水稻ＤＮＡ启动子顺序的克隆方法技术

以既能在大肠杆菌又能在酵母菌中复制、同时又带有一个缺乏启动子的Ｌａｃｚ基团的穿梭质粒ｐＣＨ１作为克隆水稻总ＤＮＡ、叶绿体ＤＮＡ的启动子顺序的载体。用牛小肠碱性磷酸酯酶处理酶切后的载体ＤＮＡ，有效地防止了细菌染色体ＤＮＡ的污染和载体自身的环化，提高了重组频率。本发明专利技术采用Ｘ—ｇａｌ平皿筛选法，具有灵敏、分辨力高等优点。（*该技术在2008年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物分子遗传工程学。构建新型的遗传工程载体在高等植物的遗传工程中的作用是十分重要的，对于一个载体来说，除了能够自主复制的顺序和选择标记之外，启动子顺序对于高度表达由载体导入的外源或自身的基因也是必不可少的。一个克隆的基因是否能在新的宿主中高度地表达取决于该结构基因之前的那段启动子顺序能否有效地工作。目前已有人从烟草叶绿体中克隆了一些DNA片段，这些DNA片段在大肠杆菌中起启动子的作用〔见X.Kon.， .S.Levet and S.D.Kung，Gene 31，23-31(1984)〕。此外，也有从卧龙牙草的叶绿体克隆了启动子顺序(见Hideya FuKuzawa et al，Agric.Biol.Chem.49(9)，2725-2731，1985〕。本专利技术对传统的DNA启动子顺序的克隆方法进行了改进，运用DNA重组技术，以水稻总DNA或水稻叶绿体DNA为材料，在大肠杆菌克隆受体系统中克隆了一系列启动子顺序，这些启动子顺序在构建水稻人工染色体中是至关重要的。本专利技术以水稻总DNA或水稻叶绿体DNA作为供体，以酵母菌和大肠杆菌的穿梭质粒pCH1为载体，该质粒既本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种由供体ＤＮＡ及载体ＤＮＡ经酶切、混合、连接、检测等过程组成的筛选启动子ＤＮＡ顺序的克隆方法，其特征在于：上述的供体ＤＮＡ采用水稻总ＤＮＡ，上述的载体ＤＮＡ为带有ｌａｃＺ结构基因的ＰＣＨ１质粒ＤＮＡ，其中载体ＤＮＡ用牛小肠碱性磷酸酯酶处理，ＤＮＡ供体与载体ＤＮＡ的混合比为２∶１～５∶１，上述的检测采用含有Ｘ－ｇａｌ的平血筛选法。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：任大明，何超刚，卢勤，石红，陈永钢，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]