海绵共附生微生物群落总DNA的快速提取方法技术

一种海绵共附生微生物群落总ＤＮＡ的快速提取方法，先将海绵样品切成小块，悬浮于ＴＥ缓冲液中放置冰上直接研磨，完成海绵组织的裂解，然后在得到的ＴＥ悬浮海绵裂解物中，加入溶菌酶、十二烷基磺酸纳及蛋白酶Ｋ处理，离心后加入Ｔｒｉｓ－饱和酚抽提，然后依次采用Ｔｒｉｓ－饱和酚、氯仿、异戊醇溶液及氯仿、异戊醇溶液提取，再依次加入ＮａＣｌ及异丙醇得到ＤＮＡ沉淀，洗涤后溶解于ＴＥ缓冲液，采用ＲＮＡ酶消解ＲＮＡ，最后琼脂糖凝胶电泳分析检测提取的ＤＮＡ样品。本发明专利技术可在一般实验室快速、方便地得到大片段的海绵共附生微生物的群落总ＤＮＡ样品，可满足基于核酸的海绵共附生微生物种群结构与多样性分析的需要。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种海绵共附生微生物群落总ＤＮＡ的快速提取方法，其特征在于包括如下步骤：１）直接机械研磨裂解海绵组织：将海绵样品在无菌条件下切成小块，加入由三羟甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸钠配制的ｐＨ值为８．０－８．２的ＴＥ缓冲液，于冰块上直接研磨５ －３０分钟使海绵组织块破碎裂解变成均匀的悬浮液；２）细胞破壁与ＤＮＡ释放：取海绵组织悬浮液，离心弃上清后，加入ＴＥ缓冲液悬浮沉淀，振荡混匀后离心弃上清，再加ＴＥ缓冲液悬浮沉淀，并加入溶菌酶混匀后于３５－４０℃水浴处理，再加十二烷基硫 酸钠及蛋白酶Ｋ混匀后４５－５０℃水浴处理，离心取上清，加入等体积的Ｔｒｉｓ－饱和酚充分混匀处理，离心后取...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李志勇，何丽明，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]