FGF‑18冷冻干燥制剂制造技术

本发明专利技术涉及药物制剂领域。更具体地本发明专利技术涉及成纤维细胞生长因子18(FGF‑18)化合物的冷冻干燥制剂及该制剂的制造方法。本发明专利技术的冷冻干燥制剂在适当的贮存时间内是稳定的。复溶后，它们可用于治疗软骨疾病如骨关节炎或软骨损伤。

FGF 18 freeze-dried preparation

The invention relates to the field of drug preparation. More specifically, the invention relates to fibroblast growth factor 18 (FGF 18) freeze-drying preparation of compound and the preparation method of manufacturing. The freeze-dried preparation of the invention is stable during the appropriate storage time. After resolution, they can be used in the treatment of cartilage diseases such as osteoarthritis or cartilage damage.

【技术实现步骤摘要】
FGF-18冷冻干燥制剂本申请是申请人阿雷斯贸易股份有限公司提交的名为“FGF-18冷冻干燥制剂”的中国专利申请第201280029683.2号的分案，享有欧洲专利申请EP11170437.5和美国专利申请61/499,216的优先权。上述母案是基于PCT申请PCT/EP2012/061495在中国提交的国家阶段申请，有效申请日为2012年6月15日。专利
本专利技术涉及药物制剂领域。更具体地，针对成纤维细胞生长因子18(FGF-18)蛋白质的冷冻干燥制剂，及该制剂的制造方法。本专利技术的冷冻干燥制剂室温下贮存时在相当一段时间内是稳定的。专利技术背景成纤维细胞生长因子18(FGF-18)是成纤维细胞生长因子(FGF)蛋白家族的成员，与FGF-8和FGF-17密切相关。FGF家族成员的特点是肝素结合域。这样一个推定的肝素结合结构域已被确定为FGF-18。据推测，与细胞表面的硫酸肝素蛋白多糖复合的FGF配体与受体结合后，即启动受体介导的信号传递。已证明，FGF-18是软骨细胞和成骨细胞的增殖剂(Ellsworthefal.,2002,骨关节炎和软骨，10：308-320；Shimoaka等，2002，J.Bio.Chem.277(9):7493-7500)。有人提出用FGF-18(单独使用(WO2008/023063)或与透明质酸联合使用(WO2004/032849))治疗软骨疾病如骨关节炎和软骨损伤。含有FGF多肽的药物组合物是本领域已知的。WO00/21548公开了一种药物组合物，该组合物包含与药学上可接受的载体或稀释剂组合的重组FGF。注射用溶液的合适载体或稀释剂的实例包括水或等渗盐溶液。WO2008/121563涉及药物制剂，这些药物制剂含有以单位剂量注射形式制备的FGF-21化合物和药学上可接受的载体。合适的载体中，可包括糖、缓冲液和/或表面活性剂。WO92/01442公开了一种冻干组合物，包含FGF、药学上可接受的填充剂和i)纤维素的碱金属盐或ii)聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯与半胱氨酸的组合物。组分i)和ii)使FGF组合物保持稳定。WO01/39788描述了一种药物组合物，包含FGF-18化合物和细胞毒素，以与药学上可接受载体(例如磷酸盐缓冲盐水)的混合物形式存在。WO2008/023063公开了包含FGF-18化合物与至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或类似物的制剂。作为一个例子，它公开了一种在诸如盐水、葡萄糖溶液、血清白蛋白和Ringer溶液的赋形剂中包含FGF-18的注射用制剂。当制备含有生物活性蛋白的药物组合物时，所述组合物的配制方式必须使蛋白活性保持一段适当的时间。蛋白质活性/稳定性的丧失，可能由蛋白质化学或物理性质不稳定尤其因蛋白变性、聚合或氧化所引起。因此所产生的产物可能是药学上不可接受的。虽然已知使用赋形剂(s)会增加给定蛋白质的稳定性，但这些赋形剂的稳定化效果高度依赖于赋形剂的性质和生物活性蛋白本身的性质。仍需要寻求包含FGF-18作为活性成分的进一步的制剂，所述制剂在一段合适的时间内是稳定的和适用于注射，优选为关节内注射。所述制剂可给予患者以治疗软骨疾病，如骨关节炎或软骨损伤。专利技术概述本专利技术的一个目的是提供一种包含FGF-18蛋白的新制剂。更具体地，所述制剂是含有FGF-18的稳定的冷冻干燥(即冻干)制剂。本专利技术还提供制备本专利技术冷冻干燥制剂的方法。本说明书所描述的冷冻干燥制剂在复溶后对于软骨疾病的治疗给药是非常有用的。在第一方面，本专利技术提供了一种稳定的冷冻干燥制剂，其包含或由FGF-18、缓冲液、泊洛沙姆表面活性剂和作为稳定剂的糖组成。在一个优选的实施方案中，缓冲液是磷酸盐缓冲液，表面活性剂泊洛沙姆是泊洛沙姆188，稳定剂是蔗糖。在进一步优选的实施方案中，缓冲液的pH值保持在或约6至8，更尤其是在或约7.2。在进一步优选的实施方案中，泊洛沙姆表面活性剂的浓度是在或约0.1至0.4mg/小瓶。优选地，FGF-18选自：1)一种多肽，其包含或由成熟形式的人FGF-18组成，对应的序列包含或由SEQIDNO:1的残基28(Glu)-残基207(Ala)组成，2)一种多肽，其包含或由截短形式的人FGF-18组成，对应的序列包含或由SEQIDNO:1的残基28(Glu)-残基196(Lys)组成，和3)一种多肽，其包含或由SEQIDNO:2组成。更优选地，FGF-18是trFGF-18，其定义见下文。在第二方面，本专利技术提供稳定的FGF-18冷冻干燥制剂的制造方法，包括以下步骤：1)形成FGF-18与缓冲液、表面活性剂和稳定剂的混合物，并2)将混合物进行冻干(冷冻干燥)，其中所述缓冲液是磷酸盐缓冲液，稳定剂是一种糖，如蔗糖，表面活性剂是泊洛沙姆表面活性剂，例如泊洛沙姆188。一个优选实施方案中，缓冲液保持pH在或约6-8，更特别地是在或约7.2。优选地，FGF-18选自：1)一种多肽，其包含或由成熟形式的人FGF-18组成，对应的序列包含或由SEQIDNO:1的残基28(Glu)-残基207(Ala)组成，2)一种多肽，其包含或由截短形式的人FGF-18组成，对应的序列包含或由SEQIDNO:1的残基28(Glu)-残基196(Lys)组成，和3)一种多肽，其包含或由SEQIDNO:2组成。更优选地，FGF-18是trFGF-18，其定义见下文。在第三方面，本专利技术提供一种医药或兽医用制品，包括：1)第一容器，包含一种稳定的冷冻干燥制剂，所述冷冻干燥制剂含有FGF-18、缓冲液、表面活性剂和稳定剂，和2)第二容器，包括复溶用的溶剂，其中，所述缓冲液是磷酸盐缓冲液，稳定剂是一种糖如蔗糖，表面活性剂是泊洛沙姆表面活性剂，如泊洛沙姆188，复溶用的溶剂是水或盐水溶液(例如0.9％w/v注射用氯化钠)。优选地，FGF-18选自下列物质组成的组：1)一种多肽，其包含或由成熟形式的人FGF-18组成，对应的序列包含或由SEQIDNO:1的残基28(Glu)-残基207(Ala)组成，2)一种多肽，其包含或由截短形式的人FGF-18组成，对应的序列包含或由SEQIDNO:1的残基28(Glu)-残基196(Lys)组成，和3)一种多肽，其包含或由SEQIDNO:2组成。更优选地，FGF-18是trFGF-18，其定义见下文。定义-本说明书所用的术语“FGF-18蛋白”或“FGF-18”，意指保持人FGF-18蛋白的至少一种生物活性的蛋白质。FGF-18可以是天然的、以其成熟形式存在，或其截短形式。人FGF-18蛋白的生物活性特别包括成骨细胞活性提高(见W098/16644)或软骨形成增加(见WO2008/023063)。天然的即野生型人FGF-18是由关节软骨的软骨细胞表达的蛋白质。WO98/16644将人FGF-18首次指定为zFGF-5并加以充分描述。SEQIDNO:1对应于天然人FGF-18的氨基酸序列，其信号肽由氨基酸残基1(Met)-残基27(Ala)组成。成熟形式的人FGF-18对应于SEQIDNO:1的残基28(Glu)-残基207(Ala)的氨基酸序列(180个氨基酸)。FGF-18对FGFR4和FGFR3、FGFR2的“IIIC剪接变体具有特异性(Ellsworthetal.,2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定的冷冻干燥制剂，包含FGF‑18、磷酸盐缓冲液、泊洛沙姆188和蔗糖；所述磷酸盐缓冲液的浓度是或约10mM，并保持pH值在7.0和7.5之间的范围内；所述泊洛沙姆188的浓度是或约0.1‑0.4mg/小瓶；所述蔗糖的浓度是或约15‑60mg/小瓶。

【技术特征摘要】
2011.06.17 EP 11170437.5;2011.06.21 US 61/499,2161.一种稳定的冷冻干燥制剂，包含FGF-18、磷酸盐缓冲液、泊洛沙姆188和蔗糖；所述磷酸盐缓冲液的浓度是或约10mM，并保持pH值在7.0和7.5之间的范围内；所述泊洛沙姆188的浓度是或约0.1-0.4mg/小瓶；所述蔗糖的浓度是或约15-60mg/小瓶。2.如权利要求1所述的稳定的冷冻干燥制剂，其中所述磷酸盐缓冲液保持pH值是或约7.2。3.如前述权利要求中任何一项所述的稳定的冷冻干燥制剂，其中所述FGF-18的浓度是或约20-300mcg/小瓶。4.如前述权利要求中任何一项所述的稳定的冷冻干燥制剂，其中所述制剂包含20、30、60、100、200或300mcg/小瓶FGF-18，10mM且pH是或约7.2的磷酸盐缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·切莱蒂，A·德尔里奥，
申请(专利权)人：阿雷斯贸易股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH