一种熊科动物红细胞保存液及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种熊科动物红细胞保存液，包括：NaCl、NaH2PO4、ATP、葡萄糖、甘露醇、谷胱甘肽。本发明专利技术针对大熊猫血液生理特点，配制四种红细胞保存液，对不同时间点保存液上清游离血红蛋白检测发现：第10天，B3保存液与其他组有差异显著；第20天，B2、B3与其他两组有差异显著；第30天，B2、B3与其他两组有显著性差异。以上结果表明，B3保存液是最佳保存体系。采用ATP检测及2,3‑DPG检测验证B3的保存效果，结果显示B3组ATP及2,3‑DPG含量与B1组有显著性差异，表明B3保存液对大熊猫红细胞保养效果更好。本发明专利技术的保存液可有效保存熊科动物红细胞达30天，可用于熊科动物临床红细胞输注。

A kind of bear family Red Cell Storaging Solution and its application

The invention relates to a Red Cell Storaging Solution of the bear family, including NaCl, NaH2PO4, ATP, glucose, mannitol and glutathione. According to the invention of blood physiological characteristics of giant panda, with four Red Cell Storaging Solution, at different time points to save the supernatant of free hemoglobin detection: tenth days, B3 preservation solution formulaproducing significantly; twentieth days, B2, B3 and the other two groups have significant differences; thirtieth days, B2, B3 and the other two groups significant difference. The above results show that the B3 preservation solution is the best preservation system. The preservation effect of ATP detection and 2,3 detection of DPG B3 verification, the results show that the B3 group ATP and 2,3 content of DPG and B1 group have significant difference, show that the B3 preservation solution on giant panda red cell maintenance better. The preservation solution of the invention can effectively preserve red blood cells of the bear family for 30 days, and can be used for the clinical red blood cell infusion of the bear family.

【技术实现步骤摘要】
一种熊科动物红细胞保存液及其应用
本专利技术涉及血液保存
，具体公开了一种熊科动物红细胞保存液及其应用。
技术介绍
熊猫输血是大熊猫兽医临床中急需的重要技术手段，由于缺乏相应研究，导致大熊猫血液成分及其替代血源亚洲黑熊的血液成分无法较长期在体外保存，阻碍了大熊猫红细胞输注在大熊猫疾病治疗和野外救治中的应用。如何在比较长时间段保存大熊猫红细胞，使得分散在全球的大熊猫都可以在需要的情况下，使用安全高质量的红细胞输注治疗，是一个急需解决的问题。人类红细胞寿命大约为120天，受损或衰老的红细胞的膜脆性增加，致使抗原暴露，暴露的抗原与自身IgG结合，最终被巨噬细胞吞噬；另外，红细胞老化致使表面CD47含量下降，也会导致红细胞被吞噬；由于老化红细胞易被吞噬清除，故而对于如何更好的保存红细胞以满足输血治疗的目的，是输血医学中一直不断探索的问题。红细胞输注的目的是输送具有正常生物功能的红细胞进入受血者体内，减轻或治疗受血者因缺乏红细胞或缺乏具有正常生物功能的红细胞造成的症状。日常输血中最常用的红细胞体外保存方法是4℃保存，不同的配方及添加剂决定了红细胞保存时间的长短。由于红细胞在保存期间持续代谢，所以红细胞4℃体外保存只能起到短时体外保存的作用。临床上对体外保存后的红细胞输注效果的评判标准是输注后24h输注的红细胞成活率应高于70％(PittiglioDH，1983)，而实验中评价红细胞保存效果最常用的是游离血红蛋白/溶血率、ATP和2,3-DPG三类指标(PittiglioDH，1983；HessJR，2002)。游离血红蛋白/溶血率作为通过肉眼可以观察到的最直观的指标，是一个红细胞保存体系好坏的直接评价。体外保存红细胞发生溶血后，输血过程中大量游离血红蛋白进入机体，会诱发黄疸，还导致脑部缺氧，过多的血红蛋白代谢还会导致肾脏疾病(HeatonWA，1992；CF，1999)。ATP是红细胞保持正常生理功能的基础。1983年Pittiglio发现，红细胞内ATP含量与输注后24h红细胞成活率有直接关系(PittiglioDH，1983)。随着红细胞保存时间的延长，红细胞内的2,3-DPG含量下降，致使红细胞携氧能力下降，故2,3-DPG是红细胞保存又一衡量指标(HessJR，2002)。中国专利201410501658.0公开了一种红细胞保存液，包括蒸馏水、氯化钠、枸橼酸钠、氯化氨、磷酸氢二钠、葡萄糖、甘露醇、腺嘌呤、氯霉素、叠氮钠、氨基酸，其重量比为：蒸馏水：枸橼酸钠：氯化氨：磷酸氢二钠：葡萄糖：甘露醇：腺嘌呤：氯霉素：叠氮钠：氨基酸：氯化钠＝100：2-3∶0.5-1：0.1-0.2：4-5：1-2∶0.1-0.2：0.15-0.2∶0.001-0.0025：1-2：2-3，该保存液来可延长红细胞保存期。中国专利201510396952.4公开了一种红细胞保存液，所述红细胞保存液的组成和含量如下：腺嘌呤0.3-0.5g/L，葡萄糖25-35g/L，柠檬酸钠6-10g/L，肌苷0.2-0.4g/L，氯霉素0.2-0.3g/L，硫酸新霉素0.08-0.12g/L，氯化钠2.5-3.5g/L，磷酸二氢钠0.04-0.06g/L，该保存液能够使红细胞的保存期限达到十四周，在保存期的内红细胞悬液有较高的抗原效价。现有技术红细胞保存液研究在人上进行的较多，而对于熊科动物红细胞保存液研究较少。在人红细胞保存研究中使用过的保存液有ACD保存液、CPD-A保存液等，专利技术人在前期预实验中发现，使用人类红细胞保存液对大熊猫保存效果不佳，人类红细胞保存液并不适合大熊猫红细胞保存。其原因经推测可能是，由于大熊猫红细胞脆性及血浆中Na+离子含量与人类不同，大熊猫红细胞对人类红细胞保存液耐受性较差。因此针对熊科动物血液生理特点，有必要研发一种熊科动物红细胞保存液，而关于本专利技术的熊科动物红细胞保存液，目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供一种熊科动物红细胞保存液。本专利技术的第二个目的是针对现有技术中的不足，提供一种熊科动物红细胞体外保存的方法。为实现上述第一个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种熊科动物红细胞保存液，所述红细胞保存液的组成和含量如下：作为本专利技术的一个优选实施方案，所述红细胞保存液的组成和含量如下：作为本专利技术的一个优选实施方案，所述熊科动物红细胞来源为健康大熊猫抗凝血，所述大熊猫红细胞体外有效保存时间不少于30天。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种熊科动物红细胞体外保存的方法，所述方法包括采用如上所述的保存液对熊科动物红细胞进行体外保存的步骤。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述熊科动物红细胞来源为健康大熊猫抗凝血，所述大熊猫红细胞体外有效保存时间不少于30天。本专利技术优点在于：由于大熊猫红细胞脆性及血浆中Na+离子含量与人类不同，导致其对人类红细胞保存液耐受性较差。本专利技术针对大熊猫血液生理特点，选择钠盐作为主要晶体渗透压的来源，并使用葡萄糖作为主要能量来源，配制四种红细胞保存液(B1-B4保存液)。通过不同时间点对保存液上清游离血红蛋白检测发现：第10天时，B3保存液与其他组有差异显著(P<0.01)；第20天时，B2(P<0.05)、B3(P<0.01)与其他两组有差异显著；第30天时，B2(P<0.05)、B3(P<0.01)与其他两组有显著性差异。以上实验结果表明，B3保存液是最佳保存体系。采用ATP检测及2,3-DPG检测评价B3保存液的保存效果，结果显示B3组ATP及2,3-DPG含量与B1组有显著性差异，表明B3保存液对大熊猫红细胞保养效果更好。本专利技术的红细胞保存液可有效保存熊科动物红细胞达30天，可用于熊科动物临床红细胞输注。附图说明附图1为大熊猫红细胞脆性区间图。图中人类参考值(图中红色柱形部分)：开始溶血(0.42％-0.46％)氯化钠溶液；完全溶血:(0.32％-0.34％)氯化钠溶液(n＝6)。附图2为大熊猫新鲜及衰老红细胞显微镜观察。大熊猫新鲜红细胞及4℃放置20天后的红细胞扫描电镜及100×光学显微镜照片。A、B为新鲜红细胞；C、D为放置20天细胞。附图3为B3大熊猫红细胞保存液保存红细胞效果100×光学显微镜观察。A、B、C、D分别为第0、10、20、30天。附图4为大熊猫红细胞保存液保存红细胞第30天外观。A、B、C、D分别为B1、B2、B3、B4保存液保存大熊猫红细胞。附图5为人、大熊猫红细胞在人类红细胞体外保存液10天保存效果。取样方法为：保养混匀后，静置，并吸取上清，并对上清离心。A、B为人红细胞在ACD、CPD-A中保存效果；C、D为大熊猫在ACD、CPD-A中保存效果。附图6为大熊猫红细胞保存体系游离血红蛋白测定(n＝6；*：P<0.05；**：P<0.01)。附图7为大熊猫红细胞保存液B3保养效果评价。A：ATP含量测定10天、20天、30天；B：2，3-DPG含量测定10天、20天、30天(n＝6；*：P<0.05；**：P<0.01)。具体实施方式下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种熊科动物红细胞保存液，其特征在于，所述红细胞保存液的组成和含量如下：

【技术特征摘要】
1.一种熊科动物红细胞保存液，其特征在于，所述红细胞保存液的组成和含量如下：2.根据权利要求1所述熊科动物红细胞保存液，其特征在于，所述红细胞保存液的组成和含量如下：3.一种熊科动物红细胞体外保存的方法，其特征在于，所述方法包括采用...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵俸涌，朱自严，李德生，邓林华，钱旻，李勤，张嘉敏，叶璐夷，
申请(专利权)人：上海市血液中心，
类型：发明
国别省市：上海,31