酵母细胞表达人白细胞介素10的方法技术

本发明专利技术是酵母细胞表达人白细胞介素１０的方法，技术方案是：人工合成ｈＩＬ－１０全基因序列，包括ｈＩＬ－１０的带有其信号序列和不带信号序列，分别记为ｓｈＩＬ－１０和ｎｓｈＩＬ－１０，给其两端加上ＥｃｏｒＲ　　Ⅰ和Ｎｏｔ　　Ⅰ酶切序列或两端都加上ＥｃｏｒＲ　　Ⅰ酶切序列，用ＥｃｏＲ　　Ｉ和Ｎｏｔ　　Ｉ分别双酶切目的基因ｓｈＩＬ－１０、ｎｓｈＩＬ－１０以及毕赤酵母的整合型表达载体ｐＰＩＣ３．５Ｋ、ｐＰＩＣ９Ｋ，构建重组质粒ｐＰＩＣ３．５Ｋ／ｓｈＩＬ、ｐＰＩＣ９Ｋ／ｎｓｈＩＬ，然后通过电穿孔、原生质体法转化毕赤酵母细胞，重组质粒和目的基因整合到酵母染色体上，应用甲醇诱导毕赤酵母进行胞内可溶性表达或胞外分泌型表达。本发明专利技术与现有在大肠杆菌中表达相比，提高人白细胞介素１０的空间结构的正确折叠及其生物学活性，具有明显的优势：①酵母细胞表达ｈＩＬ－１０，不形成变性蛋白的包涵体，蛋白为可溶形式表达，直接形成活性蛋白；②可溶性活性蛋白有利于纯化，纯化得率高，避免包涵体复性时的损失。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及到人白细胞介素10的制造方法，更具体地说是关于应用酵母细胞表达人白细胞介素10，属于生物技术高科技研究领域。
技术介绍
1989年Fiorentino等发现鼠CD4+Th2细胞分泌一种可抑制Th1细胞产生细胞因子(如IFN)的物质，称其为细胞因子分泌抑制因子(CSIF)，后统一称为白细胞介素10(IL-10)。IL-10是正常人体的一类重要细胞因子，成熟的IL-10有160个氨基酸残基，单体分子量为18.7KD，含有4个半胱氨酸形成的二硫键(12-108，62-114)。活性形式是由非共价键连接的分子量为39KD的同源寡二聚体。人IL-10由多种细胞分泌，主要由Th2细胞产生，并对多种细胞和因子发挥免疫抑制和调节作用。IL-10可抑制T细胞、单核细胞、巨嗜细胞的活性和功能，调节B细胞、Tc、Th、肥大细胞、粒细胞、DC、角化细胞和上皮细胞的生长、分化。IL-10抑制致炎细胞因子(IL-1、IFN、TNF)、趋化因子(CC、CXC)、PGE2、NO、MHC II以及共刺激分子(IL-12、CD80/CD86)的合成、抗原提呈，下调TLR4的表达、LPS受体的信号转导，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制造重组人白细胞介素１０的方法，其特征是：应用酵母表达人白细胞介素１０。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：邹全明，井申荣，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]