一种沼泽红假单胞菌的培养方法技术

本发明专利技术涉及一种采用光‑微量热系统，通过高精度、高灵敏度地控制光照波长、功率和温度的沼泽红假单胞菌培养方法。首先复活菌种并转接3代为菌种原液，采用血平板计数法制作标准曲线，依此计算实验菌液细菌数，从而保证细菌数在固定范围。然后通过光‑微量热系统，打开532 nm波长光源，进行光功率为4 W/m

A culture method of Rhodopseudomonas marshes

The invention relates to a light by microcalorimetric system, through high precision and high sensitivity control r.palustris light wavelength, power and temperature of the culture method. First of all, the 3 generation of bacteria was transferred to the original solution of the strain. The standard curve was made by blood plate counting method, and the number of bacteria in the experimental liquid was calculated, so that the number of bacteria was in the fixed range. And then through the light microcalorimetric system, open the 532 nm wavelength light source, optical power of 4 W/m

【技术实现步骤摘要】
一种沼泽红假单胞菌的培养方法
本专利技术涉及一种沼泽红假单胞菌的培养方法，采用光-微量热系统，通过高精度、高灵敏度地控制光照的波长、功率和温度，对细菌进行培养。属于微生物培养
，具体涉及一种沼泽红假单胞菌的培养方法。
技术介绍
影响光合细菌生长的因素除了自身生理条件外，还有一些外部因素，如温度、酸碱度、底物的初始浓度和光照都会限制着细菌的生长。其中光是光合细菌生长的能量来源，是光合细菌得以生存的根本前提。光合色素是光合生物所特有的色素，是将光能转化为化学能的关键物质。不同的光合细菌菌种含有不同的光合色素，光合色素的种类和数量对光的捕获产生重要影响，因此光对光合细菌的生长至关重要。红假单胞菌属（Rhodopseudomonas）是光合细菌中最为常见和具有实用意义的一个属，沼泽红假单胞菌为其代表菌株，在工业废水处理、制氢、养殖业、种植业、化妆品以及保健品等领域有着广泛的应用前景，但目前对于沼泽红假单胞菌培养方法主要集中在培养基的改良上，如培养温度、酸碱度、底物配方及浓度等，对于沼泽红假单胞菌培养光照条件的研究已见的文献报道是利用复合光对其生长的作用，而在单一波长、特定功率和温度的光照下生长还未见文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有领域研究的空缺，提出一种沼泽红假单胞菌的培养方法。本专利技术操作简单、细菌的光照反应条件精确，反应高效。为实现这一目的，本专利技术采用光-微量热系统，通过控制光照的波长和功率的沼泽红假单胞菌培养方法。首先复活菌种并转接3代作为菌种原液，采用血平板计数法制作标准曲线测定，依此计算实验菌液细菌数，从而保证细菌数在固定范围。然后采用光-微量热系统，打开532nm波长光源，进行光功率为4W/m2的沼泽红假单胞菌原位生长热谱曲线的测定。最后通过计算对数生长期的热动力学参数以及不同代谢期的产热量，确定单色光λ=532nm，4W/m2功率最能调动细菌的光合细胞作用使细菌保持良好生长态势，利于细菌生长代谢。该方法培养出的沼泽红假单胞菌迟缓期时间短，仅用27395s；对数生长期时间长达45570s,热功率和放热量高达48.1851μW、1343.66J。本专利技术的方法包括以下具体步骤：1、培养基的配制：分别称取培养基成分：胰蛋白胨15.0g，大豆胨5.0g，氯化钠5.0g，溶于蒸馏水，搅拌均匀后用蒸馏水定容至1.0L，测溶液PH为7.3±0.2，分装于250mL锥形瓶，封口后，121℃灭菌30min。2、沼泽红假单胞菌菌种活化：把冻干菌从斜面培养基上转接至4-5mL液体培养基，复活菌种。再转接3代作为菌种原液。3、沼泽红假单胞菌细菌浓度：采用血球计数法进行统计。以复活后的菌种进行平板培养，置于30℃，光照强度为2500勒克斯光照培养箱中培养24-48小时后计数，制作标准曲线。沼泽红假单胞菌菌液浓度测定均采用分光光度计测其在660nm处其OD值，通过标准曲线拟合方程确定细菌数，使得每次所用菌液细菌数约为108个/mL。以此计算实验菌液细菌数。4、沼泽红假单胞菌培养：在光-微量热系统中，分别加入1.5mL培养基和1.5mL接种有沼泽红假单胞菌的液体培养基至样品池和参比池中，再分别装入至体积为15mL的不锈钢样品管和参比管中，恒温至30℃，待基线稳定后，打开532nm波长光源，进行光功率为4W/m2的沼泽红假单胞菌原位生长实验，时间为345600s。本专利技术具有如下特点：1、本专利技术沼泽红假单胞菌菌培养的光照为特定波长单色光，即λ=532nm，特定功率是4W/m2，特定温度为30℃均通过光-微量热系统进行控制。2、本专利技术沼泽红假单胞菌的条件是恒温，兼性需氧培养，在培养过程即可通过细菌生长的“热谱曲线”对其生长过程状态进行监测。并于实验结束后根据热谱曲线，计算出该方法培养出的沼泽红假单胞菌迟缓期时间为27395s；对数生长期时间为45570s，热功率和放热量分别高达48.1851μW、1343.66J，鉴于生产上，常常通过延长对数期的时间来提高细菌的发酵效率可见，使用本专利技术培养的沼泽红假单胞菌具有低成本、高效率、操作简单、细菌的光照反应条件精确特点。附图说明图1为本专利技术用于沼泽红假单胞菌培养的RD496-CK2000型光-微量热系统实物图。图2为本专利技术实施例1所得的产热P-t曲线图和下不同生长期的时间、热量变化图。图3为本专利技术实施例2所得的产热P-t曲线图和下不同生长期的时间、热量变化图。图4为本专利技术实施例3所得的产热P-t曲线图和下不同生长期的时间、热量变化图。具体实施方式以下通过具体的实施例对本专利技术的技术方案作进一步描述。以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是限制本专利技术的范围。实施例11）培养基的配制：称取胰蛋白胨15.0g，大豆胨5.0g，氯化钠5.0g，蒸馏水1.0L，搅拌均匀后，测其PH为7.3±0.2，121℃灭菌30min。2）菌种活化：复活菌种并转接3代作为菌种原液。3）细菌浓度：采用血球计数法进行统计。以复活后的菌种进行平板培养，培养24~48小时计数，制作标准曲线，计算实验菌液细菌数，。4）细菌培养：在光-量热系统中,分别加入1.5mL培养基和1.5mL接种有沼泽红假单胞菌的液体培养基至样品池和参比池中，再分别装入至体积为15mL的不锈钢样品管和参比管中，恒温至30℃，待基线稳定后，打开532nm波长光源，进行光功率为4W/m2的沼泽红假单胞菌原位生长实验，时间为345600s。实验结束后根据热谱曲线，如图1所示，A-B为迟缓期，B-C对数生长期，C-D为稳定期，D-E为衰亡期。计算出该方法培养出的沼泽红假单胞菌迟缓期时间为27395s；对数生长期时间长达45570s,热功率和放热量分别高达48.1851μW、1343.66J。实施例21）培养基的配制：称取胰蛋白胨15.0g，大豆胨5.0g，氯化钠5.0g，蒸馏水1.0L，搅拌均匀后，测其PH为7.3±0.2，121℃灭菌30min。2）菌种活化：复活菌种并转接3代作为菌种原液。3）细菌浓度：采用血球计数法进行统计。以复活后的菌种进行平板培养，培养24~48小时计数，制作标准曲线测定，计算实验菌液细菌数。4）细菌培养：在光-量热系统中，分别加入1.5mL培养基和1.5mL接种有沼泽红假单胞菌的液体培养基（每次测定前测定菌液OD值，通过标准曲线拟合方程确定细菌数，使得每次所用菌液细菌数约为108个/mL）至样品池和参比池中，再分别装入至体积为15mL的不锈钢样品管和参比管中，设置相应参数，恒温至30℃，待基线稳定后，打开532nm波长光源，进行光功率为2W/m2的沼泽红假单胞菌原位生长实验，时间为345600s（96h）。实验结束后根据热谱曲线，如图2所示，A'B'为迟缓期，B'-C'对数生长期，C'-D'为稳定期，D'-E'为衰亡期。计算出该方法培养出的沼泽红假单胞菌迟缓期时间为161200s；对数生长期时间为11362s，热功率和放热量分别为19.687μW、135.00J。说明了，光照功率过小，沼泽红假单胞菌的生长代谢变慢，生长性能下降。实施例31）培养基的配制：称取胰蛋白胨15.0g，大豆胨5.0g，氯化钠5.0g，蒸馏水1.0L，搅拌均匀后，测其PH为7.3±0.2，121℃灭菌30min。2）菌种活化：复活菌种本文档来自技高网...

【技术保护点】
采用光‑微量热系统培养沼泽红假单胞菌的方法，其特征在于，高精度、高灵敏度的光特定波长为λ=532 nm，特定功率为4W/m

【技术特征摘要】
1.采用光-微量热系统培养沼泽红假单胞菌的方法，其特征在于，高精度、高灵敏度的光特定波长为λ=532nm，特定功率为4W/m2，特定温度为30℃。2.根据权利要求1，一种沼泽红假单胞菌的培养方法，包括以下步骤：1)培养基的配制：培养基成分为胰蛋白胨15.0g，大豆胨5.0g，氯化钠5.0g，蒸馏水1.0L，搅拌均匀后，测其pH为7.3±0.2，121℃灭菌30min；2...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖艳娟，黄在银，覃小芳，韦慧，李辉，钟声扬，杨悦娟，
申请(专利权)人：广西民族大学，
类型：发明
国别省市：广西,45