分泌生产蛋白质的方法技术

本发明专利技术的目的在于通过使棒状杆菌生产工业上有用的蛋白质，提供制备异源蛋白质的方法。在本发明专利技术中，使用其中目标异源蛋白质基因序列连接于编码来源于棒状杆菌的信号肽区的序列下游的表达基因构建物，将该表达基因构建物引入到与野生型谷氨酸棒杆菌ＡＴＣＣ１３８６９相比具有至少２倍的分泌该异源蛋白质能力的棒状杆菌变异菌株中，培养转化的棒状杆菌，并回收释放到菌体外的异源蛋白质。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
本专利技术涉及通过棒状杆菌有效地分泌生产异源蛋白质的方法。到目前为止，异源蛋白质的分泌生产已有通过芽孢杆菌属(Bacillus)细菌进行分泌生产的综述、通过嗜甲醇酵母巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)进行的分泌生产综述以及通过曲霉属(Aspergillus)的霉菌进行的工业化生产的报道等多个报道。在本专利技术的一个实施方案中，分泌生产的转谷氨酰胺酶是催化蛋白质肽链内γ-羧基酰胺基的酰基转移反应的酶。将该酶作用于蛋白质，则发生ε-(γ-Glu)-Lys交联反应、Gln通过脱酰胺作用置换为Glu的反应。该转谷氨酰胺酶可以用于生产果冻等凝胶状食品、酸乳、乳酪或凝胶状化妆品等或改善食用肉的肉质等(特公平1-50382)。还可应用于生产热稳定的微胶囊材料、固定化酶的载体等，是工业应用性高的酶。已知转谷氨酰胺酶有来源于动物的和来源于微生物的(微生物转谷氨酰胺酶以下称为“MTG”)。前者是依赖于钙离子酶，分布于动物的内脏、皮肤、血液等。例如有豚鼠肝脏转谷氨酰胺酶(K.Ikura等Biochemistry 27，2898(1988))、人表皮角质细胞转谷氨酰胺酶(M.A.Phi本文档来自技高网...

【技术保护点】
异源蛋白质的制备方法，其特征在于：培养棒状杆菌变异菌株，回收生成的异源蛋白质，其中所述棒状杆菌变异菌株具有表达基因构建物，其中编码来源于棒状杆菌的信号肽区的核酸序列连接于在棒状杆菌中发挥功能的启动子序列的下游，且编码异源蛋白质的核酸序列连接于编码所述信号肽区的核酸序列的下游；并且与具有相同表达基因构建物的野生型谷氨酸棒杆菌ＡＴＣＣ１３８６９相比，具有至少２倍的分泌该异源蛋白质的能力。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：菊池庆实，伊达雅代，梅泽有希子，横山敬一，平马晴雄，松井裕，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]