食品中鱼类过敏原快速检测试剂盒的制备和检测方法技术

本发明专利技术属于食品中过敏原的检测技术，具体地说是用实时荧光ＰＣＲ技术检测食品中鱼类过敏原的试剂盒及方法。试剂盒包括ＰＣＲ扩增反应液Ａ、阳性对照ＤＮＡ　　Ｂ；ＰＣＲ扩增反应液Ａ含有１０×ＰＣＲ反应缓冲液、硫酸镁、ｄＮＴＰ（含ｄＵＴＰ）、ＵＮＧ酶、Ｔａｑ酶、上游引物５′－ＣＡＧＧＡＣＡＡＧＡＧＴＧＧＣＴＴＣＡＴ－３、下游引物５′－ＧＡＡＧＴＴＣＴＧＣＡＧＧＡＡＣＡＧＣＴＴ－３′、ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针５′－ＡＧＧＡＧＧＡ（Ｔ／Ｇ）ＧＡＧＣＴ－３′；鱼类过敏原的快速检测方法包括食品ＤＮＡ的提取、鱼类过敏原基因的实时荧光ＰＣＲ扩增和结果判定。其优点是快速、特异性强、灵敏度高、操作简便、重复性好。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种鱼类过敏原快速检测试剂盒，其特征在于其中的试剂包括（１）－（２）：（１）ＰＣＲ扩增反应液Ａ包括１０×ＰＣＲ反应缓冲液、０．１－０．４ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ（含ｄＵＴＰ）、２－４ｍｍｏｌ／Ｌ硫酸镁、１－２ＵＴａｑ酶、０．２－０．５ＵＵＮＧ酶、０．２－０．６μｍｏｌ／Ｌ上游引物、０．２－０．６μｍｏｌ／Ｌ下游引物′、０．２－０．６μｍｏｌ／ＬＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针；其中１０×ＰＣＲ反应缓冲液含有１００ｍｍｏｌ／ＬｐＨ８．８的三羟基甲基氨基甲烷－盐酸、５００ｍｍｏｌ／Ｌ氯化钾和１％曲拉通Ｘ－１００；其中上游引物序列为：５′－ＣＡＧＧＡＣＡＡＧＡＧＴＧＧＣＴＴＣＡＴ－３′、下游引物序列为：５′－ＧＡＡＧＴＴＣＴＧＣＡＧＧＡＡＣＡＧＣＴＴ－３′；其中ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针中间部位有一个简并碱基，序列为：５′－ＡＧＧＡＧＧＡ（Ｔ／Ｇ）ＧＡＧＣＴ－３′；（２）ＵＮＧ酶：１Ｕ／μＬ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙敏，高宏伟，梁成珠，林超，
申请(专利权)人：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]