含CpG DNA畜禽疫苗佐剂的PCR制备方法技术

一种能促进畜禽疫苗效价的含ＣｐＧ　　ＤＮＡ畜禽疫苗佐剂的ＰＣＲ制备方法，其特征在于：　　　　第一步：基因工程重组质粒的制备：根据由序列为：　　　　５’－－－－ＧＧＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧＧＧＧＧ－－－３’、　　　　５’－－－－ＧＧＴＧＣＧＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧＧＧＧＧ－－－３’及　　　　５’－－－ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ－－－３’　　　　串联而成的Ｄ１９Ｄ２８２００６目的片段ＤＮＡ的序列，合成其寡核苷酸正链和负链，在合成的寡核苷酸末端加上能与线性载体末端相匹配的碱基序列，然后将此寡核苷酸片段、退火缓冲液、及无菌重蒸水混合后，于９０℃～１００℃水浴中孵浴３分钟以上，自然冷却至室温，形成含ＣｐＧ基序的目的片段，此后将此ＤＮＡ片段插入线性载体的相应的酶切位点，最后，将其转化感受态大肠杆菌而得到的基因工程重组质粒；　　　　第二步：根据目的片段两端的重组质粒ＤＮＡ序列，设计特异引物；　　　　第三步：以重组质粒为模板，加入特异引物，并进行三温循环的ＰＣＲ扩增，具体参数为：９２℃～９８℃预变性５～１０分钟；９２℃～９８℃，４５～６０秒，５０～５８℃，４５～６０秒，７２℃，４５～６０秒，进行３０～３５个循环；最后在７２℃延伸１０分钟。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱鸿飞，李光富，
申请(专利权)人：深圳市未来海洋科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：