一种酶活提高的γ‑谷氨酰转肽酶突变体及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种酶活提高的γ‑谷氨酰转肽酶突变体及其构建方法，属于基因工程领域。本发明专利技术的突变体是在SEQ ID N0.2所示的氨基酸的基础上，将第413位氨基酸由苏氨酸突变成半胱氨酸。本发明专利技术得到的突变体在枯草芽孢杆菌中表达，γ‑谷氨酰转肽酶突变体酶的转肽反应活力较突变前提高12％，水解反应活力降低了50％。本发明专利技术表明413位氨基酸残基对γ‑谷氨酰转肽酶的转肽反应活力有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。本发明专利技术所得的γ‑谷氨酰转肽酶突变体可用于制备L‑茶氨酸。

A gamma glutamyl transpeptidase enzyme activity increased in the mutant and its construction method

【技术实现步骤摘要】
一种酶活提高的γ-谷氨酰转肽酶突变体及其构建方法
本专利技术涉及一种酶活提高的γ-谷氨酰转肽酶突变体及其构建方法，属于基因工程

技术介绍
L-茶氨酸，是存在于茶类植物中的一种天然氨基酸，决定茶叶的品质和风味，对人体具有多方面的健康功效，其作为一种食品组分及饮品添加剂的需求量日益增加。目前，茶氨酸生产的研究主要集中在酶转化法，而其中γ-谷氨酰转肽酶又以其独特的优越性脱颖而出。γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT，EC2.3.2.2)负责催化γ-谷氨酰类化合物的γ-谷氨酰分子转移到其他氨基酸、短肽等受体分子上(转肽反应)或水分子上(水解反应)，广泛存在于哺乳动物和细菌中。当以L-谷氨酰胺为供体，乙胺为受体，γ-谷氨酰转肽酶催化转肽反应时，即可生成L-茶氨酸，该反应过程耗时短，不需要额外添加ATP，具有诸多优势。γ-谷氨酰转肽酶催化合成L-茶氨酸突出的问题是，存在水解反应，造成副产物L-谷氨酸的合成。一般情况下通过优化控制供体和受体之间用量比例、调节pH等条件来优化反应，降低副产物的合成，但是副产物L-谷氨酸积累仍然存在。因此，本专利技术在上本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种γ‑谷氨酰转肽酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种γ-谷氨酰转肽酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.编码权利要求1所述突变体的基因。3.一种含有权利要求2所述基因的重组表达载体。4.一种表达权利要求1所述γ-谷氨酰转肽酶突变体的基因工程菌。5.一种制备权利要求4所述基因工程菌的方法，其特征在于，是在SEQIDNO.4所示序列的基础上，将第413位苏氨酸突变成半胱氨酸，得到重组基因，将重组基因连到表达载体得到重组质粒，重组质粒转化到枯草芽孢杆菌宿主菌中即得到枯草芽孢杆菌基因工程菌。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述方法具体是:(1)以SEQIDNO.3...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶志明，杨套伟，张显，徐美娟，刘会灵，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32