玉米品系MON863的外源插入载体的旁邻基因序列制造技术

一种玉米品系ＭＯＮ８６３的外源插入载体的旁邻基因序列，本发明专利技术的ＭＯＮ８６３玉米外源插入载体的旁邻基因序列，包括：编码玉米ＮＡＤＨ脱氢酶亚单位１和２的部分的核苷酸序列，而且所述的核苷酸序列与ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ．１中从核苷酸第１－２５３位的核苷酸序列完全相同或ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ．２中从核苷酸第１３８－４１１位的核苷酸序列完全相同；编码烟草花椰病毒的３５Ｓ启动子的部分序列，其来源于外源插入载体ＰＶ－ＺＭＩＲ１３，而且所述的核苷酸序列与ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ．１中从核苷酸第２５４－４５６位的核苷酸序列完全相同；编码小麦ｔａｈｓｐ１７３’终止子的部分序列，其来源于外源插入载体ＰＶ－ＺＭＩＲ１３，而且所述的核苷酸序列与ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ．２中从核苷酸第１－１３７位的核苷酸序列完全相同。本发明专利技术可以进一步用于建立转基因品系特异性ＰＣＲ检测方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种生物
的基因序列。具体的说，涉及一种玉米品系MON863的外源插入载体的旁邻基因序列。
技术介绍
随着植物遗传转化技术在基础研究和应用研究中的广泛应用，已生产出了多种转基因植物。转基因植物的外源插入载体的旁邻基因序列是转基因品系的一个重要生物学特征，因此，外源插入载体的旁邻基因序列是建立转基因植物品系特异性检测方法的重要试验依据。目前已经有部分专利和文献分析了转基因植物外源插入载体旁邻基因序列，例如Holck A等人于2002年利用TAIL-PCR方法分析了MON810玉米的旁邻基因序列，为转基因MON810玉米的品系特异性检测方法的建立提供了序列依据；Ronning S等人利用反向PCR方法于2003年分析了Bt11玉米的旁邻基因序列，为转基因Bt11玉米的品系特异性检测方法的建立提供了序列依据。然而，在对现有专利和文献的分析中发现，还没有任何关于MON863玉米品系的外源插入载体旁邻基因序列分析的文章和专利报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足，提供了一种玉米品系MON863的外源插入载体的旁邻基因序列。本专利技术公布了与玉米MON863的外源插入载体PV-ZMIR13两端邻接的玉米基因组中的玉米NADH脱氢酶基因的部分序列，编码NADH脱氢酶亚单位1和2，本专利技术可以进一步用于建立转基因品系特异性PCR检测方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的，本专利技术分离出一种DNA分子，该分子含有MON863玉米外源插入载体的旁邻基因序列，包括编码玉米NADH脱氢酶亚单位1和2的部分的核苷酸序列，而且所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸第1-253位的核苷酸序列完全相同或SEQ ID NO.2中从核苷酸第138-411位的核苷酸序列完全相同；编码烟草花椰病毒的35S启动子的部分序列，其来源于外源插入载体PV-ZMIR13，而且所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸第254-456位的核苷酸序列完全相同；编码小麦tahsp 173’终止子的部分序列，其来源于外源插入载体PV-ZMIR13，而且所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.2中从核苷酸第1-137位的核苷酸序列完全相同。所述的分离，是指，用TAIL-PCR方法从玉米基因组中扩增出特异DNA分子。所述的MON863外源插入载体PV-ZMIR13，指的是用来转化生产MON863玉米的重组质粒，其由NPTII抗性基因表达盒和cry3Bb1基因表达盒组成。所述的MON863外源插入载体PV-ZMIR13的通用元件，指的是CaMV35S启动子和小麦tahsp 173’终止子，其分别来源于烟草花椰病毒和小麦基因组。所述的MON863外源插入载体与植物基因组的邻接区的DNA序列，指的是一段由玉米基因组序列和外源插入载体序列组成的DNA序列。其中，MON863玉米品系5’端旁邻基因序列为456bp，该序列包括编码玉米NADH脱氢酶亚单位1和2的部分的核苷酸序列，长度为253bp，而且所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸第1-253位的核苷酸序列完全相同；编码小麦tahsp 173’终止子的部分序列，长度为203bp，而且所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸第1-137位的核苷酸序列完全相同。其中，MON863玉米品系3’端旁邻基因序列为411bp，该序列包括编码玉米NADH脱氢酶亚单位1和2的部分的核苷酸序列，长度为274bp，而且所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.2中从核苷酸第138-411位的核苷酸序列完全相同；编码编码小麦tahsp 173’终止子的部分序列，而且所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.2中从核苷酸第1-137位的核苷酸序列完全相同。本专利技术的优越性在于，首次克隆了MON863玉米外源基因的旁邻序列，并且明确了MON863玉米品系的外源插入载体的旁邻序列可以用作目的DNA扩增片段建立灵敏、特异性的玉米MON863的品系特异性定性、定量PCR检测。本专利技术所克隆、分离的外源插入载体PV-ZMIR13的旁邻序列可以进一步用于建立转基因品系特异性PCR检测方法，这种方法较转基因筛选检测、基因特异性检测和构建特异性检测方法更加特异的检测方法，符合国际上转基因的检测方法。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆实验室手册(New YorkCold SpringHarbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1MON863玉米外源插入载体旁邻序列的克隆一.实验材料1、植物材料遗传改良玉米MON863玉米、Mon810玉米、Bt11玉米、Bt176玉米、TC1507玉米、GA21玉米等。常规玉米2、酶与试剂植物基因组DNA提取试剂盒为上海市农业科学院和上海出入境检验检疫局联合研制的食品DNA抽提试剂盒。dNTPs、Taq DNA聚合酶及其缓冲液、DL2000 Marker购自大连宝生物工程有限公司。随机引物、TaqMan探针及引物由上海博亚生物工程有限公司合成。其它生化试剂均为进口分装或国产分析纯。3.实验仪器DY-501型核酸电泳仪(上海精密科学仪器有限公司)PTC-100型PCR扩增仪(MJ Research Inc.)Rotor-Gene 2000定量PCR仪(Corbett Research，Australia)BECKMAN公司的DUR640核酸和蛋白分析仪DNA测序仪(Applied Biosystem377型全自动荧光序列分析仪)DNA电泳分析系统包括暗箱、数码照相机、计算机、扫描仪、喷墨打印机、光敏打印机、Tanon UV-2000紫外分析仪、Gis凝胶图象分析软件(上海天能公司) 其他仪器包括离心机，恒温水浴锅，培养箱，天平等。二、实验方法与过程1、外源插入载体的插入情况通过查阅MON863玉米转基因安全性评价相关的资料，我们发现MON863玉米是通过将外源质粒PV-ZMIR13转化到玉米基因组上获得的。质粒PV-ZMIR13以一个完整的拷贝插入到玉米基因组中，其中包括一个完整的Cry3Bb1基因的表达盒和一个完整的NptII基因的表达盒。2、外源插入载体各元件来源转化到MON863玉米基因组中的PV-ZMIR13质粒主要包含两个完整的基因表达盒，一个是Cry3Bb1基因的表达盒，另一个是NptII基因的表达盒。在Cry3Bb1基因的表达盒中，含有4-AS1启动子、wt CAB前导序列、水稻Actin基因5’端部分序列、Cry3Bb1基因和tahsp 173’终止子；NptII基因的表达盒包含CaMV35S启动子、NptII基因和NOS 3’终止子。外源插入质粒PV-ZMIR13各元件的来源详见表1。表1.质粒PV-ZMIR13L及遗传元件表 3、植物基因组DNA提取与检测3.1 植物DNA提取 a)取适量的玉米样品放在研钵中，加入液氮将样品研磨成粉末，称取约70mg-100mg磨碎的样品转入1.5ml的Eppendorf管本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种玉米品系ＭＯＮ８６３的外源插入载体的旁邻基因序列，其特征在于，分离出一种的ＤＮＡ分子，该分子含有ＭＯＮ８６３玉米外源插入载体的旁邻基因序列，包括：编码玉米ＮＡＤＨ脱氢酶亚单位１和２的部分的核苷酸序列，而且所述的核苷酸序列与ＳＥＱＩＤ ＮＯ．１中从核苷酸第１－２５３位的核苷酸序列完全相同或ＳＥＱＩＤＮＯ．２中从核苷酸第１３８－４１１位的核苷酸序列完全相同；编码烟草花椰病毒的３５Ｓ启动子的部分序列，其来源于外源插入载体ＰＶ－ＺＭＩＲ１３，而且所述的核苷酸序列与Ｓ ＥＱＩＤＮＯ．１中从核苷酸第２５４－４５６位的核苷酸序列完全相同；编码小麦ｔａｈｓｐ１７３’终止子的部分序列，其来源于外源插入载体ＰＶ－ＺＭＩＲ１３，而且所述的核苷酸序列与ＳＥＱＩＤＮＯ．２中从核苷酸第１－１３７位的核苷酸序 列完全相同。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张大兵，杨立桃，潘爱虎，梁婉琪，尹长松，许诵辞，章可为，武爱波，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]