采用氧化还原反应的测定方法技术

提供一种用氧化还原反应测定样品中待测物的方法，可得到可靠性优异的测定值。在上述氧化还原反应之前，向样品中加入四唑＿＿化合物以排除样品中所含还原物质的影响；之后，生成由上述待测物由来的还原物质或氧化物质，由氧化还原反应测定其量，由该测定值确定上述待测物的量。作为四唑＿＿化合物，例如可以使用２－（４－碘苯基）－３－（２，４－二硝基苯基）－５－（２，４－二磺苯基）－２Ｈ－四唑＿＿盐。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用氧化还原反应测定样品中待测物的方法。此前，例如用氧化还原反应测定样品中待测物的量的方法已广泛被采用。例如，也适用于在生化分析和临床检查中的糖基化蛋白质的测定。例如，血液中的糖基化蛋白质，特别是红细胞中的糖基化血红蛋白(HbAlc)，由于它能反映生物体血糖值过去的情况，故在糖尿病诊断及治疗中是重要的指标。例如，红细胞中的糖基化蛋白质可用氧化还原反应按下述方法进行测定。首先，配制使红细胞溶血的样品，用适当的蛋白酶处理该溶血样品后，再用果糖基氨基酸氧化酶(以下称作FAOD)进行处理，使生成过氧化氢。该过氧化氢的量与红细胞中的糖基化蛋白质的质量相对应。然后，往该样品中添加过氧化物酶(以下称作POD)和还原剂，该POD作为催化剂在上述过氧化氢和上述还原剂之间引起氧化还原反应。此时，如果采用氧化能使能生色的还原剂作为这类还原剂，则可通过测定其生色来测定上述过氧化氢量，结果可知红细胞中的糖基化蛋白质量。然而，在血液中通常存在抗坏血酸(AsA)和胆红素等各种还原物质，还在红细胞中存在谷胱甘肽(GSH)等各种还原物质。由于这些还原物质既可使上述过氧化氢还原，又阻碍上述氧化还原反应，能把上述还原剂生色后还原而使其退色。因此，要准确测定红细胞中糖基化蛋白质量是困难的，这是存在的问题。另外，由于各种样品含有的还原物质浓度不一定，所以，测定的精确度差，这也是存在的问题。为了避免这些问题，可采用例如往上述样品中添加各种氧化剂的方法。例如，在特开昭56-151358号公报中公开了采用碘酸、过碘酸等卤氧化物作为氧化剂的方法，在特开昭57-13357号公报、特开昭57-161650号公报、特开昭59-193354号公报、特开昭62-169053号公报、特开平3-30697号公报中公开了使用钴、铁、铈等金属配合物作为氧化剂的方法。然而，即使在用这些氧化剂的场合，也不能充分避免对上述测定的影响，特别是，在待测物为红细胞内成分时，上述氧化剂使效果降低。因此，本专利技术的目的是提供一种采用氧化还原反应来测定样品中待测物的测定方法，该法可得到可靠性优异的测定值。为了达到上述目的，本专利技术的测定方法是用氧化还原反应来测定样品中待测物的测定方法，其特征在于，在上述氧化还原反应之前，先往样品中添加具有四唑环结构的四唑鎓化合物，以排除样品中所含的还原物质的影响，然后，使上述待测物产生还原物质或氧化物质，用氧化还原反应测定其含量，根据该测定值来确定上述待测物的量。上述的四唑鎓化合物为含四唑环结构的化合物。本专利技术人进行了深入的研究，结果弄清，当采用先有技术的方法时，例如，并不是不能排除上述GSH和AsA那样的低分子量还原物质的影响，而是不能排除蛋白质那样的高分子量还原物质的影响。因此，本专利技术人发现，采用上述四唑鎓化合物，例如，不仅能排除上述低分子量还原物质的影响，而且也能排除其他还原物质的影响，从而完成了本专利技术的测定方法。按照本专利技术的测定方法，由于可以更可靠地求出待测物的量，所以，在临床医疗等中的各种检查是有用的。在本专利技术的测定方法中，上述四唑鎓化合物优选是在其四唑环上至少在两处具有环状结构的取代基，更优选是在三处具有环状结构取代基。如上所述，当上述四唑鎓化合物的四唑环上至少在两处具有环状结构取代基时，优选是在上述四唑环的2位及3位上具有上述的取代基。另外，当四唑鎓化合物在三处具有环状结构取代基时，优选是在上述四唑环的2位、3位及5位上具有上述的取代基。在本专利技术的测定方法中，优选是至少有两处的环状结构取代基的环状结构为苯环。另外，作为苯环以外的环状结构取代基，可以举出，例如，在环状骨架上含有S或O，并且是共振结构的取代基，例如，噻吩基和噻唑基等。在本专利技术的测定方法中，上述四唑鎓化合物优选是在其四唑环上至少在三处具有环状结构的取代基，并且在上述环状结构取代基中至少有两个环状结构取代基的环状结构为苯环。在本专利技术的测定方法中，优选是至少一个环状结构取代基具有官能团，更优选是具有多个上述的官能团。作为上述官能团，优选是吸电子性官能团，例如，可以举出，卤原子、醚基、酯基、羧基、酰基、亚硝基、硝基、羟基、磺基等。其他的，例如，除了上述官能团以外，还可以举出，含氢过氧基、氧基、环氧基、环二氧基、桥氧基等含氧的特性基团，以及含有巯基、烷基硫代、甲基硫代甲基、硫代桥氧基、亚磺基、苯磺酰基(benzenesnlfonyl)、苯磺酰基(phenylsulfonyl)、对甲苯磺酰基(p-toluenesulfonyl)、对甲苯磺酰基(p-tolylsulfonyl)、甲苯磺酰基、氨磺酰基、异氰硫基等含硫的特性基团。在这些吸电子官能团中，理想的是硝基、磺基、卤素原子、羧基、羟基、甲氧基和乙氧基。另外，除上述吸电子官能基以外，例如，还可以举出苯基(C6H5-)、苯乙烯基(C6H5CH＝CH-)等不饱和烃基等。还有，上述官能团也可以解离为离子。在本专利技术的测定方法中，上述四唑鎓化合物优选是在其四唑环的2位及3位上具有苯环，并且在这些苯环中的至少一个具有选自卤素原子、羧基、硝基、羟基、磺基、甲氧基及乙氧基中的至少一个官能团。上述两个苯环也可以具有该官能团。在上述苯环中，可在其任一个位置(邻、间、对)上具有该官能团。另外，对官能团的数目没有特别限制，并且既可以是同一种官能团，也可以是不同的官能团。在本专利技术的测定方法中，上述四唑鎓化合物，例如，是在上述四唑环的2位、3位及5位上具有苯环结构取代基的化合物，可以举出，例如，2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺苯基)-2H-四唑鎓盐、2-(4-碘苯基)-3-(2，4-二硝基苯基)-5-(2，4-二磺苯基)-2H-四唑鎓盐、2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺苯基)-2H-四唑鎓盐、2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基-2H-四唑鎓盐、3，3′-(1，1′-联苯-4，4′-二基)-双(2，5-二苯基)-2H-四唑鎓盐、3，3′-〔3，3′-二甲氧基-(1，1′-联苯)-4，4′-二基〕-双〔2-(4-硝基苯基)-5-苯基-2H-四唑鎓盐〕、2，3-二苯基-5-(4-氯苯基)四唑鎓盐、2，5-二苯基-3-(对二苯基)四唑鎓盐、2，3-二苯基-5-(对二苯基)四唑鎓盐、2，5-二苯基-3-(4-苯乙烯基苯基)四唑鎓盐、2，5-二苯基-3-(间甲苯基)四唑鎓盐以及2，5-二苯基-3-(对甲苯基)四唑鎓盐等。另外，上述四唑鎓化合物不局限于上述那些化合物，除此之外，也可以使用在上述四唑环的两处具有苯环结构的取代基以及在一处具有其他环状结构取代基的化合物，例如，可举出，2，3-二苯基-5-(2-噻吩基)四唑鎓盐、2-苯并噻唑基-3-(4-羧基-2-甲氧基苯基)-5-〔4-(2-磺乙基氨基甲酰基)苯基〕-2H-四唑鎓盐、2，2′-二苯并噻唑基-5，5′-双〔4-二(2-磺乙基)氨基甲酰基苯基〕-3，3′-(3，3′-二甲氧基-4，4′-亚联苯基)二(四唑鎓盐)以及3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基-2H-四唑鎓盐等。另外，也可以使用上述四唑环的两处无苯环结构取代基和一处无环状结构取代基的四唑鎓化合物，例如，可举出，2，3-二苯基-5-氰基四唑鎓本文档来自技高网...

【技术保护点】
用氧化还原反应测定样品中待测物的方法，该测定方法是在上述氧化还原反应之前，往样品中添加具有四唑环结构的四唑＊化合物以排除上述样品中所含的还原物质的影响，然后，使上述待测物产生还原物质或氧化物质，通过氧化还原反应测定其含量，根据该测定值来确定上述待测物的量。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：小森胤树，米原聪，
申请(专利权)人：株式会社京都第一科学，
类型：发明
国别省市：JP[日本]