多重PCR制造技术

本发明专利技术提供了用于核酸扩增，特别是能使多重扩增反应中的副产物的生长和扩增最小化的组合物和方法。本发明专利技术提供了线性扩增分子。第一个实施方案包含第一通用引物序列、第一模板同源性区、可切割位点、第二通用引物序列和第二模板同源性区。本发明专利技术还提供了将线性扩增分子用于核酸扩增的方法。第一个实施方案包含模板特异性杂交、线性扩增、模板特异性分子内杂交、链切割、第二次线性扩增和使用通用引物的指数扩增。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
相关申请的交叉引用本申请要求提交于2001年11月19日的美国临时申请号60/331,693的优先权，所述申请全文引用于此作为参考。
技术介绍
核酸扩增和所得扩增产物的分析革新了基础和临床科学。这些技术的应用包括分子克隆、核酸测序、基因分型、单核苷酸多态性(SNP)和其它多态性及突变的检测和鉴定以及基因表达的定量。已经发展了多种用于核酸扩增的方法，如链置换扩增、基于转录的扩增和聚合酶链式反应(PCR)。PCR在大规模研究项目和临床中的应用会产生伴随大量PCR扩增子的生成的多种不同靶序列的扩增。随着所述项目规模的增加，单独实施所需反应变得成本高昂且效率低下。因此，发展使用通用模板和试剂混合物在同一容器内平行实施多重扩增反应的方法具有重要意义。所述多重PCR方法(其中使用多个靶标特异性引物对来扩增多个靶标)仅取得有限的成功。在同一试管中组合全部所需引物极大增加了引物-二聚体和其它副扩增产物生成的频率。由于多重PCR中引物对的增加，潜在引物-二聚体相互作用(或由两种不同引物所生成的假扩增子)的数目将根据使用引物的数目而指数性增加。即使在设计多重引物对时小心注意避免明显的引物-二聚体不相容，在非所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核酸扩增的方法，包括：（ａ）在支持特异性杂交的条件下，将线性扩增分子与核酸模板接触，（ｂ）在与所述模板杂交的末端处向所述线性扩增分子顺序加入与所述模板中存在的相应核苷酸互补的一个或多个核苷酸，由此形成延伸的线性扩 增分子，（ｃ）在支持其特异性分子内杂交的条件下，孵育所述延伸的线性扩增分子，由此形成双链分子内杂交区，其中一条链包含在步骤（ｂ）中新加入的核苷酸，（ｄ）在预先确定的位点切割所述延伸的线性扩增分子，由此形成所述 延伸的线性扩增分子的第一片段和第二片段；和由此所述第一片段与所述...

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：M法翰姆，EA纳姆萨拉伊夫，TD威利斯，
申请(专利权)人：帕拉里勒生物科学公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]