选自下组的核酸探针： －ＴＧＧＣＡＧＣＴＴＡＡＧＴＴＴ －ＣＣＴＡＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧ －ＧＣＧＡＧＴＧＴＧＧＡＡＣＣＴ －ＡＡＧＡＣＡＧＧＣＧＧＧＣ， 或其互补序列。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及测定个体的II类HLA基因型的方法，尤其是对多态性HLA-DR基因的检测。该方法特别可用于移植中的HLA分型、医学诊断、法医等。HLA(人淋巴细胞抗原)系统是由人体主要组织相容性复合物编码的，它通过区分自我和非自我在个体间器官移植中产生很大的限制。另外，大量疾病的素因中涉及HLA因子。因此HLA系统的抗原用于确定器官移植中供体和受体间的特征(F.H.BACH和J.J.VAN ROOD，《新英格兰医学杂志》，295，806-13页(1976))以及确定对某些疾病的个体素质的分型方法中。从遗传角度看HLA系统已被充分表征，它由位于6号染色体短臂上约2厘摩(CM)空间中的一系列有或多或少多态性的基因座组成。该系统中的三个基因座(HLA-A、HLA-B和HLA-C)编码一类共显性表达的同种抗原(I类)。另一区域(HLA-D)(它实际上含有几个基因)编码具有相当程度多态性的共显性表达的第二类同种抗原(II类)。特别控制补体系统C2、C4成分和Bf因子的几个其他基因座也属于HLA系统(III)类。器官移植的成功大多取决于受体和供体间的HLA一致性(I类和II类)，因此HLA的分型一定要尽量准确。这一要求主要涉及肾移植(P.J.Morris和A.Ting(1982)，《免疫学综述》66，103-G.Opelz(1989)《移植进展》，21，609-E.L.LAGAAIJ，P.H.Hennemann，M.Ruigrok等(1985)，《新英格兰医学杂志》，321，701)和骨髓移植(P.G.Beatty，R.A.Clift，E.M.Mickelson等(1985)《新英格兰医学杂志》313，765-J.M.Hows和B.A.Bradley(1990)《英国血液学杂志》76.1)。对于骨髓移植来说，II类HLA抗原的完全一致性是移植成功的关键因素，即避免移植物排斥或患移植物-宿主疾病(P.G.Beatty，J.Hanson，G.M.Long-ton等(1991)《移植》51，443-R.C.Ash，J.T.Casper，C.R.Chitamber等(1990)《新英格兰医学杂志》322，485-C.Anasetti，D.Amos，P.G.Beatty等(1989)《新英格兰医学杂志》320，197)。HLA-D区基因表达产物的多态性通常用血清学技术在分析HLA基因细胞表面表达产物的同种抗血清基础上来确定(J.J.VanRood和A.Van Leeuwen(1963)《临床调查杂志》42，1382-J.J.VanRood，A.Van Leeuwen，J.J.Koning，A.B.Van Oud Ablas(1975)《组织抗原》5，73)，其准确性和可重复性取决于所供血清的批次。但既使在最好的条件下，也有大量的等位基因不能由这些血清学技术检测到。血清学分析的这种局限性主要由以下原因造成缺乏单特异性同种抗血清，不能完全分辨紧密相关的特异性间的交叉反应性(例如DR3和DRw13)，或者II类HLA分子在细胞(例如白血病细胞)表面的表达改变。利用分子生物学现在了解到存在比以前设想的多得多的HLA基因，尤其是许多不同的等位基因。这种多样性现由不同基因和等位基因的DNA序列来表征。根据HLA命名委员会的最近报道(见，HLA系统因子的WHO命名委员会(1990)《免疫遗传学》31，131-和J.G.Bodmer，S.G.E.Marsh，E.D.Albert，W.F.Bodmer，B.Dupont，H.A.Erlich，B.Mach，W.R.Mayr，P.Parham，T.Sasazuki，G.M.T.Schrender，J.L.Strominger，A.Svejgaard和P.I.Terasaki(1991)《组织抗原》37，97)，II类HLA的多态性分布如下DRB1座47个等位基因，DRB3座4个等位基因，DRB4座1个等位基因，DRB5座4个等位基因，DQB1座17个等位基因，DQA1座13个等位基因，DPB1座21个等位基因，DPA1座4个等位基因。许多这些血清学分析遗漏的等位基因只有在DNA水平才能被识别。血清学分型的局限性可由DR4的血清特异性得到说明，它现在被分成11个亚型(DRB1*0401-0411)(见，J.G.Bodmer，S.G.E.Marsh，E.D.Albert，W.F.Bodmer，B.Dupont，H.A.Erlich，B.Mach，W.R.Mayr，P.Parham，T.Sasazuki，G.M.T.Schreuder，J.L.Stro-minger，A.Svejgaard和P.I.Terasaki(1991)《组织抗原》37，97)，这些只有在DNA序列水平才能识别。与之相似，DRw6的特异性可用几种同种抗血清进一步分为DRw13和DRw14，实际上它含有10个等位基因序列(DRB1*1301-1305和DRB1*1401-1405)(见上文引用的Bodmer J.G.的文章)，这些也只有用DNA序列进行基因型分析才能识别。基因型分析是一种在基因水平直接分析II类HLA系统多样性的新方法。基因型分析基于分子杂交的理论，提出的第一种方法是所谓的“RFLP”技术，即利用限制性酶将DNA切成片段，并分析由这些酶产生的特异DNA片段的大小(见，C.T.Wake，E.O.Long和B.Mach(1982)《自然》300，372-J.Bhme，M.Andersson，G.Andersson，E.Miller，P.A.Peterson和L.Rask(1985)《免疫学杂志》135，2149-J.L.Bidwell，E.A.Bidwen，D.A.Savage，D.Middle-ton，P.T.Klouda和B.A.Bradley(1988)《移植》45，640)。RFLP只能使部分血清学方法检不到的等位基因差异得以识别，这种技术仍有局限性。实际上，只有差别核苷酸位于分析中所用限制酶的识别位点时该方法才能识别带有不同序列的等位基因，因此将有大量II类HLA等位基因不能被这种分析方法所识别。而且，RFLP分析仅仅指出编码序列中的修饰，而不能提供关于这种修饰的确切性质的信息。最后，这一技术费时费力，因为它涉及相当大量的核酸用数种限制酶消化、电泳以及转移至滤膜。DR1、DR4、DRw8、DRw11或DRw13特异性的亚型不能由RFLP检测到，也可以说明RFLP技术的局限性。已提出了一种II类HLA基因型分析的新技术，该方法称为“用寡核苷酸分型”。由于对II类HLA基因的DNA序列的了解，尤其是迄今最具多态性的DRβ基因的DNA序列，人们可以利用对该基因序列中给定位置特异的寡核苷酸作为杂交方法分析多态性的示踪物。选择这些寡核苷酸使其具有最大可能的报道性，能根据序列不同鉴别不同的等位基因。实际上可以检测到任何序列差异，甚至单一核苷酸的差异。利用寡核苷酸的分型技术可以应用于DNA，如Angelini等的文章中所述，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83卷，4489-4493页(1986)，也可以应用于RNA(见，C.Ucla，J.J.Van Rood，J.Gorski和B.Mac本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：P·A·阿里伯特，P·克洛斯，B·F·梅彻，B·F·曼德兰德，JM·蒂尔西，
申请(专利权)人：比奥美希奥公司，
类型：发明
国别省市：
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