采用逆转录聚合酶链反应、DAN蛋白结合测定法、免疫印迹等方法证实，PCADM-1是前列腺癌相关诊断标记物 1。 PCA匿-1只在前列腺癌组织表达，在BPH、高分级前列腺上皮内瘤 和精囊组织无表达，在其它肿瘤均无表达，而且PCADM-1表达的强度 随着Gleasson评分增加而增强(+1——+ 5)。采用酶联免疫吸附方法 检测尿液，结果表明，PCADM-1是前列腺癌特异的尿中肿瘤标记物。 他们对533例患者(包括前列腺癌、BPH、有尿路症状患者和正常对 照)尿中PCADM-和血清PSA的比较研究结果表明，尿PCA匿-1检测 敏感性为79%,特异性为83%，而血清PSA检测敏感性〈50%特异性为 55%。目前对PCADM-1基因的研究都采用高通量基因芯片技术，而这些 方法多用于科研方面，不适应临床应用，特别是个性化的应用在我国 现阶段条件尚不成熟。根据现有的文献资料PCADM-1基因的检测技术 未见报道。原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术 结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的 技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条 件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫 细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分 子。中国专利文献CN1556221公开了"IC53基因及其相关产物诊断和治疗结肠 癌的用途及一种诊断结肠癌的试剂盒"。中国专利文献CN1769485公开了 "栉 孔扇贝病原类立克次氏体的原位杂交检测方法及其试剂盒"。中国专利文 献CN1556410公开了 "一种鱼类病毒的检测试剂盒及其检测方法"。中国专利文献CN1680597公开了"一种用于定量检测丙型肝炎病毒(HCV)的荧光定量PCR 试剂盒"。中国专利文献CN2918435，公开了 "一种检测肥胖相关基因SNP的寡 核苷酸芯片及试剂盒"。但是，关于PCADM-1基因的原位杂交检测试剂盒及其 检测技术未见报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种前列腺癌症早期的原位杂交检测 试剂盒及其检测方法和应用，能够检测早期前列腺癌，或者在治疗后能及早地 预测转移复发状况。为了解决上述问题，本专利技术提供了， 一种前列腺癌症早期的原位杂交检测 试剂盒在制备检测前列腺癌症早期疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交 探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQIDNO.l所示。(需要说明的是SEQ ID NO.l序列中第126中碱基可以是g或c或t。第391中碱基可以是g或c 或t。第662中碱基可以是g或c或t。)PCADM-1基因序列见SEQ ID NO. 1， PCADM-1基因的核苷酸序列长度 是865bp， CDS是1…865bp。作为可选的技术方案，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.l所示的RNA 序列。作为可选的技术方案，所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。 作为可选的技术方案，所述的放射性核素选自3H、 35S、 1251或3￥中的一种。作为可选的技术方案，所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性 磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。作为可选的技术方案，所述的非放射性标记物优选自地高辛。 作为可选的技术方案，所述的试剂盒还包括增效剂，所述的增效剂是碱性 磷酸酶抗体。本专利技术还提供了一种前列腺癌症早期的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQIDNO.l所示，所述的标记物选自放 射性核素或非放射性标记物。本专利技术还提供了一种PCADM-1基因的原位杂交检测方法，该方法包括以 下步骤a、 将试剂盒中的杂交探针与底物中待测RNA接触，形成杂交复合体；b、 检测a步骤得到的杂交复合体。作为可选的技术方案，a步骤中形成杂交复合体的条件为核酸杂交的温 度为42。C;核酸杂交的时间为16—24小时，所述的底物选用血液细胞标本或 组织细胞标本。本专利技术的检测试剂盒是采用核酸杂交技术和组化免疫方法相结合，以 P本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种前列腺癌症早期的原位杂交检测试剂盒在制备检测前列腺癌症早期疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：裘建英，张云福，
申请(专利权)人：芮屈生物技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]