一种制备巨杆菌素Bacimethrin的方法技术

本发明专利技术公开了利用海洋细菌发酵制备巨杆菌素Bacimethrin的方法。巨杆菌素(Bacimethrin,4-Amino-2-methoxy-5-pyrimidylmethanol)分子量为155.16，分子式为C6H9N3O2。通过天然产物分离方法从海洋解淀粉芽孢杆菌B5(Bacillus amyloliquefaciens strain chenj-5)发酵产物中分离得到。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种制备巨杆菌素Bacimethrin的方法，其特征在于步骤如下：A海洋解淀粉芽孢杆菌B5的发酵产物的预处理：海洋解淀粉芽孢杆菌B5的发酵产物煮沸10分钟，静置过夜或离心分离，去除固体获得上清液；将上清液依次通过截留分子量为10000Da、1000Da和300Da的纳滤膜，获得小于300Da分子量的膜下过滤液；将此过滤液真空浓缩至原体积的1/5得到浓缩液；其中所述的海洋解淀粉芽孢杆菌B5在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2014年5月27日，保藏单位名称为中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M2014229。B将浓缩液移至分液漏斗或萃取罐中，按体积比为1:1加入乙酸乙酯充分混匀萃取10分钟，静置10分钟水相和有机相分离，收集乙酸乙酯相；再在残余水相中加入等体积的乙酸乙酯按上述方法萃取，合计萃取3次；合并3次的乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，回收乙酸乙酯，获得乙酸乙酯萃取相的浸膏。C称取乙酸乙酯萃取相的浸膏，用甲醇溶解浸膏并拌入ODS填料中，自然挥干或减压干燥后装入20mm*100mm的制备液相柱的预装柱中；利用3个柱体积的5％质量浓度的甲醇水溶液，按16ml/min的流速润洗25mm*500mm的ODS制备柱；连接上上述的预装柱，梯度洗脱，按每管45ml接取洗脱液，278nm处检测洗脱峰，收集15.35min处附近的洗脱峰，并依次标号；利用高效液相色谱测定各接收管浓缩物中巨杆菌素的纯度；所述梯度洗脱如下：表1中压制备液相梯度洗脱表所述高效液相色谱检测条件如下：C18柱型号为Shim‑pack VP‑ODS，内径4.6mm，柱长250mm，填充介质为C18；检测波长：278nm；柱温箱温度：30℃；上样量为5ul，流动相的流速为1ml/min；流动相由A液和B液组成；A液：甲醇；B液：纯水；用10％甲醇等度洗脱。D合并上述巨杆菌素纯度大于85％以上的接收管，真空减压浓缩至原体积的1/5，加入少量巨杆菌素晶种，在15℃进行结晶；待晶型长大后，移去母液；利用少量纯甲醇洗巨杆菌素表面残液，再加入少量纯甲醇溶解巨杆菌素结晶，于15℃下进行重结晶，待晶型长大后，移去母液，利用少量纯甲醇洗去巨杆菌素表面残液，获得巨杆菌素纯晶体。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：夏艳秋，朱强，詹永成，陈静，张晓君，史大华，郭瑛，许福泉，阎斌伦，
申请(专利权)人：淮海工学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32