方法技术

本发明专利技术涉及用于分析来自受试者的尿液样品的方法，包括将尿液样品暴露于裂解缓冲剂，所述裂解缓冲剂能够从尿液样品中的细胞释放至少一种生物标志物。本发明专利技术还涉及可以在这些方法中使用的试剂盒、设备和装置。最后，本发明专利技术涉及用于检测受试者中泌尿系统癌症的存在的方法，包括对来自受试者的样品进行测定以确定Mcm蛋白的浓度。

Method

The invention relates to a method for analyzing urine samples from subjects, including exposing urine samples to cracking buffers, which can release at least one biomarker from cells in urine samples. The invention also relates to the kits, equipment and devices that can be used in these methods. Finally, the invention relates to a method for detecting the existence of urinary system cancers in subjects, including determining samples from subjects, determining the concentration of Mcm protein.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】方法专利
本专利技术涉及用于分析尿液样品的方法，用于帮助诊断受试者中的泌尿系统癌症的方法，用于检测受试者中指示泌尿系统癌症的生物标志物的存在的方法以及用于从尿液样品中制备细胞的装置。
技术介绍
泌尿系统癌症(偶尔被称为“泌尿系癌症”)是一个重大且日益增长的流行病学问题。两种最具经济重要性的泌尿系统癌症是膀胱癌和前列腺癌。前列腺癌是排在非黑色素瘤皮肤癌之后的男性患者中第二大常见癌症，英国每年诊断的新病例超过35,000例；每年约有10,200人死于前列腺癌。欧洲每年新增病例约30万例，美国约19万例，全球约67万例。英国癌症研究机构(CancerResearchUK)报告说，在英国男性中诊断出的所有癌症新病例中有四分之一是前列腺癌，60％的新诊断是70岁以上的男性。这种疾病最常见的形式是腺癌。英国的5年生存率接近80％。没有已知的环境原因，但与前列腺癌或乳腺癌近亲的人更容易发生疾病。西非和非裔加勒比男性的前列腺癌风险增加。前列腺癌的症状与前列腺良性肿大引起的症状类似，包括尿急，排尿困难或排尿疼痛，和罕见地尿或精液带血。然而，在许多男性中，直到疼痛的转移癌(主要是在骨骼中)形成为止，这种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于分析来自受试者的尿液样品的方法，包括a.将尿液样品暴露于裂解缓冲剂中，其中裂解缓冲剂能够从尿液样品中的细胞释放至少一种生物标志物；和b.进行测定以确定尿液样品中至少一种生物标志物的浓度。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.08 GB 1509909.6;2016.03.01 GB 1603559.41.一种用于分析来自受试者的尿液样品的方法，包括a.将尿液样品暴露于裂解缓冲剂中，其中裂解缓冲剂能够从尿液样品中的细胞释放至少一种生物标志物；和b.进行测定以确定尿液样品中至少一种生物标志物的浓度。2.权利要求1的方法，其中，a.裂解缓冲剂不是含有0.4％脱氧胆酸钠和0.02％叠氮化钠的PBS；b.所述方法不包括在大于90℃的温度下孵育尿液样品超过45分钟；c.所述方法不包括将尿液样品通过21号针来剪切尿液样品中的核酸；d.所述方法不包括通过将尿液样品暴露于DNA酶I或RNA酶A来消化核酸；和/或e.所述方法不包括以15,000g离心样品10分钟。3.一种用于分析来自受试者的尿液样品的方法，包括将所述尿液样品暴露于裂解缓冲剂的步骤，其中：a.裂解缓冲剂不是含有0.4％脱氧胆酸钠和0.02％叠氮化钠的PBS；b.所述方法不包括在高于95℃的温度下孵育尿液样品约45分钟；c.所述方法不包括使尿液样品通过21号针来剪切核酸；d.所述方法不包括通过将尿液样品暴露于DNA酶I或RNA酶A来消化核酸；和/或e.所述方法不包括以15,000g离心样品10分钟；并且其中所述方法进一步包括进行测定以确定所述尿液样品中的至少一种生物标志物的浓度的步骤。4.一种用于分析包含来自受试者的细胞的尿液样品的方法，其中所述尿液样品使用包括以下步骤的方法制备：a.浓缩尿液样品中的细胞；和b.将浓缩的细胞暴露于裂解缓冲剂；并且其中所述方法进一步包括进行测定以确定所述尿液样品中的至少一种生物标志物的浓度的步骤。5.一种用于分析包含来自受试者的细胞的尿液样品的方法，其中所述尿液样品使用包括以下步骤的方法制备：a.离心样品以提供样品沉淀；和b.在裂解缓冲剂中重悬来自样品的沉淀的细胞；并且其中所述方法进一步包括进行测定以确定所述尿液样品中的至少一种生物标志物的浓度的步骤。6.一种试剂盒，其包含能够从尿液样品中的细胞释放至少一种生物标志物的裂解缓冲剂，捕获抗体和检测抗体，其中捕获抗体和检测抗体结合Mcm5。7.一种用于从尿液样品制备细胞的装置，所述装置包括：入口；定位在入口下游并且与入口流体连通的第一阀布置；用于从尿中捕获细胞的过滤器，所述过滤器布置在所述第一阀布置的下游并且与所述第一阀布置流体连通；定位在过滤器下游并且与过滤器流体连通的第二阀布置；布置在所述第二阀布置下游并与所述第二阀布置流体连通的出口；用于容纳裂解缓冲剂的第一缓冲剂储存器，所述第一缓冲剂储存器与所述第一阀布置流体连通；用于容纳裂解缓冲剂的第二缓冲剂储存器，所述第二缓冲剂储存器与所述第二阀布置流体连通；其中第一和第二阀布置可以被构造成使得：在第一和第二阀布置的第一构造中，第一缓冲剂储存器和过滤器之间的流体连通被阻断，第二缓冲剂储存器和过滤器之间的流体连通被阻断，并且入口、过滤器和出口之间的流体连通是打开的，使得尿液能够通过过滤器从入口流到出口；和在第一和第二阀布置的第二构造中，第一缓冲剂储存器和过滤器之间的流体连通是打开的，第二缓冲剂储存器和过滤器之间的流体连通是打开的，并且通过入口和出口的流动被阻断，使得裂解缓冲剂能够经由过滤器在第一缓冲剂储存器与第二缓冲剂储存器之间流动。8.权利要求7的装置，还包括裂解缓冲剂。9.一种从尿液样品制备细胞的方法，所述方法包括：使尿液样品通过用于捕获细胞的过滤器，使得细胞被捕获在过滤器中；使裂解缓冲剂通过过滤器，使得捕获的细胞暴露于裂解缓冲剂；将过滤器孵育一段时间，使得裂解缓冲剂使细胞释放至少一种生物标志物。10.权利要求3-5或7-9中任一项的方法或装置，其中所述裂解缓冲剂能够从所述尿液样品中的细胞释放至少一种生物标志物。11.权利要求1-10中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲剂能够从所述尿液样品中的细胞中释放Mcm5，并且基本上不使所述Mcm5蛋白质变性。12.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述方法是用于从所述尿液样品中的细胞释放至少一种生物标志物并确定从所述细胞释放的所述至少一种生物标志物的浓度的方法。13.权利要求1-5或12中任一项的方法，其中所述方法包括以下步骤：在将所述尿液样品暴露于裂解缓冲剂的步骤之前浓缩所述尿液样品中的细胞，将所述浓缩的细胞暴露于裂解缓冲剂或在裂解缓冲剂中重悬来自样品的沉淀细胞。14.权利要求1-5或7-13中任一项的方法或权利要求6的试剂盒，其中所述裂解缓冲剂不使抗体变性。15.权利要求1-14中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲剂包含去污剂。16.权利要求15的方法、装置或试剂盒，其中所述去污剂包含tritonX-100或由tritonX-100组成。17.权利要求16的方法、装置或试剂盒，其中所述去污剂包含浓度为0.01％至25％，0.01％至10％，0.05％至5％，0.05％至1％，0.05％至0.5％或者约0.1％的tritonX-100。18.权利要求15至17中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述去污剂包含聚山梨醇酯。19.权利要求18的方法、装置或试剂盒，其中所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20。20.权利要求18或19的方法、装置或试剂盒，其中所述去污剂包含浓度为0.01％至5％，0.02％至1％或约0.05％的聚山梨醇酯。21.权利要求15-20中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述去污剂包含脱氧胆酸钠或十二烷基硫酸钠。22.权利要求21的方法、装置或试剂盒，其中所述去污剂包含浓度为0.1％至20％，0.5％至10％，0.5％至5％或约1％的脱氧胆酸钠或十二烷基硫酸钠。23.权利要求15至22中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述去污剂包含3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基铵]-1-丙烷磺酸盐(CHAPS)。24.权利要求1-23中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲剂包含浓度为0.01％至0.15％，0.03％至0.10％，0.05％至0.09％或约0.08％的脱氧胆酸钠。25.权利要求1-24中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲剂包含浓度为0.01％至0.15％，0.03％至0.10％，0.05％至0.09％或约0.08％的CHAPS。26.权利要求1-25中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲剂包含螯合剂。27.权利要求1-25中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲剂不包含螯合剂。28.权利要求26的方法、装置或试剂盒，其中所述螯合剂是或包含EDTA。29.权利要求1-28中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲剂包含浓度为0.5mM至10mM，1mM至5mM，1.5mM至3mM或约2mM的EDTA。30.权利要求1-29中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲剂包含缓冲剂组分。31.权利要求30的方法、装置或试剂盒，其中所述缓冲剂组分是Tris或Trizma缓冲剂，包含Tris或Trizma缓冲剂，或由Tris或Trizma缓冲剂组成。32.权利要求31的方法、装置或试剂盒，其中所述缓冲剂组分包含浓度为大于5mM，5mM至350mM，200mM至300mM，10mM至25mM，约10mM或约250mM的Tris缓冲剂或由其组成。33.权利要求30-32中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述缓冲剂组分包含磷酸盐缓冲盐水(PBS)，MOPS，碳酸氢盐或HEPES缓冲剂。34.权利要求30-33中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述缓冲剂组分包含浓度为5mM至250mM，50mM至250mM或约100mM的磷酸盐缓冲盐水。35.权利要求30-34中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述缓冲剂组分将所述缓冲剂的pH维持在pH4至pH9，pH5至pH8，pH6至pH8或约pH7.6。36.权利要求1-35中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲剂包含选自以下的盐：氯化钠，氯化钾，氯化镁，硫酸钠，硫酸钾，硫酸镁，乙酸钠，乙酸钾，乙酸镁，磷酸钠，磷酸钾和磷酸镁。37.权利要求36的方法、装置或试剂盒，其中所述盐的浓度为20mM至300mM，150mM至300mM，100mM至200mM或约200mM。38.权利要求36或37的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲剂或盐包含浓度为20mM至300mM，150mM至300mM，100mM至200mM或约200mM的氯化钠或由其组成。39.权利要求1至38中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲剂具有1mM至500mM，50mM至450mM，100mM至250mM，或100mM至175mM的离子强度。40.权利要求1-39中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲剂包含稳定剂。41.权利要求40的方法、装置或试剂盒，其中所述稳定剂包含选自牛血清白蛋白(BSA)，胎牛血清(FBS)和蛋白酶抑制剂的稳定剂或由其组成。42.权利要求41的方法、装置或试剂盒，其中所述蛋白酶抑制剂选自4-(2-氨基乙基)苯磺酰氟盐酸盐(如PetrablocSC或AEBSF)，Roche完全蛋白酶抑制剂，和蛋白酶抑制剂混合物(如SigmaP8340)，其包含AEBSF，抑肽酶，贝他汀盐酸盐，N-(反式环氧琥珀酰)-L-亮氨酸4-胍丁基酰胺(E-64)，亮抑酶肽半焦硫酸盐和胃蛋白酶抑制剂A。43.权利要求40或41的方法、装置或试剂盒，其中所述稳定剂包含浓度为0.1％至20％，0.1％至10％，0.1％至5％，1％至3％或约2.5％的BSA。44.权利要求1-43中任一项的方法、装置或试剂盒，其中所述裂解缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·N·米勒琼斯，J·施托克利，C·尼伯格，
申请(专利权)人：阿奎尔诊断有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB