测定延伸产物的存在的方法技术

本发明专利技术涉及一种方法及试剂，用于测定在包含核酸链延伸的反应如循环微测序中产生的延伸产物，还涉及该方法在鉴定特异性点突变和遗传变异中的应用。需要三种标准的未修饰的引物，可用一种非特异荧光试剂（如一种单链ＤＮＡ结合染料）作为ＦＲＥＴ检测中使用的荧光团之一。该发明专利技术还涉及垂直光束荧光计量术。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种方法及试剂，用于测定在包含核酸链延伸的反应如循环微测序(cyclic minisequencing)中产生的延伸产物，还涉及该方法在检测特异性点突变和遗传变异中的应用。
技术介绍
点突变，即基因中单个核苷酸的改变，是人类遗传病的一个主要原因。因为诊断的目的，有很多适用于检测已知点突变的技术。这些方法可分为依靠全部和部分互补DNA链之间的差示杂交动力学手段的，或是依靠酶辅助点突变检测的(Landegren，et al.，1998)。利用放射性标记寡核苷酸探针进行的经典ASO(等位基因特异性寡核苷酸杂交)(Wallace，et al.，1979)，经过多年的发展已成为一种动力学均一性分析系统(Whitcombe，et al.，1998；Wittwer，et al.，1997a；Wittwer，et al.，1997b)，这证明了该领域的快速发展。当高密度DNA阵列可以直接在玻璃表面合成后，研究成百上千的突变成为可能(Fodor，et al.，1991；Lipshutz，etal.，1999)。这种快速发展的DNA微阵列技术也是基于全部和部分互补DNA链之间的差示杂交。本文档来自技高网...

【技术保护点】
在反应混合物中测定延伸产物，即经延伸后的寡核苷酸引物的存在的方法，其中，将要通过模板依赖方式掺入寡核苷酸引物３′端的脱氧核苷（５′－）三磷酸（ｄＮＴＰ）中含有标记，该方法包括如下步骤：ａ）在适于引物延伸的条件下，用该ｄＮＴＰ延伸该寡 核苷酸引物；ｂ）使荧光试剂与得自步骤ａ）的所述经延伸的寡核苷酸引物接触，从而与该延伸的寡核苷酸引物结合；ｃ）通过测量激发后的荧光发射强度来测定该延伸的寡核苷酸引物的存在。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：阿托奥帕纳，奥斯莫斯沃瓦尼米，
申请(专利权)人：拜奥希特公司，
类型：发明
国别省市：FI[芬兰]