一种用于鼻腔给药的FGF1脂质体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种用于鼻腔给药的FGF1脂质体，由FGF1主药和药用辅料组成，FGF1主药的最终浓度为0.06mg/mL；豆磷脂与胆固醇和聚乙二醇2000‑二硬酯酰磷脂酰乙醇胺的重量比为24:16:1。本发明专利技术还公开了该脂质体的制备方法及其在治疗2型糖尿病的应用。本发明专利技术采用pH梯度法结合逆向蒸发法进行制备，制备的脂质体不仅粒径大小均匀，粒径在300nm‑338nm左右，而且包封率可达到80％‑99.8％。本发明专利技术鼻腔一次性给药能起到长久缓解治疗2型糖尿病的治疗作用，可减少FGF1导致的细胞促有丝分裂、增殖和肿瘤发生等安全性问题。

A FGF1 liposome for nasal administration and its preparation and Application

The invention discloses a method for intranasal administration of FGF1 liposomes composed of FGF1 main drug and excipients, the final concentration of FGF1 the main drugs for 0.06mg/mL; soybean lecithin and cholesterol and polyethylene glycol 2000 two hard acyl phosphatidylethanolamine weight ratio 24:16:1. The invention also discloses the preparation method of the liposome and the application of the liposome in the treatment of type 2 diabetes. Using reverse evaporation method for the preparation of pH gradient method, liposome preparation not only uniform particle size, particle size in 300nm around 338nm, and the encapsulation rate can reach 80% 99.8%. The disposable administration of the nasal cavity can play a long-term role in alleviating the therapeutic effect of type 2 diabetes, and can reduce the safety problems such as mitosis, proliferation and tumorigenesis caused by FGF1.

【技术实现步骤摘要】
一种用于鼻腔给药的FGF1脂质体及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物制药
，涉及一种脂质体，具体涉及一种用于鼻腔给药的FGF1(人酸性成纤维细胞生长因子-1)脂质体，以及该FGF1脂质体的制备方法和医学应用。
技术介绍
人酸性成纤维细胞生长因子(FGF1，aFGF)是一种广泛存在于人体各组织中的生物活性物质，是血管内皮细胞、成肌细胞、角膜细胞、成纤维细胞、神经细胞及星型胶质细胞等生长的刺激因子，其在组织形态的发生、发展、神经修复和血管生长等许多方面发挥重要的作用。由于FGF1本身具有常温稳定性差、生物利用度低、半衰期短等缺点，为克服这些缺点，已有公司将FGF1以脂质体作为载体，以达到FGF1缓释、匀释、作用持久的目的。现有的FGF1脂质体的制备方法主要是分别采用逆向蒸发法和pH梯度法等技术制备，脂质体的包封率低，影响了生物利用率。给予相当于人类2型糖尿病患者的小鼠单次注射FGF1蛋白，可持续2天以上让血糖水平恢复至正常范围。这一研究发现已经发布在《自然》(Nature)杂志上。美国华盛顿大学MichaelSchwartz和他的研究团队，将FGF1注射到患有2型糖尿病小鼠的脑室内，在单次注射后，连续观察7天，发现血糖水平完全正常，接下来实验持续进行了17周，实验小鼠的血糖水平一直维持在正常范围(<200mg/dl)内。也就是说，在小鼠脑室内注射一次FGF1之后，降血糖的效果保持了18周，此举大大降低了药物注射的频率。但是，如果为了治疗糖尿病而临床上给予人类进行脑室内注射就不现实了。而鼻腔给药可能是一种向脑输送药物的途径。鼻腔与颅脑关系极为密切，不仅鼻颅之间存在潜在的细微通道，而且12对脑神经中有3对(三叉神经的眼支及上颌支、嗅神经和面神经分支)分布于鼻腔鼻嗅区黏膜。鼻腔鼻嗅区的内皮就如同一块筛状的板，神经束通过此小孔，周围充满着脑脊液，因此部分药物滴入鼻腔后能传入脑脊液，到达脑室起到治疗作用。在鼻腔给药系统中，脂质体新制剂的研究较多。由于脂质体的主要成分为磷脂和胆固醇，它们包裹药物表面形成“保护膜”，这样就决定了脂质体能够更好地与机体细胞组织相容，使其生物依从性良好；药物不能直接接触黏膜，不被蛋白酶分解，减少了其对机体的不良反应。现有技术中的FGF1脂质体主要是用于急慢性创面修复，烧伤等开放性创伤、溃疡、褥疮、糖尿病或感染等原因造成的难愈性创面的治疗，同时也适用于粘膜创伤、烫伤及皮肤美容治疗后的创面修复等。在用于创面修复时，需要多次涂抹使用。由于FGF1具有促细胞有丝分裂和肿瘤发生，一般不能内用，更不能多次、重复、长期使用。因此，为了避免FGF1产生的生物细胞增殖等副作用、增强FGF1的稳定性，需要研发一种一次性鼻腔给药又由于脂质体结构的关系使得FGF1不能进入机体血循环而避免FGF1可能增加机体细胞增殖、分裂副作用就可以达到长期治疗2型糖尿病的FGF1脂质体。因为，FGF1一次性鼻腔给药的剂量很小、合适的大小粒径的脂质体不易从鼻粘膜毛细管进入体循环。技术方案为解决上述技术问题，本专利技术提供一种包封率高、适当粒径、稳定性好、效果确切且副作用小的FGF1鼻腔给药脂质体；本专利技术还提供该FGF1鼻腔给药脂质体的制备方法。本专利技术所要解决的技术问题采用以下技术方案来实现：一种用于鼻腔给药的FGF1脂质体，由FGF1主药和药用辅料组成，其中，所述FGF1主药的最终浓度为0.06mg/mL；在所述药用辅料中，豆磷脂(SPC)与胆固醇(ChoI)和聚乙二醇2000-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺(DSPE_PEG200)的重量比为24:16:1。上述的FGF1还包括其各种形式的改构体，这些改构体指在不影响FGF1活性结构区域的前提下对FGF1N端的无论多少的氨基酸进行改造以保持其生物特性以及最大可能去除细胞增殖功能而获得的FGF1改构体。上述脂质体的粒径是40nm～1000nm，进一步优选为300nm。粒径在300nm左右的包涵体，避免了鼻腔粘膜毛细血管的吸收，阻止了的FGF1进入体循环，减少了的FGF1的体内副作用。本专利技术用于鼻腔给药的FGF1脂质体的制备方法，包括以下步骤：按重量比为24:16:1的比例称取豆磷脂、胆固醇和聚乙二醇2000-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺，混合后用体积比为1:1的二氯甲烷和正己烷溶解，超声使之形成稳定的溶液，于30℃水浴减压蒸发；水浴蒸发达到胶态后，滴加同温的0.03mol/L柠檬酸缓冲液水合2h后，于30℃水浴减压状态下继续蒸发，制得水性混悬液，进行探头式超声3min，然后将混悬液过0.45um微孔滤膜即得到空白脂质体；最后于制备的空白脂质体中加入适量的FGF1溶液，使FGF1的终浓度为0.06mg/ml，用饱和磷酸二钠溶液调制pH为6.5，于35℃温育15min后即得到FGF1脂质体。本专利技术还涉及FGF1脂质体的鼻腔给药制剂在2型糖尿病中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术为了追求最合适的脂质体的粒径采用了pH梯度法和逆向蒸发法相结合的特有方法进行制备脂质体，这样制备的脂质体不仅粒径大小均匀，粒径在300nm-338nm左右，而且包封率能达到80％-99.8％。因此，本专利技术制备的脂质体不仅增加了FGF1的稳定性(化学稳定性KE≤0.2)，也可防止FGF1进入血液循环，避免了FGF1产生细胞增殖等副作用。本专利技术是FGF1鼻腔给药脂质体，鼻腔一次性给药能起到长久(理论上在人类可以持续保持血糖正常十余年)缓解治疗2型糖尿病的作用。通过鼻腔一次性用药，进入脑室内的药物剂量非常少，加之又无法进入体循环，这样就可以避免FGF1可能导致的细胞促有丝分裂、增殖和肿瘤发生等问题。附图说明图1为使用激光散射法对本专利技术脂质体的粒度的分析图；图2为本专利技术脂质体的扫描电镜图；其中，图2a是本专利技术脂质体放大75000倍的扫描电镜图，图2b是FGF1脂质体放大100000倍的扫描电镜图。具体实施方式为便于理解本专利技术，本专利技术列举实施例如下。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅用于帮助理解本专利技术，不应视为对本专利技术的具体限制。如无具体说明，本专利技术的各种原料均可以通过市售得到；或根据本领域的常规方法制备得到。除非另有定义或说明，本文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术熟练入员所熟悉的意义相同。用于鼻腔给药的FGF1脂质体的制备，釆用pH梯度法联合逆向蒸馏法，具体如下：称取240.5mg豆磷脂(SPC)、160.0mg胆固醇(Chol)和10.4mgDSPE_PEG200，三种物质混合后，用4mL二氯甲烷、正己烷1：1(V:V)溶解，超声2min使之形成稳定的溶液，于30℃水浴减压蒸发，达到胶态后，滴加5mL同温的0.03mol/L柠檬酸缓冲液水合2h后成半固态，然后在30℃水浴减压状态下继续蒸发，制得水性混悬液，加10mL柠檬酸缓冲液，进行探头式超声3min(功率30W)，然后将混悬液过0.45μm微孔滤膜即得到空白脂质体。在向空白脂质体中加入适量的FGF1溶液使其终浓度为0.06mg/ml，用饱和磷酸二钠溶液调制pH6.5，35℃温育15min后即得到FGF1载药脂质体。上述制备过程中使用的主要试剂和仪器具体如下：鼠源FGF1蛋白：CLOUD-CLON(厂家)、RPA032Mu01本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于鼻腔给药的aFGF脂质体，由aFGF主药和药用辅料组成，其特征在于：所述aFGF主药的浓度为0.06mg/mL；所述药用辅料中，豆磷脂与胆固醇和聚乙二醇2000‑二硬酯酰磷脂酰乙醇胺的重量比为24:16:1。

【技术特征摘要】
1.一种用于鼻腔给药的aFGF脂质体，由aFGF主药和药用辅料组成，其特征在于：所述aFGF主药的浓度为0.06mg/mL；所述药用辅料中，豆磷脂与胆固醇和聚乙二醇2000-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺的重量比为24:16:1。2.如权利要求1所述的一种用于鼻腔给药的aFGF脂质体，其特征在于：所述的aFGF包括其各种形式的改构体。3.如权利要求1所述的一种用于鼻腔给药的aFGF脂质体，其特征在于：所述脂质体的平均粒径为40nm～1000nm。4.如权利要求1所述的一种用于鼻腔给药的aFGF脂质体，其特征在于：所述脂质体的平均粒径为300nm。5.一种根据权利要求1至4任一项所述的用于鼻腔给药的aFGF脂质体的制备方法，其特征在于，包括以...

【专利技术属性】
技术研发人员：巴克，巴若乾，杨洛玲，
申请(专利权)人：温州市中心医院，
类型：发明
国别省市：浙江,33