人淋巴细胞疫苗佐剂制造技术

本发明专利技术涉及一种得自人淋巴细胞的佐剂。该佐剂可以和传统的疫苗或癌症免疫疗法一起使用，以增强患者的免疫系统对疫苗或其它免疫治疗剂的应答。该佐剂得自从培养的活化淋巴细胞收集的上清液。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种得自人淋巴细胞的佐剂。该佐剂可以和传统的疫苗或癌症免疫疗法一起使用，以增强患者的免疫系统对疫苗或其它免疫治疗剂的应答。
技术介绍
免疫学佐剂和疫苗一起用于增加对抗原的免疫应答。一方面，免疫学佐剂发挥作用的一种方式就是通过将巨噬细胞吸引到抗原，从而使巨噬细胞可以将抗原提呈到部位淋巴结并启动有效的抗原响应。佐剂本身亦可作为抗原载体，或者可以通过其它机理影响免疫应答，诸如储存作用、细胞因子诱导、补体激活、招募免疫系统的不同细胞群、传输抗原到不同的抗原提呈细胞、调节HLA I类或II类分子的表达和刺激以产生不同的抗体亚型。许多较新的疫苗仅产生微弱的免疫性，因而需要存在佐剂。具有佐剂活性的物质为公知的。矾(Alum)(Al(OH)3)和类似的铝凝胶为经许可用于人的佐剂。Glenny在1926年首次发现了矾的佐剂活性(Chemistry and Industry，Jun.15，1926；J.Path.Bacteriol，34，267)。氢氧化铝和磷酸矾(一起通称为铝)常规地用作人和家畜疫苗中的佐剂。已充分确定了矾在增强抗体对白喉和破伤风类毒素应答方面的功效，近来，HBsAg疫苗以矾作为佐剂。也知道其它物质具有佐剂活性，并且这些物质包括完全弗氏佐剂，一种矿物油包水型乳剂，其在油相中含有死的干的分支杆菌；不完全弗氏佐剂，一种不含分支杆菌的较弱制剂；皂角苷，一种从Quillia saponaria树萃取的膜活性葡糖苷；非离子阻滞共聚物表面活性剂，非代谢的合成分子，其趋向于将蛋白质结合到细胞表面；ISCOMS，含有Quil A(皂角苷)的脂质胶束，其在生理上讲下模仿感染微粒；以及胞壁酰二肽，一种白细胞刺激分子，为死分支杆菌的一种活性成分。在癌症治疗中，一种已知佐剂为卡介苗(BCG)，其与多种抗癌疫苗方案一起使用。也已经发现当GM-CSF与自体肿瘤细胞一起使用时为一种有效的佐剂。对于所有的这些试剂，毒性、不能接受的慢性反应和/或低效能(就BCG来说)成为当前限制它们用作潜在佐剂的特征。因此，在癌症治疗和其它疾病治疗中，一直都需要可促进对疫苗的人免疫应答的新佐剂。在研发佐剂时，一类研究致力于树突状细胞。树突状细胞(DC)为专业抗原提呈细胞(APC)，具有可启动体内外初级免疫应答的独特能力(1-3)。它们衍生自骨髓(DC1)或淋巴(DC2)前体，并以其不成熟形式遍及全身，分布在常遇到环境病原体的组织中(皮肤、粘膜、肠上皮细胞等)(1，2，4-7)。然而，DC1和DC2在外周循环中包含的单核细胞占总数的百分数较小，CD14+/CD11c+/HLA-DR+单核细胞形式的DC1前体相对丰富，大约组成了单核血细胞的10％-15％(11-15)。未成熟的DC表达了大量的涉及抗原捕获、DC活化/成熟和抗原提呈的表面结构(1，2，8)。一旦DC遇到抗原，它们经历一种成熟过程，该过程的特征在于HLA I类和II类分子以及共刺激分子上调，并在T和B淋巴细胞上与同源受体发生反应，导致产生抗原特异性细胞和体液的免疫应答(1，2，9，10)。DC被视为免疫系统中的初级APC。可分离这些细胞和/或其前体以及在体外对它们进行研究的能力大大增加了有关它们在天然的和获得性免疫中的作用方面的知识(1，2)。体外产生人DC的典型方式就是从外周血中分离和富集CD14+单核细胞，并在GM-CSF和IL-4中培养多个时间周期，随后用许多细胞因子使之最终成熟，包括IL-2、IL-6、IL-7、IL-13、IL-15、TNFα、IL-1β(16，36)或包含脂多糖、PGE2、1型干扰素或双链RNA在内的多种其它试剂(20-24)。许多研究者已表明这些在体外生成的单核细胞衍生的DC为潜在的抗原提呈细胞(APC)，能够启动初级的以及恢复抗原特异性的CD4+和CD8+T细胞响应(27-30)。最近的体外研究已产生了一个有关DCl生物学的相当广泛的信息体，并阐明了这些在体内产生抗原特异性免疫应答的过程(1-2)。在外围组织中，未成熟DC在危险信号中获取抗原物质，启动了由DC和附近的其它细胞型生成的复杂的细胞因子/趋化因子环境(31)。由DC产生的可溶性介体可以以自分泌或旁分泌方式发生作用。T细胞在与抗原武装的DC发生相互作用后产生其它的细胞因子和趋化因子，如同由释放出的细胞因子活化其它免疫细胞那样(32-35)。这种复杂的相互作用网可以依次创造一种可促进从其单核细胞前体中产生DC的环境。几个研究者已描述了可使用多种无细胞培养物的上清液，也称为″条件培养基″作为DC成熟剂。这些培养基或多或少含有明确限定的细胞因子混合物(12，25，26)。已表明含有IFNα、IL-1β、IL-6和TNFα的单核细胞条件培养基(MCM)可诱导CD83、p55具有成熟DC特征的表面分子的表达(26)。然而，当将这些细胞因子组合以相当于在条件培养基中发现的浓度加入到未成熟DC中时，与MCM相比，它们在使成熟DC时的有效性较小。这些结果暗示出需要其它成分以实现未成熟DC的完全成熟。在一次研究中，Kato等通过用粘附到塑料表面的抗CD3单克隆抗体培养分离的T细胞而制备了条件培养基(称为TCCM)(25)。该培养基能够使从在GM-CSF和IL-4中培养的单核细胞生成的未成熟DC成熟。有趣地是，抗CD3的不同克隆诱导出不等量的可溶性CD40配基和IFNγ，并且这些差别反映为培养基使DC成熟的能力。尽管MCM和TCCM为使DC最终成熟的非常有效的介体，但是未报道它们将单核细胞分化为未成熟DC的能力。专利技术人注意到在一件报道中采用来自CpG-A寡核苷酸刺激的PBMC培养基观察这种活性(33)。已很好地确定了CpG-A可通过PBMC中的一种次要细胞成分血浆细胞状DC诱导1型干扰素产生(IFNα/IFNβ)(6，37-39)。在被引用的研究中，IFNa抗体减少但没有废除培养基的活性，暗示出其它的细胞因子可能参与了单核细胞分化的诱导。由于已知IFNa在可影响单核细胞分化的其它细胞型(包括T细胞)中诱导生成细胞因子，因此这是完全可能的(6，38，39)。考虑到当将可促使树突状细胞成熟的化合物或成分与疫苗抗原一起给药时，会导致更多的抗原提呈细胞将疫苗抗原提呈到T淋巴细胞和B细胞，从而促进对疫苗抗原的免疫应答。
技术实现思路
本专利技术通过提供基于人淋巴细胞产品的新佐剂而解决了上述需求，可提供免疫潜能并增加对疫苗抗原免疫应答的数量和质量。在本专利技术的一个方面，从来自体外刺激培养的人外周血单核细胞收集的上清液物质中获得佐剂。在培养过程中激活首次用于实验的T细胞。该佐剂发挥作用以增强疫苗启动、创造、加强免疫和/或维持对人和其它动物或植物种中的试剂的免疫应答能力。本专利技术提供了一种佐剂，其基于从用抗CD3/CD28包被珠刺激的外周血单核细胞中获得的细胞因子和趋化因子的混合物。如本文所用的，术语″淋巴细胞条件培养基(LCM)″将用于指这种佐剂。已经发现LCM为一种高效的条件培养基，具有使单核细胞衍生的DC成熟并将单核细胞变为强APC的能力。该佐剂可提供一种快速、经济以及可能更″生理的″方法，以便从体外前体细胞中得到大量DC1，并因而LCM可作为一种有效的疫苗佐剂发挥功能。认为在启动体内免疫应答后，PBMC衍生的产品可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于增强哺乳动物中对抗原免疫应答的方法，包括将淋巴细胞条件培养基和所述抗原一起施用于所述哺乳动物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：莲见贤一郎，DL曼恩，KG翰克，KM赫尔特，
申请(专利权)人：哈苏米有限责任公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]