本案涉及一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，所述的配基为3‑吡咯羧酸的羧基和4‑氨基‑2‑羰基嘧啶的氨基反应后形成的双功能配基。本发明专利技术以3‑吡咯羧酸和4‑氨基‑2‑羰基嘧啶为双功能配基制备新型的疏水性电荷诱导层析介质，引入双功能基团的概念，优化配基的空间排布，提高抗体结合的选择性，因此具有独特的分离性能。
Hydrophobic charge induced chromatography medium with two functional groups
The invention relates to a hydrophobic charge with two functional groups by chromatography media, including chromatography matrix and ligand chromatography, the matrix is a hydrophilic porous microsphere with hydroxyl, bifunctional ligand ligand and the 3 pyrrole carboxylic acid carboxyl and 4 amino formation reaction of 2 amino after the carbonyl pyrimidine. The invention takes 3 pyrrole carboxylic acids and 4 amino 2 carbonyl pyrimidine as dual function ligand to prepare hydrophobic charge induction type chromatography media, introducing the concept of double functional groups, spatial arrangement optimization of ligands, improving the selectivity of antibody binding, so it has unique selectivity.
【技术实现步骤摘要】
具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质
本专利技术涉及一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，属于生物化工领域中的蛋白层析分离技术。
技术介绍
抗体(antibody)是生物体内最重要的免疫物质之一，参与了机体的免疫过程反应。由于抗体和抗原具有高度的亲和性和特异性，被广泛应用于临床医疗领域。单克隆抗体(简称单抗，monoclonalantibody，mAb)作为一类重要的抗体药物，具有特异性强，亲和力高，毒副作用低等优点，用于癌症等重大疾病治疗和免疫诊断等。分离纯化是抗体生产制备的重要环节，下游过程约占抗体药物生产成本的80％，因此开发高效、低成本的抗体纯化新机制和新方法具有重要的意义。层析是目前抗体分离的主要方法，包括亲和层析、离子交换层析、疏水相互作用层析以及混合模式层析等。ProteinA亲和层析是典型代表，选择性好，分辨率高，一步分离即可获得较高纯度的抗体产品，但也存在一些局限，例如成本较高，处理量有限，洗脱pH较低，在线清洗困难等。
技术实现思路
针对现有技术中存在的技术问题，本案提供一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质。为实现上述目的，本案通过以下技术方案实现：一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其中，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，所述的配基为3-吡咯羧酸的羧基和4-氨基-2-羰基嘧啶的氨基反应后形成的双功能配基。优选的是，所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其中，所述层析基质为经粗化处理的二氧化硅微球。优选的是，所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其中，所述的配基为经一缩二乙二醇双缩水甘油醚活化后依次偶联的3-吡咯羧酸和4-氨基-2-羰基嘧啶。一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质的制备方法，其中，包括如下步骤：1)将层析基质抽干后，加入0.5-1.5倍层析基质质量的20％v/v二氧六环、0.3-1.6倍层析基质质量的一缩二乙二醇双缩水甘油醚和0.3-0.7倍层析基质质量的氢氧化钠，40℃搅拌反应10-20小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；2)将活化层析基质和0.1-0.5倍层析基质质量的3-吡咯羧酸以及0.1-0.5倍层析基质质量的氢氧化钠溶液混合，在50℃下搅拌反应8-16小时，得到3-吡咯羧酸偶联的介质；3)取3-吡咯羧酸偶联的介质，分别用体积百分比为30％、70％和100％的乙醇溶液清洗，再用二甲基甲酰胺清洗，加入0.6-1.5倍层析基质质量的二甲基甲酰胺、2-氨基-1,3,5-三嗪和N,N-二环己基碳酰亚胺，50℃振荡10-20小时，得到2-氨基-1,3,5-三嗪活化的介质；4)取2-氨基-1,3,5-三嗪活化的介质，依次用体积百分比为60％和40％的丁酮溶液清洗，去离子水洗涤，加入2-5倍层析基质质量的10mg/ml4-氨基-2-羰基嘧啶溶液，30℃下200rpm水浴摇床中反应12-36小时；最后将介质抽滤，去离子水洗涤，得到具有3-吡咯羧酸和4-氨基-2-羰基嘧啶双功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。优选的是，所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其中，所述其配基密度为50-150mol/ml。优选的是，所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其中，所述2-氨基-1,3,5-三嗪浓度为0.1-0.5g/ml，N,N-二环己基碳酰亚胺浓度为0.6-1g/ml。本专利技术的有益效果是：本专利技术以3-吡咯羧酸和4-氨基-2-羰基嘧啶为双功能配基制备新型的疏水性电荷诱导层析介质，引入双功能基团的概念，优化配基的空间排布，提高抗体结合的选择性，因此具有独特的分离性能。采用一缩二乙二醇双缩水甘油醚活化偶联3-吡咯羧酸，并通过酰胺键与4-氨基-2-羰基嘧啶进一步偶联，所得介质性能稳定，清洗再生方便。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。实施例1取粗化处理的二氧化硅微球10g，加入5g的20％v/v二氧六环、4g的一缩二乙二醇双缩水甘油醚和3g的氢氧化钠，40℃搅拌反应12小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；将活化层析基质和3g的3-吡咯羧酸以及0.1-0.5mol氢氧化钠溶液混合，在50℃下搅拌反应8-16小时，得到3-吡咯羧酸偶联的介质；取3-吡咯羧酸偶联的介质，分别用体积百分比为30％、70％和100％的乙醇溶液清洗，再用二甲基甲酰胺清洗，加入10g的二甲基甲酰胺、2-氨基-1,3,5-三嗪和N,N-二环己基碳酰亚胺，2-氨基-1,3,5-2-氨基-1,3,5-三嗪浓度为0.1g/ml，N,N-二环己基碳酰亚胺浓度为0.6g/ml，50℃振荡12小时，得到2-氨基-1,3,5-2-氨基-1,3,5-三嗪活化的介质；取2-氨基-1,3,5-三嗪活化的介质，依次用体积百分比为60％和40％的丁酮溶液清洗，去离子水洗涤，加入20g的10mg/ml4-氨基-2-羰基嘧啶溶液，30℃下200rpm水浴摇床中反应15小时；最后将介质抽滤，去离子水洗涤，得到具有3-吡咯羧酸和4-氨基-2-羰基嘧啶双功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。配基密度为60mol/ml。实施例2取粗化处理的二氧化硅微球10g，加入8g的20％v/v二氧六环、10g的一缩二乙二醇双缩水甘油醚和4g的氢氧化钠，40℃搅拌反应10小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；将活化层析基质和3g的3-吡咯羧酸以及2g的氢氧化钠溶液混合，在50℃下搅拌反应10小时，得到3-吡咯羧酸偶联的介质；取3-吡咯羧酸偶联的介质，分别用体积百分比为30％、70％和100％的乙醇溶液清洗，再用二甲基甲酰胺清洗，加入10g的二甲基甲酰胺、2-氨基-1,3,5-2-氨基-1,3,5-三嗪和N,N-二环己基碳酰亚胺，2-氨基-1,3,5-2-氨基-1,3,5-三嗪浓度为0.2g/ml，N,N-二环己基碳酰亚胺浓度为0.8g/ml，50℃振荡17小时，得到2-氨基-1,3,5-2-氨基-1,3,5-三嗪活化的介质；取2-氨基-1,3,5-三嗪活化的介质，依次用体积百分比为60％和40％的丁酮溶液清洗，去离子水洗涤，加入20g的10mg/ml4-氨基-2-羰基嘧啶溶液，30℃下200rpm水浴摇床中反应25小时；最后将介质抽滤，去离子水洗涤，得到具有3-吡咯羧酸和4-氨基-2-羰基嘧啶双功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。配基密度为100mol/ml。实施例3取粗化处理的二氧化硅微球10g，加入12g的20％v/v二氧六环、15g的一缩二乙二醇双缩水甘油醚和6g的氢氧化钠，40℃搅拌反应16小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；将活化层析基质和3g的3-吡咯羧酸以及5g的氢氧化钠溶液混合，在50℃下搅拌反应13小时，得到3-吡咯羧酸偶联的介质；取3-吡咯羧酸偶联的介质，分别用体积百分比为30％、70％和100％的乙醇溶液清洗，再用二甲基甲酰胺清洗，加入10g的二甲基甲酰胺、2-氨基-1,3,5-2-氨基-1,3,5-三嗪和N,N-二环己基碳酰亚胺，2-氨基-1,3,5-2-氨基-1,3,5-三嗪浓度为0.5g/ml，N,N-二环己基碳酰亚胺浓度为0.6g/ml，50℃振荡20小时，得到2-氨本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其特征在于，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，所述的配基为3‑吡咯羧酸的羧基和4‑氨基‑2‑羰基嘧啶的氨基反应后形成的双功能配基。
【技术特征摘要】
1.一种具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其特征在于，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，所述的配基为3-吡咯羧酸的羧基和4-氨基-2-羰基嘧啶的氨基反应后形成的双功能配基。2.如权利要求1所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其特征在于，所述层析基质为经粗化处理的二氧化硅微球。3.如权利要求1所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质，其特征在于，所述的配基为经一缩二乙二醇双缩水甘油醚活化后依次偶联的3-吡咯羧酸和4-氨基-2-羰基嘧啶。4.一种如权利要求1所述的具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将层析基质抽干后，加入0.5-1.5倍层析基质质量的20％v/v二氧六环、0.3-1.6倍层析基质质量的一缩二乙二醇双缩水甘油醚和0.3-0.7倍层析基质质量的氢氧化钠，40℃搅拌反应10-20小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；2)将活化层析基质和0.1-0.5倍层析基质质量的3-吡咯羧酸以及0.1-0.5倍层析基质质量的氢氧化钠溶液混合，在50℃下搅拌...
【专利技术属性】
技术研发人员：瞿欢欢，朱至放，
申请(专利权)人：苏州博进生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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