一种人血白蛋白的制备工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种人血白蛋白的制备工艺，它采用低温乙醇法结合离子交换层析法分离纯化人血白蛋白，以人血浆为原料，分别进行血浆溶解；吸附；组分I制作；组分II+III制作；超滤；层析；超滤；稀配；巴氏灭活病毒；蛋白除菌分装；制品孵育；成品包装，其特征在于，从白蛋白收率、纯度和制品的稳定性入手采用采用A50凝胶吸附和Fractogel EMD DEAE作层析填料，在常温下进行层析过程。本发明专利技术分离纯化人血白蛋白，白蛋白收率 >30g/L血浆、纯度>98%，制品的收率、纯度和稳定性得到显著提高，临床使用安全性更好，也缩短了制备周期，该工艺不需要全过程低温环境，方便了制作，将有效地节约能源，降低成本。

A preparation process of Human Albumin

The invention discloses a preparation technology of Human Albumin, it uses the cold ethanol method with ion exchange chromatography separation and purification of Human Albumin, with human plasma as raw materials were dissolved in plasma; adsorption; component I; component II+III; ultrafiltration; chromatography; ultrafiltration; dilute; pasteurized inactivated virus; antibacterial protein packaging products; incubation; product packaging, which is characterized in that the yield, purity and stability of albumin from the products of using A50 and Fractogel EMD gel adsorption DEAE chromatography, chromatography at room temperature. Separation and purification of Human Albumin the invention, albumin recovery > plasma 30g/L, the purity of > 98%, product yield, purity and stability has been significantly improved, clinical use safety better, but also shorten the preparation period, this process does not require the whole process of low temperature environment, convenient production, will effectively save energy, reduce cost.

【技术实现步骤摘要】
一种人血白蛋白的制备工艺
本专利技术涉及生物制药领域中蛋白质药物的分离及纯化工艺，特别是涉及一种人血白蛋白的制备工艺。
技术介绍
人血白蛋白是血液制剂的主要产品，在肝细胞合成，合成速度极快，具有分子相对小(分子量66250)、表面积相对较大，分子构形比较对称，结构简单、牢固、富韧性等特点。白蛋白对失血性休克，严重烧伤，脑水肿，肝肾疾病的血症有重要作用。自从Cohn等人于40年代创立低温乙醇人血浆蛋白分离技术以来，血浆蛋白的工业化大生产取得了长足的进展。目前采用传统低温乙醇分离法生产的人血白蛋白，存在分离步骤多，周期长，工艺复杂，且全过程需要低温环境，制备的白蛋白得率低，产品稳定性差，纯度低，其他部分指标容易不达标，如PKA含量，铝残留量，多聚体含量等。出现以上不足的主要原因还是制备工艺的不合理。传统低温乙醇法制备工艺不能有效将铝残留量降到最低，以确保制品在有效期内铝残留量不超标。铝可能具有引发低血色素性贫血、老年痴呆症、骨软化病和慢性肾功能损害等危险性。2015年版中国药典收入了人血白蛋白制品铝残留量的要求，质量标准与欧洲药典一致(≤200μg/L)。如CN201110030776.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人血白蛋白的制备工艺，它采用低温乙醇法结合离子交换层析法分离纯化人血白蛋白，以人血浆为原料，分别进行血浆溶解；吸附；组分I制作；组分II+III制作；超滤；层析；超滤；稀配；巴氏灭活病毒；蛋白除菌分装；制品孵育；成品包装，其特征在于，从白蛋白收率、纯度和制品的稳定性入手采用采用A50凝胶吸附和Fractogel EMD DEAE作层析填料，在常温下进行层析过程；其中，A50凝胶平衡液：0.10mol/L NaCl+0.02mol/L枸橼酸钠，pH6.5‑6.8；Fractogel EMD DEAE层析平衡液：0.02mol/L枸橼酸钠+0.1mol/L NaCl，pH 6.5‑7.0；Fr...

【技术特征摘要】
1.一种人血白蛋白的制备工艺，它采用低温乙醇法结合离子交换层析法分离纯化人血白蛋白，以人血浆为原料，分别进行血浆溶解；吸附；组分I制作；组分II+III制作；超滤；层析；超滤；稀配；巴氏灭活病毒；蛋白除菌分装；制品孵育；成品包装，其特征在于，从白蛋白收率、纯度和制品的稳定性入手采用采用A50凝胶吸附和FractogelEMDDEAE作层析填料，在常温下进行层析过程；其中，A50凝胶平衡液：0.10mol/LNaCl+0.02mol/L枸橼酸钠，pH6.5-6.8；FractogelEMDDEAE层析平衡液：0.02mol/L枸橼酸钠+0.1mol/LNaCl，pH6.5-7.0；FractogelEMDDEAE层析洗脱液：0.02mol/L枸橼酸钠+1mol/LNaCl，pH6.5-7.0。2.根据权利要求1所述人血白蛋白制备工艺，其特征在于，组分I制作步骤是，启动冷媒系统及搅拌，将血浆冷却至0～1℃之间，滴加pH4.0缓冲液，控制流速不超过1.0升/分钟，调节pH值为6.80～7.20；添加－20℃以下的95％乙醇至乙醇终浓度为8％，流速不超过1.0升/分钟，温度控制在-1～-3℃；加完乙醇后进行离心，离心得组分I沉淀和组分I上清液。3.根据权利要求2所述人血白蛋白制备工艺，其特征在于，组分II+III制作步骤是，组分I上清液用pH4.0缓冲液调节至pH值为6.00～6.50，控制流速不超过1.0升/分钟；启动冷媒，缓慢加入－20℃以下的95％乙醇至乙醇体积比浓度为19％，流速不超过1.0升/分钟，温度控制在－4～－6℃；加完乙醇后，搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入18g硅藻土，进行压滤，压滤后得组分Ⅱ+Ⅲ沉淀和组分Ⅱ+Ⅲ上清液。4.根据权利要求3所述人血白蛋白制备工艺，其特征在于，pH4.0缓冲液：取65.6g无水醋酸钠，加冰醋酸244.9ml，用适量注射用水充分溶解，加注射用水定容至1L混匀。5.根据权利要求4所述人血白蛋白制备工艺，其特征在于，获得组分Ⅱ+Ⅲ上清液后，将其蛋白含量调节为5％～8％，用8倍体积的2～8℃的0.85％氯化钠溶液进行等体积透析；透析结束后，调节溶液pH为6.5-7.0，调节电导率值为1ms/cm，即得层析上样蛋白液；上样已平衡好的层析柱，平衡液冲洗2-3倍柱体积，洗脱液洗脱，收集洗脱液；将收集到的洗脱蛋白液浓缩至蛋白含量为15％以上，浓缩结束后，用6倍体积的2～8℃的0.5％氯化钠溶液进行等体积透析；透析结束后，将蛋白浓度浓缩至20％以上；使用1mol/LNaHCO3调节蛋白液的pH值至6.80～7.20。6.根据权利要求5所述人血白蛋白制备工艺，其特征在于，稀配液制备后，使用60±5℃的夹套循环水升温，当蛋白液温度升至59.5℃时，开始计时，进行59.5～60.5℃巴氏灭活12h，巴氏灭活结束后，将蛋白液温度降至20～30℃，使用0.2μm的除菌滤芯进行除菌过滤，按要求进行灌装，将灌装后制品移至30～32℃孵放间孵育14天，孵育完后，进行成品检定，将检定合格的产品进行包装。7.根据权利要求1所述人血白蛋白制备工艺，其特征在于制备工艺包括，(1)、融浆：将原料血浆先用75％酒精浸泡2～3分钟，再用注射用水冲洗表面，然后将原料血浆破袋输送至融浆罐，用30～35℃的水进行夹层循环融浆，血浆温度控制在0～4℃之间，离心分离冷...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓志华，赵睿，梁小明，庞跃林，廖昕晰，何淑琴，黄璠，
申请(专利权)人：广东丹霞生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44