一种类蛇毒三肽的液相片段合成方法技术

本发明专利技术公开了一种类蛇毒三肽的液相片段合成方法，该方法以低成本的Fmoc‑Pro‑OH、H‑DAB(Boc)‑OH、苄胺为原料先合成保护片段H‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl，然后由Boc‑β‑Ala‑OH、H‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl合成Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl，Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl经三氟乙酸脱保护基后分离纯化、冻干，得纯度大于95％的H‑β‑Ala‑Pro‑DAB‑NH‑Bzl，即类蛇毒三肽。本发明专利技术方法简单易行、成本低，为类蛇毒三肽的合成提供了一种工艺简便、成本较低的液相片段合成方法。

A liquid phase fragment synthesis method for a species of snake venom three peptide

The present invention discloses a kind of snake venom peptide fragment of three liquid phase synthesis method, the method with low cost, H OH Pro Fmoc DAB (Boc) OH, benzylamine as the raw materials to synthesis of protected fragments of H (Boc) DAB Pro NH Bzl, then the Boc beta Ala OH, H Pro DAB (Boc) NH Bzl synthesis of Boc DAB Pro beta Ala (Boc) NH Bzl, Boc Ala Pro beta DAB (Boc) NH Bzl after three trifluoroacetic acid deprotection after purification, freeze dried, too more than 95% purity H beta Ala Pro DAB NH Bzl, namely three kind of snake venom peptide. The method of the invention is simple and low cost, and provides a simple and low cost synthesis method for the synthesis of the three peptide of snake venom.

【技术实现步骤摘要】
一种类蛇毒三肽的液相片段合成方法
本专利技术属于化妆品
，具体涉及到多肽类中的短肽的液相合成方法。
技术介绍
类蛇毒三肽(H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl)是一种模拟蛇毒毒素WaglerinI活性的小肽，WaglerinI发现于TempleViper毒蛇的毒液(Tripidolaemuswagleri)，为肌肉烟碱乙酰胆碱受体(nmAChR)拮抗剂。H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl是DSM荷兰皇家帝斯曼集团全资子公司PENTAPHARM通过高科技生化科技，模仿有效分子蛋白(Waglerin1)的片段合成得到小分子三肽，其化学结构与毒蛇血清相似，但是相比肉毒杆菌却更安全有效，故可安全应用到化妆品中，具有优秀的光滑肌肤、迅速祛皱性能。目前，常规合成类蛇毒三肽的方法大多采用固相、液相相结合的方法，即先由2-CTCResin固相合成片段Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OH或Fmoc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OH，再由片段Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OH或Fmoc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OH和苄胺合成Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl或Fmoc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl，经脱除保护基团得到产物，合成过程比较繁杂、成本高，因此开发工艺简便、成本较低的类蛇毒三肽合成方法对广泛使用于化妆品的类蛇毒三肽有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种合成成本低、方法简单的类蛇毒三肽的液相片段合成方法。解决上述技术问题所采用的技术方案由下述步骤组成：(1)合成H-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl①以四氢呋喃为溶剂，将Fmoc-Pro-OH和N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳酰亚胺在室温条件下搅拌反应2～4小时，过滤除去沉淀，得到Fmoc-Pro-OSu的四氢呋喃溶液。②将H-DAB(Boc)-OH和N,N-二异丙基乙胺溶解于四氢呋喃后，加入到步骤①得到的Fmoc-Pro-OSu的四氢呋喃溶液中，室温搅拌反应1～2小时，得到Fmoc-Pro-DAB(Boc)-OH。③以四氢呋喃为溶剂，将Fmoc-Pro-DAB(Boc)-OH、1-羟基苯并三唑、N,N'-二异丙基碳酰亚胺、苄胺在室温条件下搅拌反应2～4小时，得到Fmoc-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl。④将Fmoc-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl用体积分数为15％～20％的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，得到H-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl。(2)合成Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl以四氢呋喃为溶剂，将Boc-β-Ala-OH、1-羟基苯并三唑、N,N'-二异丙基碳酰亚胺、H-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl在室温条件下搅拌反应2～4小时，得到Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl。(3)合成H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl将Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl用体积分数为95％的三氟乙酸水溶液脱除Fmoc保护基，得到H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl粗品；H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl粗品经HPLC纯化、冷冻干燥，得到H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl，即类蛇毒三肽。上述步骤(1)的①中，优选Fmoc-Pro-OH、N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳酰亚胺的摩尔比为1:1.0～1.2:1.0～1.2。上述步骤(1)的②中，优选Fmoc-Pro-OH、H-DAB(Boc)-OH、N,N-二异丙基乙胺的摩尔比为1:1.0～1.2:1.5～2.5。上述步骤(1)的③中，优选Fmoc-Pro-DAB(Boc)-OH、苄胺、1-羟基苯并三唑、N,N'-二异丙基碳酰亚胺的摩尔比为1:1.5～3:1.5～3:1.5～3。上述步骤(2)中，优选H-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl、Boc-β-Ala-OH、1-羟基苯并三唑、N,N'-二异丙基碳酰亚胺的摩尔比为1:1.1～1.3:1.5～3:1.5～3。本专利技术以廉价易得的Fmoc-Pro-OH、H-DAB(Boc)-OH、苄胺和Boc-β-Ala-OH为原料，合成成本低，方法简单简便，为类蛇毒三肽(H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl)合成提供了一种理想的液相片段合成方法。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进一步详细说明，但本专利技术的保护范围不仅限于这些实施例。实施例1(1)合成H-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl①称取16.87g(0.05mol)Fmoc-Pro-OH和6.33g(0.055mol)N-羟基琥珀酰亚胺于容器中，加入230mL四氢呋喃搅拌溶解，再加入11.35g(0.055mol)N,N'-二环己基碳酰亚胺，室温搅拌反应3小时，过滤除去沉淀，得到Fmoc-Pro-OSu的四氢呋喃溶液。②将12.00g(0.055mol)H-DAB(Boc)-OH加入120mL四氢呋喃中，再加入16.5mL(0.10mol)N,N-二异丙基乙胺，搅拌溶解后将其加入到步骤①的Fmoc-Pro-OSu的四氢呋喃溶液中，室温搅拌反应1.5小时，30～40℃旋转蒸发浓缩，向浓缩液中加入350mL乙酸乙酯，用质量分数为0.5％的盐酸洗涤有机相3次，无水硫酸钠干燥，30～40℃旋转蒸发浓缩，用乙醚析出沉淀，抽滤，干燥，得到21.86gFmoc-Pro-DAB(Boc)-OH。③将21.86g(0.04065mol)Fmoc-Pro-DAB(Boc)-OH、10.98g(0.08130mol)1-羟基苯并三唑溶于320mL四氢呋喃中，加入13.5mL(0.08130mol)N,N'-二异丙基碳酰亚胺，搅拌反应5分钟，然后加入8.71g(0.08130mol)苄胺和90mL四氢呋喃的溶液，室温搅拌反应3小时，30～40℃旋转蒸发浓缩，向浓缩液中加入400mL乙酸乙酯，用质量分数为0.5％的盐酸洗涤有机相3次，30～40℃旋转蒸发浓缩，得到Fmoc-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl。④将步骤③得到的Fmoc-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl加入300mL体积分数为20％的哌啶的四氢呋喃溶液中，室温搅拌反应30分钟，30～40℃旋转蒸发浓缩，加入400mL乙醚析出沉淀，过滤，用乙醚洗涤2次，干燥，得到12.01gH-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl。(2)合成Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl将6.74g(0.03563mol)Boc-β-Ala-OH、8.03g(0.05938mol)1-羟基苯并三唑溶于150mL四氢呋喃中，并加入9.2mL(0.05938mol)N,N'-二异丙基碳酰亚胺，搅拌反应5分钟，然后加入12.01g(0.02969mol)H-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl和180mL四氢呋喃的溶液，室温搅拌反应3小时，30～40℃旋转蒸发浓缩，向浓缩液中加入350mL乙酸乙酯，用质量分数为0.5％盐酸洗涤有机相3次，30～40℃旋转蒸发浓缩，用乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种类蛇毒三肽的液相片段合成方法，其特征在于所述方法由以下步骤组成：(1)合成H‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl①以四氢呋喃为溶剂，将Fmoc‑Pro‑OH和N‑羟基琥珀酰亚胺、N,N'‑二环己基碳酰亚胺在室温条件下搅拌反应2～4小时，过滤除去沉淀，得到Fmoc‑Pro‑OSu的四氢呋喃溶液；②将H‑DAB(Boc)‑OH和N,N‑二异丙基乙胺溶解于四氢呋喃后，加入到步骤①得到的Fmoc‑Pro‑OSu的四氢呋喃溶液中，室温搅拌反应1～2小时，得到Fmoc‑Pro‑DAB(Boc)‑OH；③以四氢呋喃为溶剂，将Fmoc‑Pro‑DAB(Boc)‑OH、1‑羟基苯并三唑、N,N'‑二异丙基碳酰亚胺、苄胺在室温条件下搅拌反应2～4小时，得到Fmoc‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl；④将Fmoc‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl用体积分数为15％～20％的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，得到H‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl；(2)合成Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl以四氢呋喃为溶剂，将Boc‑β‑Ala‑OH、1‑羟基苯并三唑、N,N'‑二异丙基碳酰亚胺、H‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl在室温条件下搅拌反应2～4小时，得到Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl；(3)合成H‑β‑Ala‑Pro‑DAB‑NH‑Bzl将Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl用体积分数为95％的三氟乙酸水溶液脱除Fmoc保护基，得到H‑β‑Ala‑Pro‑DAB‑NH‑Bzl粗品；H‑β‑Ala‑Pro‑DAB‑NH‑Bzl粗品经HPLC纯化、冷冻干燥，得到H‑β‑Ala‑Pro‑DAB‑NH‑Bzl，即类蛇毒三肽。...

【技术特征摘要】
1.一种类蛇毒三肽的液相片段合成方法，其特征在于所述方法由以下步骤组成：(1)合成H-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl①以四氢呋喃为溶剂，将Fmoc-Pro-OH和N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳酰亚胺在室温条件下搅拌反应2～4小时，过滤除去沉淀，得到Fmoc-Pro-OSu的四氢呋喃溶液；②将H-DAB(Boc)-OH和N,N-二异丙基乙胺溶解于四氢呋喃后，加入到步骤①得到的Fmoc-Pro-OSu的四氢呋喃溶液中，室温搅拌反应1～2小时，得到Fmoc-Pro-DAB(Boc)-OH；③以四氢呋喃为溶剂，将Fmoc-Pro-DAB(Boc)-OH、1-羟基苯并三唑、N,N'-二异丙基碳酰亚胺、苄胺在室温条件下搅拌反应2～4小时，得到Fmoc-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl；④将Fmoc-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl用体积分数为15％～20％的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，得到H-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl；(2)合成Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl以四氢呋喃为溶剂，将Boc-β-Ala-OH、1-羟基苯并三唑、N,N'-二异丙基碳酰亚胺、H-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl在室温条件下搅拌反应2～4小时，得到Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl；(3)合成H-β-Ala-Pro-DAB...

【专利技术属性】
技术研发人员：张忠旗，李乾，李晨，王慧，王斌，张佳旭，杨小琳，赵金礼，
申请(专利权)人：陕西慧康生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61