本发明专利技术涉及变异和遗传工程学领域，具体地说是一种分子生物学法三体检测试剂盒。一种分子生物学法三体检测试剂盒，其特征在于试剂盒中的试剂组成为：ａ．反应液的组分：包括１．５－３ｍＭ Ｍｇ↑［２＋］、１００－３００ｕＭ／ｌｄＮＴＰ、１０－３０ｐｍｏｌ的ＳＴＲ ｐｒｉｍｅｒ和Ｐ．Ｂ．ｂ．酶的组分：Ｔａｑ酶。本发明专利技术同现有技术相比，检测时间短，能使孕妇及其家属较快地得知检测结果，大大缓解了其心理压力和精神负担。同时，本试剂盒使用方法简单，能零下２０℃的条件下贮存６个月，适合各大医院推广和使用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及变异和遗传工程学领域，具体地说是一种分子生物学法三体检测试剂盒。传统的预防先天智障儿出生的方法，要求孕妇在孕14周~20周内进行产前血清筛查，产前血清筛查为高危的孕妇，还要做进一步的产前确诊，即羊膜腔穿刺获取羊水细胞，通过培养羊水细胞进行染色体核型分析，以确定胎儿是否患有染色体疾病。由于需要培养细胞，所以整个检测历程需要至少1个月的时间，这个过程孕妇及其家属将承受相当大的心理负担。本专利技术利用STR基因扫描(genescan)分析技术体系，针对引起常见先天智障疾病的21、13、18染色体，设计合成了一系列STR序列，快速检测21、13、18染色体数目畸变地染色体疾病，整个检测历程仅需1~2个工作日，相对传统的检测方法，大大缩短了孕妇及其家属等待结果的时间。短串连重复序列(STR)是一类广泛分布于人类基因组，以1~6个碱基为单位串连重复多次而成的多态性标记，一般每个STR位点都有多个等位基因，具有高度的多态性和杂合度，提供的多态信息量很高，并以孟德尔共显性方式遗传，STR标记是其他遗传标记无法比拟的。本专利技术目的在于提供一种能快速检测21、13、18染色体数目畸变的染色体疾病的试剂盒。为了实现上述的目的，本专利技术通过以下方法来实现一种分子生物学法三体检测试剂盒，试剂盒中的试剂组成为a.反应液的组分包括1.5-3mM Mg2+、100-300uM/ldNTP、10-30pmol的STR primer和P.B.b.酶的组分Taq酶。一种分子生物学法三体检测试剂盒的检测使用方法，包括以下步骤1)从零下20℃的冰箱取出反应液管，待液体溶解后5000转离心10秒；酶管取出后5000转离心10秒；2)向反应液管中加入酶和待测的孕妇羊水的DNA样本；混匀后，5000转离心30秒；3)扩增将上述组分按94℃预变性5min，然后94℃变性40sec、58℃变性40sec、72℃变性90sec进行35次循环，最后72℃延伸至5min，保温在4℃；4)向上述准备好的样本中加入D.F.和TAMRA；5)95℃变性5min；6)立即放置在冰上至少30s；7)离心；8)上机(测序仪)分析在该试剂盒的使用过程中，向反应液管中加入反应液、酶和待测的孕妇羊水的DNA样本的量分别为19μl、1μl和5μl。加入的D.F.和TAMRA的量分别为16μl和1μl。该试剂盒可用于检测21、13、18染色体数目畸变的染色体疾病。本专利技术同现有技术相比，检测时间短，能使孕妇及其家属较快地得知检测结果，大大缓解了其心理压力和精神负担。同时，本试剂盒使用方法简单，能零下20℃的条件下贮存6个月，适合各大医院推广和使用。以下对本专利技术作进一步的具体实施说明，这种技术对本专业的人员来说还是清楚地。该试剂盒检测21、13、18染色体数目畸变的染色体疾病的方法如下(1)配制反应液反应液的组分包括1.5-3mM Mg2+、100-300uM/ldNTP、10-30pmol的STR primer和P.B.(2)设置七个反应管，反应管和其检测的染色体定位关系如下表(3)从零下20℃的冰箱中取出储存反应液的试管，待液体溶解后5000转离心10秒；酶管取出后5000转离心10秒；(4)先采用DNA Extractions提取孕妇羊水中的DNA。(5)配制混合体系向反应液管中加入酶和待测的孕妇羊水的DNA样本；反应液管内的反应液的量为19μl，酶的量为1μl，孕妇羊水的DNA样本的量为5μl。列表如下每个反应的体系为25μl，按实验标本数(n)+1作为配制反应混合体系混匀后按每个反应加20μl然后在每个管子加入5μl的孕妇羊水的DNA样本，混匀后，5000转离心30秒。(6)扩增将上述组分按94℃预变性5min，然后94℃变性40sec、58℃变性40sec、72℃变性90sec进行35次循环，最后72℃延伸至5min，保温在4℃；(7)向上述准备好的样本中加入D.F.和TAMRA，加入的量列表如下(8)95℃变性5min；(9)立即放置在冰上至少30s；(10)离心；(11)上机(测序仪)分析(12)结果判读样品经过测序仪自动分析，结果判读如下注如遇分析的STR位点均为单峰情况，则要建议孕妇做染色体核型分析进行确诊。不再做进一步的具体实施说明，因为本领域的技术人员能由以上说述说明开始实施本专利技术。在研究说明书后，本领域的技术人员可理解本专利技术的许多改变、修改、变化以及其他用途和应用。不背离本专利技术宗旨和范围的所有这些改变、修改、变化以及其他用途和应用，均被认为由本专利技术所覆盖。权利要求1.一种分子生物学法三体检测试剂盒，其特征在于试剂盒中的试剂组成为a.反应液的组分包括1.5-3mM Mg2+、100-300uM/ldNTP、10-30pmol的STR primer和P.B.b.酶的组分Taq酶。2.一种分子生物学法三体检测试剂盒的检测使用方法，其特征在于包括以下步骤1)从零下20℃的冰箱取出反应液管，待液体溶解后5000转离心10秒；酶管取出后5000转离心10秒；2)向反应液管中加入酶和待测的孕妇羊水的DNA样本；混匀后，5000转离心30秒；3)扩增将上述组分按94℃预变性5min，然后94℃变性40sec、58℃变性40sec、72℃变性90sec进行35次循环，最后72℃延伸至5min，保温在4℃；4)向上述准备好的样本中加入D.F.和TAMRA；5)95℃变性5min；6)立即放置在冰上至少30s；7)离心；8)上机(测序仪)分析3.根据权利要求2所述的一种分子生物学法三体检测试剂盒的检测使用方法，其特征在于向反应液管中反应液、酶和待测的孕妇羊水的DNA样本的量分别为19μl、1μl和5μl。4.根据权利要求2所述的一种分子生物学法三体检测试剂盒的检测使用方法，其特征在于加入的D.F.和TAMRA的量分别为16μl和1μl。5.根据权利要求1所述的一种分子生物学法三体检测试剂盒，其特征在于该试剂盒可用于检测21、13、18染色体数目畸变的染色体疾病。全文摘要本专利技术涉及变异和遗传工程学领域，具体地说是一种分子生物学法三体检测试剂盒。一种分子生物学法三体检测试剂盒，其特征在于试剂盒中的试剂组成为a.反应液的组分包括1.5－3mM Mg2+、100－300uM/ldNTP、10－30pmol的STR primer和P.B.b.酶的组分Taq酶。本专利技术同现有技术相比，检测时间短，能使孕妇及其家属较快地得知检测结果，大大缓解了其心理压力和精神负担。同时，本试剂盒使用方法简单，能零下20℃的条件下贮存6个月，适合各大医院推广和使用。文档编号C12Q1/68GK1696313SQ20051002546公开日2005年11月16日 申请日期2005年4月27日 优先权日2005年4月27日专利技术者邢晶晶 申请人:上海鸿汇科技有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分子生物学法三体检测试剂盒，其特征在于试剂盒中的试剂组成为：ａ．反应液的组分：包括１．５－３ｍＭＭｇ↑［２＋］、１００－３００ｕＭ／ｌｄＮＴＰ、１０－３０ｐｍｏｌ的ＳＴＲｐｒｉｍｅｒ和Ｐ．Ｂ．ｂ．酶的组分：Ｔａｑ 酶。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邢晶晶，
申请(专利权)人：上海鸿汇科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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