油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法技术

油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，它涉及油田水系统中常规污水、含聚污水、地面工艺的水处理过程中硫酸盐还原菌（ＳＲＢ）的培养及厌氧菌的计数。本发明专利技术的目的是为了解决现有的油田水质ＳＲＢ菌检测中，检测周期长、不能全面真实的反映水中的ＳＲＢ菌的数量、不能即时的指导生产、检测费用较高的问题。本发明专利技术选用在同一个稀释梯度下做三至五个平行样，吸取１ｍＬ注入备用的培养基中；将ＭＰＮ的培养基放到摇床上，在３８℃、１８０转／ｍｉｎ条件下摇动；结果观察：第四天和第七天分别计数。本发明专利技术的方法具有记数更加准确，有效地缩短了计数时间，五管平行法四天可以实现初步计数，七天可以达到准确计数，真实的反应了生产实际情况、降低了检测费用的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及油田水系统中常规污水、含聚污水、地面工艺的水处理过程中硫酸盐还原菌(SRB)的培养及计数。
技术介绍
目前，油田系统内SRB菌的计数主要执行中国石油天然气行业标准，“油田注入水细菌分析方法——绝迹稀释法”(部颁标准)、SY-TO532-93。上述的这种方法存在的问题是检测需要14天的时间，由于检测周期较长，不能有效的和即时的指导生产实践，在实际操作过程中有些严格的厌氧SRB菌无法生存，导致SRB菌的记数结果不准确，不能真实的反映生产实际情况，同时检测费用较高。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有的油田水质SRB菌检测中，检测周期长、不能真实全面的反应水中的SRB菌的数量、不能即时的指导生产、检测费用较高的问题，提供一种，本专利技术具有记数准确、缩短计数时间、真实的反映生产实际情况、降低检测费用的特点。本专利技术的方法是通过以下步骤实现的1、取样将油田的水样注入到经灭菌的含有高纯氮气的厌氧管中；2、以下的步骤在超净工作台下完成，紫外线灭菌20～40min，向灭菌的硫酸盐还原菌的培养基中加入1mL的质量百分浓度比为6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液(终浓度为6‰)备用；3、“厌氧MPN法”，选择水样的稀释倍数通常大于经验值的二到三个数量级，用倍比稀释法(MPN)稀释，取水样1mL注入用于倍比稀释的厌氧管中，最终水样被稀释十倍，依次从该管中用一次性注射器取样1mL注入下一个用于倍比稀释的厌氧管中，直到选择稀释的倍数；4、选用三管至五管平行法，选用在同一个稀释梯度下选择做三至五个平行样，吸取1mL注入备用的培养基中；5、将MPN的培养基放到摇床上，在38℃、180转/min条件下摇动；6、结果观察第四天和第七天分别计数。本专利技术的方法其结果表明，三管平行法记录的结果在水样低浓度的情况下，最大相差一个数量级，在高浓度的情况下，相差小于两个数量级。而五管平行法记录的结果置信度大于95％。五管平行法四天记录的结果与七天记录的结果只在系数上有差别，而在数量级上无差别。在第七天已经稳定生长，以后无变化。本专利技术的方法具有记数更加准确，有效的缩短了计数时间，四天可以实现初步计数，七天可以达到准确计数，真实的反应了生产实际情况、降低了检测费用的优点。具体实施例方式具体实施方式一本实施方式的方法是通过以下步骤实现的1、取样将油田的水样注入到经灭菌的含有高纯氮气的厌氧管中；2、以下操作在超净工作台下完成，紫外线灭菌20～40min，向灭菌的硫酸盐还原菌的培养基中加入1mL的质量百分浓度比为6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液(终浓度为6‰)备用；3、“厌氧MPN法”，选择水样的稀释倍数通常大于经验值的二至三个数量级，用倍比稀释法(MPN)稀释，取水样1mL注入用于倍比稀释的厌氧管中，最终水样被稀释十倍，依次从该管中用一次性注射器取样1mL注入下一个用于倍比稀释的厌氧管中，直到选择稀释的倍数；4、选用三管至五管平行法，选用在同一个稀释梯度下做三至五个平行样，吸取1mL注入备用的硫酸盐还原菌的培养基中；5、将MPN的培养基放到摇床上，在38℃、180转/min条件下摇动；6、结果观察第四天和第七天分别计数。具体实施例方式二本实施方式的硫酸盐还原菌培养基的制备方法如下一、首先由下列成分按重量份数制备培养基，K2HPO40.2～0.8、NH4CI0.5～1.5、Na2SO45～15、CaCI2·2H2O0.01～0.6、MgSO4·7H2O1.5～4、酵母膏4～8、质量百分浓度比为60％的乳酸钠溶液5～15、葡萄糖0.5～1.5、维生素C1～5、蒸馏水1000～2000，将上述成分混合均匀，然后调pH值＝7.8，制成培养基，再加入培养基总重量0.2％的指示剂刃天青溶液；二、将上述培养基用灭菌锅煮沸后，向锅内加入培养基总重量0.2～0.8％的L-半光胺酸盐，盖上锅盖，从锅盖的中间孔中插入医用针头，通入高纯氮气驱氧20～30min，指示剂的颜色由紫色逐渐消失后，将另一个医用针头插入到厌氧管中，通入高纯氮气，将厌氧管中的含氧空气吹走，用10mL的医用注射器从灭菌锅中吸8mL培养基注入到厌氧管中，将密封后的厌氧管在121℃条件下灭菌15～30min即可。其它方法和步骤与具体实施方式一相同。具体实施例方式三本实施方式的质量百分浓度比为6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液的制备方法如下首先制备无氧水，在灭菌锅中加入一升去离子水煮沸后，加入L-半光胺酸盐0.2～0.8g，盖上灭菌锅的盖，从锅盖的中间孔中插入医用针头，向灭菌锅内通入高纯氮气驱氧10～30min。配制10mL的6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液，将称量好的FeSO4·(NH4)2SO4放入厌氧管中，将另一个医用针头插入厌氧管中，通入高纯氮气，将厌氧管中的含氧空气吹走，用10mL的医用注射器从灭菌锅中吸10mL水注入厌氧管中，将密封后的厌氧管在121℃条件下灭菌15～30min即可。其它方法和步骤与具体实施方式一相同。具体实施例方式四本实施方式的硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重量份数制备而成K2HPO40.25、NH4CI0.6、Na2SO46、CaCI2·2H2O0.02、MgSO4·7H2O1.6、酵母膏4.5、质量百分浓度比为60％的乳酸钠溶液6、葡萄糖0.6、维生素C1.5、蒸馏水1050。具体实施例方式五本实施方式的硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重量份数制备而成K2HPO40.75、NH4CI1.45、Na2SO414、CaCI2·2H2O0.55、MgSO4·7H2O3.5、酵母膏7.5、质量百分浓度比为60％的乳酸钠溶液14、葡萄糖1.4、维生素C4.5、蒸馏水1950。具体实施例方式六本实施方式的硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重量份数制备而成K2HPO40.5、NH4CI1、Na2SO410、CaCI2·2H2O0.1、MgSO4·7H2O2.5、酵母膏6、质量百分浓度比为60％的乳酸钠溶液10、葡萄糖1、维生素C3、蒸馏水1000。权利要求1.，该方法是通过以下步骤实现的(1)、取样将油田的水样注入到经灭菌的通有高纯氮气的厌氧管中；(2)、以下操作在超净工作台下完成，紫外线灭菌20～40min，其特征是向灭菌的硫酸盐还原菌的培养基中加入1mL的质量百分浓度比为6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液备用；(3)、“厌氧MPN法”首先选择水样的稀释倍数，通常大于经验值的二到三个数量级，用倍比稀释法稀释，取水样1mL注入含9mL无氧水的厌氧管中，最终水样被稀释十倍，依次从该管中用一次性注射器取样1mL注入下一个用于倍比稀释的厌氧管中，直到选择稀释的倍数；(4)、选用三管至五管平行法，选用在同一个稀释梯度下做三个至五个平行样，吸取1mL注入备用的培养基中；(5)、将MPN的培养基放到摇床上，在38℃、180转/min条件下摇动；(6)、结果观察第四天和第七天分别计数。2.根据权利要求1所述的，其特征在于硫酸盐还原菌培养基的制备方法如下一、首先由下列成分按重量份数制备培养基，K2HPO40.2～0.8、NH4CI0.5～1.5、Na2SO45～15、CaCI2·2H2O0.01～0.6、MgSO4·7H2O1.5～4、酵母膏4～8、质量百分浓本文档来自技高网...

【技术保护点】
油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，该方法是通过以下步骤实现的：（１）、取样：将油田的水样注入到经灭菌的通用高纯氮气的厌氧管中；（２）、以下操作在超净工作台下完成，紫外线灭菌２０～４０ｍｉｎ，其特征是向灭菌的硫酸盐还原菌的培养基中加入１ｍＬ的质量百分浓度比为６％的ＦｅＳＯ↓［４］.（ＮＨ↓［４］）↓［２］ＳＯ↓［４］溶液备用；（３）、“厌氧ＭＰＮ法”：首先选择水样的稀释倍数，通常大于经验值的二到三个数量级，用倍比稀释法稀释，取水样１ｍＬ注入含９ｍＬ无氧水的厌氧管中，最终水样被稀释十倍，依次从该管中用一次性注射器取样１ｍＬ注入下一个用于倍比稀释的厌氧管中，直到选择稀释的倍数；（４）、选用三管至五管平行法，选用在同一个稀释梯度下做三个至五个平行样，吸取１ｍＬ注入备用的培养基中；（５）、将ＭＰＮ的培养基放到摇床上，在３８℃、１８０转／ｍｉｎ条件下摇动；（６）、结果观察：第四天和第七天分别计数。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马放，魏利，陈忠喜，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]