厌氧同时还原硫酸盐和反硝化功能菌株的筛选用培养基及筛选方法技术

厌氧同时还原硫酸盐和反硝化功能菌株的筛选用培养基及筛选方法，它涉及一种菌株的筛选用培养基及筛选方法。它解决了现有技术筛选厌氧同时还原硫酸盐和反硝化功能细菌存在分离困难、分离周期长，及分离到的菌株的硫酸盐还原和反硝化降解效能低的问题。筛选用培养基分液体和固体两种筛选用培养基。菌株的筛选：一、取污水或活性污泥；二、配制筛选用培养基；三、固体培养基分离；四、液体富集；五、重复三至四的操作；六、功能验证；选取性能优异的菌株即可。本发明专利技术筛选的菌株能同时去除硫酸盐和硝酸盐，且去除率高。筛选用培养基的针对性强。本发明专利技术方法简单有效、分离快速、培养周期短、工作效率高，并筛选出目前筛选不到的污水处理性能优异的菌株。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种菌株的筛选用培养基及筛选方法。
技术介绍
厌氧同时还原硫酸盐与反硝化细菌主要用于同时含有硫酸盐和硝酸盐污 水的处理，现有筛选同时还原硫酸盐与反硝化细菌方法的分离周期较长，同时 不易获得纯菌株，及时获得了菌株，其对硫酸盐和硝酸盐的降解效能低。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术筛选厌氧同时还原硫酸盐与反硝化功 能细菌存在分离困难、分离周期长，及分离到的菌株的硫酸盐还原和反硝化降 解效能低的问题，提供了一种厌氧同时还原硫酸盐和反硝化功能菌株的筛选用 培养基及筛选方法。本专利技术厌氧同时还原硫酸盐和反硝化功能菌株的筛选用培养基分液体筛选培养基和固体筛选培养基两种；每升液体筛选培养基由3.0~5.0gNa2SO4、 1.0 3.0g KN03、 1.0 3.0g NaN03、 0.5 2gMgSO4'7H2O、 0.3~0,6g K2HP04、 3.0 6.0g酒石酸钾钠、0.5 2g KH2P04、 0.1~0.5gCaCl2'2H2O、 0.3~0.8g L-半胱 氨酸和余量的蒸馏水组成，液体筛选培养基的pH值为7.5;每升固体筛选培 养基是由3.0 5.0g Na2S04、 1.0 3.0g KN03 、 1.0~3.0g NaN03 、 0.5~2g MgS04'7H20、0.3 0.6g K2HP04、3.0~6.0g酒石酸钾钠、0.5~2g KH2P04、0.1 0.5g CaCl2'2H20 、 10 15g琼脂粉、0.05 0.4mL浓度为0.2~0.4g/L的刃天青溶液、 Q.3 0.8g L-半胱氨酸和余量的蒸馏水组成，固体筛选培养基的pH值为7.5。本专利技术的液体培养基和固体培养基均处于厌氧状态。本专利技术厌氧同时具有还原硫酸盐和反硝化功能的菌株的筛选方法是按下 述步骤实现的 一、分别配制如权利要求1所述的液体筛选培养基和固体筛选 培养基；二、取厌氧同步去除硫氮工艺的污水或活性污泥，在厌氧条件下进行倍比稀释；三、固体培养基分离将步骤一配制固体培养基在沸水浴中融化，然后冷却至45~55°C，迅速将步骤二稀释的污水或活性污泥用注射器注入固体培养基中，采用Himgate厌氧及"滚管"方法在冷水(10°C)中混合，然后放入 恒温培养箱中在厌氧、35 38"C条件下培养，直至长出菌落；四、液体培养基 富集挑取步骤三培养的单菌落接种到步骤一配制的液体培养基，厌氧环境下培养7天 14天；五、分离纯化；六、重复步骤三至五的操作进行多次分离纯化，直至获得纯菌株；七、对步骤六得到的纯菌株性能检测，选取还原硫酸盐 和反硝化功能性能优异的菌株，即完成对厌氧同时具有还原硫酸盐和反硝化功 能的菌株的筛选。整个筛选过程在厌氧条件下进行。本专利技术的水处理除污菌株能同时去除硫酸盐和硝酸盐，并且去除效率高， 硝酸盐的去除率高达97.98%， SO:—的去除率高达96.48%。筛选用培养基的针 对性强。本专利技术的方法简单有效、分离快速、培养周期短、工作效率高，并可 筛选出目前筛选不到的污水处理性能优异的菌株的优点。附图说明图1是SN22-2菌单株原子力扫描电镜照片。图2是SN22-2菌多株原子 力扫描电镜照片。图3是SN22-2菌对硝酸盐去除率曲线图，图中-x-表示 SN22-2菌对NO;的去除率曲线，i表示培养基中NO〗的浓度曲线，i-表示 培养基中NO〗的浓度曲线。图4是SN22-2菌对SO:'的去除率曲线图，图中-x-表示SN22-2菌对SO:—的去除率曲线，-女-表示培养基中SO:—的浓度曲线。图 5是基于SN22-2菌株和相近的菌株16S rDNA序列构建的NJ系统发育树。具体实施例方式具体实施方式一本实施方式中厌氧同时还原硫酸盐和反硝化功能菌株的 筛选用培养基分液体筛选培养基和固体筛选培养基两种；每升液体筛选培养基 由3.0~5.0gNa2SO4、 1.0 3.0g KN03、 1.0 3.0g NaN03、 0.5 2gMgSO4.7H2O、 0.3 0.6gK2HPO4、 3.0 6.0g酒石酸钾钠、0.5~2g KH2P04、 0.1 0.5gCaCl2.2H2O、 0.3 0.8gL-半胱氨酸和余量的蒸馏水组成，液体筛选培养基的pH值为7.5;每 升固体筛选培养基是由3.0 5.0g Na2S04、 1.0 3.0g KN03、 1.0~3.0g NaN03、 0.5 2gMgSO4'7H2O、 0.3~0.6g K2HP04、 3.0~6.0g酒石酸钾钠、0.5~2g KH2P04、 0.1~0.5gCaCl2'2H2O 、 10 15g琼脂粉、0.05~0.4mL浓度为0.2 0.4g/L的刃天 青溶液、0.3 0.8g L-半胱氨酸和余量的蒸馏水组成，固体筛选培养基的pH值 为7.5。本实施方式的液体培养基和固体培养基均处于厌氧状态。具体实施方式二本实施方式与具体实施方式一不同的是每升液体筛选培养基由4gNa2S04、 2.0gKNO3、 2.0gNaNO3、 1.0gMgSO4.7H2O、 0.5gK2HPO4、 5.0g酒石酸钾钠、1.0gKH2PO4、 0.2g CaCl2'2H20、 0.5g L-半胱氨酸和余量的 蒸馏水组成。其它与具体实施方式一相同。 本实施方式的液体培养基处于厌氧状态。具体实施方式三本实施方式与具体实施方式一不同的是每升固体筛选 培养基由4gNa2S04、 2.0g KN03、 2.0gNaNO3、 l.Og MgS04.7H20、 0.5g K2HP04、 5.0g酒石酸钾钠、1.0gKH2PO4 、 0.2gCaCl2'2H20 12g琼脂粉、O.lmL浓度为 0.2g/L的刃天青溶液、0.5gL-半胱氨酸和余量的蒸馏水组成。其它与具体实施 方式一相同。本实施方式的固体培养基处于厌氧状态。具体实施方式四本实施方式中利用具体实施方式一所述的筛选用培养基筛选厌氧同时具有还原硫酸盐和反硝化功能的菌株，整个筛选过程在厌氧条件下进行，筛选方法是按下述步骤实现的 一、分别配制如权利要求1所述的液 体筛选培养基和固体筛选培养基；二、取厌氧同步去除硫氮工艺的污水或活性 污泥，在厌氧条件下进行倍比稀释；三、固体培养基分离将步骤一配制固体 培养基在沸水浴中融化，然后冷却至45 55。C，迅速将步骤二稀释的污水或活 性污泥用注射器注入固体培养基中，采用Hungate厌氧及"滚管"方法在冷水中 混合，然后放入恒温培养箱中在厌氧、35 38。C条件下培养，直至长出菌落； 四、液体培养基富集挑取步骤三培养的单菌落接种到步骤一配制的液体培养基，厌氧环境下培养7天~14天；五、分离纯化；六、重复步骤三至五的操作 进行多次分离纯化，直至获得纯菌株；七、对步骤六得到的纯菌株性能检测， 选取还原硫酸盐和反硝化功能性能优异的菌株，即完成对厌氧同时具有还原硫 酸盐和反硝化功能的菌株的筛选。本实施方式步骤一中采用蒸煮方法配制液体培养基，在蒸煮过程中通入高纯氮气(高纯氮气中氧气浓度《2ppm)以驱除氧气，同时向培养基中加入还 原剂(L-半胱氨酸)，利用其还原作用去除氧，降低氧化还原电位，使氧化还 原电位(ORP)低于-100mV，由此液体培养基处于厌氧状态。本实施方式在步骤一中采本文档来自技高网...

【技术保护点】
厌氧同时还原硫酸盐和反硝化功能菌株的筛选用培养基，其特征在于厌氧同时还原硫酸盐和反硝化功能菌株的筛选用培养基分液体筛选培养基和固体筛选培养基两种；每升液体筛选培养基由３．０～５．０ｇＮａ↓［２］ＳＯ↓［４］、１．０～３．０ｇ　ＫＮＯ↓［３］、１．０～３．０ｇ　ＮａＮＯ↓［３］、０．５～２ｇＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ、０．３～０．６ｇ　Ｋ↓［２］ＨＰＯ↓［４］、３．０～６．０ｇ酒石酸钾钠、０．５～２ｇ　ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］、０．１～０．５ｇＣａＣｌ↓［２］.２Ｈ↓［２］Ｏ、０．３～０．８ｇ　Ｌ－半胱氨酸和余量的蒸馏水组成，液体筛选培养基的ｐＨ值为７．５；每升固体筛选培养基是由３．０～５．０ｇＮａ↓［２］ＳＯ↓［４］、１．０～３．０ｇ　ＫＮＯ↓［３］、１．０～３．０ｇ　ＮａＮＯ↓［３］、０．５～２ｇ　ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ、０．３～０．６ｇ　Ｋ↓［２］ＨＰＯ↓［４］、３．０～６．０ｇ酒石酸钾钠、０．５～２ｇ　ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］、０．１～０．５ｇ　ＣａＣｌ↓［２］.２Ｈ↓［２］Ｏ、１０～１５ｇ琼脂粉、０．０５～０．４ｍＬ浓度为０．２～０．４ｇ／Ｌ的刃天青溶液、０．３～０．８ｇ　Ｌ－半胱氨酸和余量的蒸馏水组成，固体筛选培养基的ｐＨ值为７．５。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王继华，魏利，马放，秦松岩，王强，
申请(专利权)人：哈尔滨师范大学，哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]