一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法技术

本发明专利技术提供一种甙元型黄酮生物转化及纯化技术，属于生物技术领域，其步骤包括：先溶解黄酮；然后调节溶液的ｐＨ值和温度；加入酶Ａ，反应一定时间，再加入酶Ｂ，反应一定时间，最后加入酶Ｃ，调节ｐＨ值和温度，反应一定时间，酶转化结束后，进行浓缩，分离，大孔树脂柱吸附、解吸，解吸液浓缩、干燥得产品。本发明专利技术可使黄酮克服空间位阻效应，大大提高生物效价；且具有反应条件温和、副产物少和无环境污染等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物技术，具体地说是一种甙元型黄酮生物转化 及纯化技术。(二)
技术介绍
黄酮类化合物在动物体内的代谢途径不同，仅有甙元型黄酮可以 直接被吸收进入动物血液，而大部分糖甙型的黄酮化合物在人体内不 能通过小肠壁进入到血液中，而仅有小部分黄酮在结肠微生物的作用 下，水解成甙元才能进入血液。因此，黄酮糖甙在动物体内的生物利 用率远远低于甙元型黄酮。因此，改善黄酮的构型，提高其在血液中 的吸收率是提高黄酮类产物生物利用率的重要途径。目前，对黄酮 配糖体的构型转化主要有化学法和生物法，国内外许多研究者采用化 学法水解黄酮糖苷，还有黄酮的醚化、酯化、酰基化等化学衍生化反 应，也可以改变黄酮的特性。但这些方法在反应过程中往往屏蔽了黄 酮化合物的主要官能团——酚羟基，对抗氧化产生不良影响。同时， 这些方法副产品较多，易造成环境污染。(三)
技术实现思路
本专利技术的技术任务是针对现有技术的不足，提供一种应用生物酶 技术使糖苷型黄酮转化为甙元型黄酮的甙元型黄酮生物转化及纯化 技术。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是 本专利技术主要包括以下步骤① 溶解糖苷型黄酮；② 调节溶液的pH值和温度；③ 加入酶A，反应一定时间；④ 加入酶B,反应一定时间；⑤ 调节pH值和温度，加入柚苷酶，反应一定时间；⑥ 酶转化结束后，进行浓缩，分离；⑦ 大孔树脂柱吸附、解吸；⑧ 解吸液浓缩、千燥得产品。 上述甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其步骤①所述糖苷型黄酮是指 银杏黄酮、芦丁、黄芩苷。上述甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其步骤①中糖苷型黄酮的 溶解，溶剂为自来水或纯化水，溶剂与反应底物的重量比为1: 100一300。上述甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其步骤②中pH值为4一6， 温度在40—6(TC之间。上述甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其步骤③中酶A为ci-淀 粉酶和纤维素酶中的一种或两种的混合物；酶加入量为反应底物的1 % —5%;反应时间为6—24小时。上述甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其步骤④中酶B为P —葡 聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶中的一种或几种的混合物；酶加入量为反 应底物的O. 1—5%,反应时间为6—24小时。上述甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其步骤⑤中pH值控制在 3—5，温度控制在30—5(TC之间；柚苷酶的用量为反应底物的0.5 一3倍，反应时间为6—24小时。上述甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其步骤⑦所用树脂为苯乙 烯型树脂，所用洗脱液为50 — 90%的乙醇溶液。上述甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其步骤⑧中浓縮、真空 干燥时温度不大于50-90°C。本专利技术的甙元型黄酮生物转化及纯化技术与现有技术相比，所产 生的有益效果是1) 本专利技术应用生物酶技术能促进化合物发生生化反应的理论， 成功地运用复合酶技术在分子水平上剪除糖苷型黄酮物质的分子配 糖支链，使之转化为甙元黄酮，使糖苷型黄酮物质克服空间位阻效应， 大大提高生物效价。且该专利技术具有反应条件温和，副产物少，无环境 污染等特点；2) 根据分子修饰理论，应用酶技术对糖苷型黄酮的分子进行结构 性修饰，使其转化为甙元型黄酮，转化率达到80%以上，生物活性效 价提高7倍以上。具体实施方式 实施例1:称取银杏黄酮5公斤，加入纯化水充分溶解，再加入纯化水到1000公斤，用稀盐酸调节溶液的pH值到5，调节溶液溶液到50'C, 精确称取a-淀粉酶、纤维素酶各250克；少量纯化水溶解，加入溶 液中，搅拌，反应15小时，再精确称取e—葡聚糖酶、果胶酶、木 聚糖酶各50克，少量水溶解，加入反应溶液中，反应12小时。用稀 酸液调节PH值至3.8，温度调节至40。C,加入柚苷酶10公斤，反应 20小时，反应完毕。将反应液真空减压浓縮至一定，离心过滤，清 液上DM—130树脂柱吸附，2倍纯水冲洗，70%乙醇溶液洗脱，洗脱 液减压浓縮，温度控制7(TC，浓膏真空干燥，温度控制70'C以下。 粉碎包装。 实施例2:称取芦丁 10公斤，加入自来水充分溶解，再加入水到1000公斤， 用稀盐酸调节溶液的PH到5.5,调节溶液溶液到55匸，精确称取ci-淀粉酶、纤维素酶各100克；少量纯化水溶解，加入溶液中，搅拌， 反应12小时，再精确称取P —葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶各50克， 少量水溶解，加入反应溶液中，反应12小时。用稀酸液调节PH值至 3.5，温度调节至5(TC，加入柚苷酶20公斤，反应24小时，反应完 毕。将反应液真空减压浓縮至一定，离心过滤，清液上D101树脂柱 吸附，2倍纯水冲洗，80%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓縮，温度控 制65。C，浓膏真空干燥，温度控制65-75。C以下，粉碎包装。实施例3:称取黄芩苷8公斤，加入自来水充分溶解，再加入水到1000公 斤，用稀盐酸调节溶液的PH到6，调节溶液溶液到6(TC，精确称取 u-淀粉酶、纤维素酶各150克；少量纯化水溶解，加入溶液中，搅 拌，反应24小时，再精确称取e—葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶各 50克，少量水溶解，加入反应溶液中，反应12小时。用稀酸液调节 Pll值至3.5，温度调节至50。C,加入柚苷酶20公斤，反应24小时， 反应完毕。将反应液真空减压浓缩至一定，离心过滤，清液上DIO树脂柱吸附，2倍纯水冲洗，60%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩， 温度控制6(TC,浓膏真空干燥，温度控制60-8(TC以下，粉碎包装。权利要求1、甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其特征在于包括以下步骤①溶解糖苷型黄酮；②调节溶液的pH值和温度；③加入酶A，反应一定时间；④加入酶B，反应一定时间；⑤调节pH值和温度，加入柚苷酶，反应一定时间；⑥酶转化结束后，进行浓缩，分离；⑦大孔树脂柱吸附、解吸；⑧解吸液浓缩、干燥得产品。2、 根据权利要求1所述的甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其 特征在于，步骤①所述糖苷型黄酮是指银杏黄酮、芦丁、黄芩苷。3、 根据权利要求1所述的甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其 特征在于，步骤①中糖苷型黄酮的溶解，溶剂为自来水或纯化水，溶 剂与反应底物的重量比为1: 100—300。4、 根据权利要求1所述的甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其 特征在于，步骤②中pH值为4一6，温度在40—60'C之间。5、 根据权利要求1所述的甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其 特征在于，步骤③中酶A为a -淀粉酶和纤维素酶中的一种或两种的 混合物；酶加入量为反应底物的1%—5%;反应时间为6 — 24小时。6、 根据权利要求1所述的甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其 特征在于，步骤④中酶B为e—葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶中的一 种或几种的混合物；酶加入量为反应底物的O. 1—5%，反应时间为6 一24小时。7、 根据权利要求1所述的甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其 特征在于，步骤⑤中pH值控制在3 — 5，温度控制在30 — 5(TC之间； 柚苷酶的用量为反应底物的0. 5—2倍，反应时间为6—24小时。8、 根据权利要求1所述的甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其 特征在于，步骤⑦所用树脂为苯乙烯型树脂，所用洗脱液为50 — 90 %的乙醇溶液。9、 根据权利要求1所述的甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其 特征在于，步骤⑧中浓縮、真空干燥时温度不大于本文档来自技高网...

【技术保护点】
甙元型黄酮生物转化及纯化技术，其特征在于包括以下步骤：①溶解糖苷型黄酮；②调节溶液的ｐＨ值和温度；③加入酶Ａ，反应一定时间；④加入酶Ｂ，反应一定时间；⑤调节ｐＨ值和温度，加入柚苷酶，反应一定时间；⑥酶转化结束后，进行浓缩，分离；⑦大孔树脂柱吸附、解吸；⑧解吸液浓缩、干燥得产品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：颜廷和，
申请(专利权)人：颜廷和，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]