抗ＣＤ４０抗体突变体制造技术

提供了一种具有治疗前景的抗ＣＤ４０抗体突变体，该突变体具有设计为适于作为药物制剂的降低的ＡＤＣＣ和ＣＤＣ活性。一种激动型抗ＣＤ４０抗体突变体，包括在恒定区至少含有一个氨基酸突变和／或取代，以降低其ＡＤＣＣ和／ＣＤＣ活性，及一种拮抗型抗ＣＤ４０抗体突变体，包括在恒定区至少含有一个突变和／或取代，以降低其ＡＤＣＣ和／ＣＤＣ活性，这两种抗体均具有至少一个来源于人ＩｇＧ２的铰链区。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种识别与免疫相关的细胞膜分子CD40的抗CD40抗体。另外，本专利技术涉及一种在人抗体恒定区具有突变或亚单位部分被取代的抗体，从而可降低ADCC和/或CDC活性，但保持激动或拮抗活性。
技术介绍
1.CD40CD40是一种位于细胞膜表面，在B细胞、树突状细胞(DCs)、某些种类的癌细胞和胸腺上皮细胞中表达，分子量为50kDa的抗原。已知CD40在B细胞和DCs的增殖和分化中具有重要作用。CD40被鉴定为一种在人B细胞表面表达的抗原(E.A.Clark等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 834494，1986；及I.Stamenkovic等，EMBO J.81403，1989)，属于包括低亲和力NGF受体、TNF受体、CD27、OX40和CD30的TNF受体家族成员。最近已克隆出针对人和鼠CD40s的配体(CD40Ls)，并发现该配体是II型膜蛋白，在激活的CD4+T细胞中表达。而且发现CD40L可将强激活信号传递到人或鼠B细胞中。已发现CD40在树突状细胞中的表达比在B细胞中更高，而且已表明CD40在树突状细胞中具有重要作用。CD40与CD40L结合可激活抗原呈递细胞(APCs)，即表达协同刺激因子例如CD80(B7-1)和CD86(B7-2)，或增强IL-2的产生(Caux，C.，等Activation of humandendritic cells through CD40 cross-linking.J.Exp.Med.，1801263，1994；及Shu，U.，等Activated T cells induce interleukin-12 productionby monocyte via CD40-CD40 ligand interaction.Eur.J.Immunol.，251125，1995)。树突状细胞具有强的抗原呈递能力和强的刺激辅助T(Th)细胞的能力。而且也认为树突状细胞可调控天然Th细胞分化为Th1或Th2细胞。当作为骨髓树突状细胞的外周血单核细胞在存在GM-CSF和IL-4的条件下培养，并通过CD40L使其成熟时，则得到的成熟树突状细胞(DC1)可在体外产生IL-12，并可刺激和激活异源天然Th细胞，以诱导产生IFNγ的T细胞(即促进其分化为Th1)。该作用可被抗IL-12抗体抑制，因此可通过IL-12起作用。另一方面，将存在于淋巴T区和外周血的胞浆T细胞，在存在IL-3和CD40配体的条件下培养时，得到的淋巴树突状细胞(DC2)不能产生IL-12，也不能刺激和激活异源天然Th细胞以诱导产生IL-4的T细胞，这表明促进其分化为Th2。Th1细胞被认为参与细胞免疫的激活，而Th2细胞与体液免疫的增强和细胞免疫的限制有关。当细胞毒素T细胞(CTL)在Th1细胞的辅助下被激活时，则它们可消除在细胞质和肿瘤细胞中生长的病原体(各种病毒、李斯特菌、结核菌、弓形体原生动物等)。已表明可识别在膜表面表达的CD40的单克隆抗CD40抗体对B细胞具有不同的生物活性。通常根据在CD40和CD40L间的相互作用将单克隆抗CD40抗体划分为激动型或拮抗型抗体。2.激动型抗体已知激动型抗体可激活B细胞。例如，已报道抗CD40抗体可诱导细胞黏附(Barrett等，J.Immunol.1461722，1991；及Gordon等，J.Immunol.1401425，1998)，增加细胞体积(Gordon等，J.Immunol.1401425，1998；及Valle等，Eur.J.Immunol.191463，1989)，诱导仅被抗IgM抗体、抗CD20抗体或佛波酯刺激的B细胞进行细胞分裂(Clark and Ledbetter，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 834494，1986；Gordon等，LEUCOCYTE TYPING III.A.J.McMicheal ed.OxfordUniversity Press.Oxford.p.426；及Paulie等，J.Immunol.142590，1989)，诱导B细胞在存在IL-4时进行细胞分裂(Valle等，Eur.J.Immunol.191463，1989；及Gordon等，Eur.J.Immunol.171535，1987)，诱导培养细胞在IL-4刺激和T细胞缺乏的条件下表达IgE(Jabara等，J.Exp.Med.1721861，1990；及Gascan等，J.Immunol.1478，1991)，诱导那些培养细胞表达IgG和IgM(Gascan等，J.Immunol.1478，1991)，通过IL-4从细胞中分泌可溶性CD23/FceRII(Gordon and Guy，Immunol.Today 839，1987；及Cairns等，Eur.J.Immunol.18349，1988)，通过IL-4在细胞上增强可溶性CD23/FceRII的表达(Challa，A.，Allergy，54576，1999)，及刺激IL-6的产生(Clarkand Shu，J.Immunol.1451400，1990)。另外，已报道在存在CDw32+黏附细胞时，向人原代培养B细胞中加入IL-4和抗CD40抗体可导致由其衍生的克隆B细胞的建立(Bancherauet等，Science 24170，1991)，而且不管抗原受体有活性或无活性，生发中心细胞的凋亡可通过CD40被抑制(Liu等，Nature 342929，1989)。如上所述，CD40已被鉴定为一种在人B细胞表面表达的抗原，因此，主要以诱导人B细胞增殖和/或分化的能力，或诱导癌细胞死亡的活性为指标对大多数已分离的抗体进行评估(Katira，A.等，LEUKOCYTE TYPING V.S.F.Schlossossman，等人，547页，Oxford University Press.Oxford；W.C.Flansow等人，LEUKOCYTE TYPING V.S.F.Schlossossman，等人，555页，Oxford University Press.Oxford；及J.D.Pound等人，International Immunology，1111，1999)。已表明抗CD40抗体可使DC成熟(Z.H.Zhou等人，Hybridoma，18471，1999)。另外，已报道CD4T细胞在促进抗原特异的CD8 T细胞方面的作用是通过CD40-CD40L信号途径激活DC，而且已发现抗CD40的单克隆抗体(mAb)可代替CD40辅助T细胞激活树突状细胞(DC)(Shoenberger，S.P.，等人T-cell help for cytotoxic Tlymphocytes is mediated by CD40-CD40L interactions.Nature，480，1998)。而且已发现对鼠施用抗CD40抗体可保护动物体免受表达CD40的肿瘤细胞和不表达CD40的肿瘤细胞的侵袭(French，R.R.，等人CD40 antibody evokes a cytotoxic T-cell response that eradicateslymph本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有激动活性、与ＣＤ４０结合的单克隆抗体的重链，其中所述重链包括来源于人ＩｇＧ２的上部铰链和中部铰链，及具有至少一个氨基酸缺失或取代，或至少添加一个氨基酸的恒定区，所述的缺失、取代或添加可提高或降低ＡＤＣＣ和／或ＣＤＣ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：高桥信明，三浦彻，北川义康，平野亚树，
申请(专利权)人：协和发酵麒麟株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]