一种降血糖红芪杂多糖及其提取分离工艺制造技术

本发明专利技术提供一种降血糖红芪多糖的分离工艺及其组成，将红芪药材用药材体积５～１８倍量的水，３０℃～１００℃提取１～５次，每次提取０．５～３．０小时，合并水溶液，浓缩至体积为药材的１～５倍；向浓缩液中加乙醇，使乙醇浓度达２０％～８５％，沉淀，过滤，得沉淀１；向滤液中再加入乙醇，使乙醇浓度达２０％～８５％，沉淀，过滤，得沉淀２；向滤液中继续加入乙醇，使乙醇浓度达２０％～８５％，沉淀，过滤，得沉淀３；然后将所得沉淀１、２、３分别干燥，纯化得到红芪多糖Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ。大量实验证明，本发明专利技术的红芪多糖３对实验性糖尿病小鼠和大鼠具有显著的降血糖作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药领域，涉及一种植物多糖的提取分离方法，尤其涉及一种 降血糖红芪多糖的提取分离工艺；同时还涉及该分离纯化的红芪多糖的组成。
技术介绍
红芪为豆科植物多序岩黄芪0/e办M"n/w / o/如o//^ Hand-Mazz)的干燥 根，是我国独特品种，甘肃著名特产。以前中国药典将红芪列在黄芪项下，生 产中成药时可用红芪代替黄芪。1985年版药典将红芪单列，红芪不能代替黄 芪使用。由于红芪在中药处方中的应用较少，限制了红芪在医药中的应用。据 记载，红芪具有补气固表，利尿脱毒，排脓，敛疮生肌等多种功效，用于气虚 乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈 疽难渍，血虚萎黄，内热消渴等的治疗。现代医学研究表明，红芪多糖对慢性 肾炎及蛋白尿也有一定的治疗作用。国内对红芪多糖的研究主要是总多糖药效学研究，如增强细胞免疫功能的 作用，抗衰老作用，试验性肝损伤的保护作用。1997年兰州大学的刘方明从 红芪中提取分离出一种均多糖-葡聚糖，其提取方法是用水在IO(TC提取4 小时，过滤，滤液浓縮，用sevage法除蛋白后，水溶液用3倍量的乙醇沉淀， 然后将沉淀溶解于水中，用Sephadex G-200柱层析纯化红芪多糖，得到3种 不同分子量的红芪均多糖。甘肃中医学院学报，2007年01期发表的《红芪多糖对实验性T2DM大鼠 胰岛素抵抗和C肽分泌作用的研究》 一文中指出，红芪均多糖可明显降低血 糖，有效控制体重，改善2型糖尿病模型大鼠胰岛素抵抗。中国中医药信息杂 志，2007年05期刊登了《红芪多糖对改善2型糖尿病模型大鼠胰岛素抵抗的 影响》，文中指出，红芪多糖可通过多途径多环节减轻糖尿病模型大鼠的胰岛 素抵抗。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种降血糖红芪杂多糖的提取分离工艺。本专利技术的另一目的是提供该提取分离的降血糖红芪杂多糖的组成。一、 红芪杂多糖的分离纯化本专利技术红芪杂多糖的分离纯化工艺，包括以下工艺步骤(1) 红芪杂多糖的分离将红芪药材用药材体积5 18倍量的水，3(TC 10(TC提取1 5次，每次提 取0.5 3.0小时，合并水溶液，浓縮至体积为药材的1~5倍；向浓縮液中加乙 醇，使乙醇浓度达20%~85%，沉淀，过滤，得沉淀l;向滤液中再加入乙醇， 使乙醇浓度达20% 85%,沉淀，过滤，得沉淀2;向滤液中继续加入乙醇， 使乙醇浓度达20%~85%，沉淀，过滤，得沉淀3;然后将所得沉淀1、 2、 3 干燥，分别得红芪多糖l，红芪多糖2，红芪多糖3。红芪多糖l， 2， 3的含 量都在50%以上。上述干燥可采用冷冻干燥、或喷雾干燥、或4(TC 10(TC下 真空干燥、常压干燥。为了除去药材中的杂质，红芪药材在水提取前，先用乙醇浸泡0-24小时， 然后回流1-12小时，过滤，将药渣除去残留的乙醇后，再用水提取多糖。本专利技术采用先分离(红芪多糖含量高， 一般在50%以上)，后纯化的工艺， 节约成本，并适合于工业化生产。(2) 红芪杂多糖的纯化红芪多糖l， 2， 3除蛋白和色素红芪多糖l， 2， 3分别加蒸馏水，加热 溶解后，冷却，分别加入胃蛋白酶，37"C酶解，离心，弃去沉淀，上清液Sevage 法除蛋白质，然后用双氧水脱色，再分别加乙醇，使乙醇浓度分别为20-85%， 静置，离心，分别得红芪多糖I、 II、 III。红芪多糖I， II的纯化将红芪多糖I， II分别溶于蒸馏水中，离心除去不 溶物，上清液上Sephadex G-200分离，用0.9%NaCl溶液洗脱，洗脱速度为 0.2mL/min，每3mL收集一份，苯酚-硫酸法跟踪检测，红芪多糖I、 II的凝 胶色谱吸收曲线图分别见图l、图2，透析后干燥，得到红芪多糖Ia、 IIa。红芪多糖m的纯化将红芪多糖m溶于蒸馏水中，离心除去不溶物，上清液用Sephadex G-25分离，分别用0.9%NaCl溶液和蒸馏水洗脱，洗脱速度 0.2mL/min，每3mL收集一份，苯酚-硫酸法跟踪检测，绘制凝胶色谱吸收曲 线见图3，透析后干燥，得到红芪多糖IIIa和nib。二、 红芪多糖组成的测定1、红芪多糖的气相色谱测定 l.l供试品溶液(糖腈乙酰酯衍生物)的制备精密称取红芪多糖I、 II、 III、 IIIa、 IIIb各10mg，分别加入4mL Qmol'L") 三氟醋酸，于90。C水解8h，离心(3500 r'min-1),取上清液，于80。C减压蒸 干，残渣分别加10mg盐酸羟胺，再加0.5mL吡啶，于90。C反应0.5h，冷却 后再加0.5mL醋酐于9(TC反应0.5h;冷却，加入lmLH20和lmL氯仿萃取3 次，取氯仿层，蒸干，残渣加100juL氯仿溶解，作为供试品溶液。1.2对照品溶液的制备精密称取鼠李糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖对照品10mg，同上 述供试品溶液(糖腈乙酰酯衍生物)相同的方法制备，作为对照品溶液。 1.3气相色谱条件固定液AT.XE-60;柱长15m;内径0.53mm;膜厚l.O)im;柱温 225 °C;汽化温度250 °C，检测温度260 °C;气体流速N2(载气)40 mL.min-1 ，分流比40:1;检测器FID。1.4测定方法取上述对照品溶液、供试品溶液，按气相色谱条件，分别进样O.lHl，测定 结果见图4 10，比较样品色谱峰与对照品色谱峰的保留时间，判断样品组成。 红芪多糖样品通过水解断裂成单糖基，并制备成糖腈乙酰酯衍生物，单糖基衍 生物是通过与对照品相应单糖衍生物出峰时间(即保留时间) 一致来确定的。2、 红芪多糖分子量测定2.1色谱条件Agilent 1100高效液相色谱系统；色谱柱ShodexKS-805和KS-804串联； 示差检测器Agilent G1362A;柱温40°C;流动相0.2MNaCl;流速 0.8 ml/min;2.2标准曲线绘制分子量分别为738、 5900、 11800、 212000、 404000 Dalton的标准葡聚糖 (Polymer Laboratories)用流动相配制成约1 mg/ml的溶液，离心10min，转 速10000 rpm，取上清液进样测定。 2.3样品制备分别取红芪多糖I、 II、 III、 IIIa、 nib各10mg，置于10ml容量瓶中，用 流动相配制成约1 mg/ml的溶液，离心10min，转速10000 rpm，取上清液进 样测定。数据由Agilent GPC软件处理。3、 结果红芪多糖组成如下红芪多糖I:分子量为1000-270000，组成多糖的单糖基为鼠李糖0.1~5%、 阿拉伯糖1~12%、木糖0.1~7%、半乳糖1~12%、葡萄糖65~95°/。；红芪多糖II:分子量为1000 90000，组成多糖的单糖基为鼠李糖1~16%、 阿拉伯糖5~45%、木糖1~15%、半乳糖1~8%、葡萄糖30~90%;红芪多糖III:分子量为1000 100000，组成多糖的单糖基为鼠李糖0.1~6%、阿拉伯糖5 55%、木糖1 35%、半乳糖1~20%、葡萄糖20 70%; 同时紫外检测表明其还含有部分糖醛酸。红芪多糖IIIa:分子量为2000-100000，组成多糖的单糖基为鼠李糖 1 9%、阿拉伯糖30~90%、木糖0.1~本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种红芪杂多糖的提取分离工艺，包括以下工艺步骤：（１）红芪多糖的分离　将红芪药材用药材体积５～１８倍量的水，３０℃～１００℃提取１～５次，每次提取０．５～３．０小时，合并水溶液，浓缩至体积为药材的１～５倍；向浓缩液中加乙醇，使乙醇浓度达２ ０％～８５％，沉淀，过滤，得沉淀１；向滤液中再加入乙醇，使乙醇浓度达２０％～８５％，沉淀，过滤，得沉淀２；向滤液中继续加入乙醇，使乙醇浓度达２０％～８５％，沉淀，过滤，得沉淀３；然后将所得沉淀１、２、３分别干燥，分别得红芪多糖１，红芪多糖２，红芪多糖３。　（２）红芪多糖的纯化　红芪多糖１，２，３的纯化：红芪多糖１，２，３分别加蒸馏水，加热溶解后，冷却，分别加入胃蛋白酶，３７℃酶解，离心，弃去沉淀，上清液Ｓｅｖａｇｅ法除蛋白质，然后用双氧水脱色，再分别加乙醇，使乙醇浓度分别 为２０－８５％，静置，离心，分别得红芪多糖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：封士兰，胡芳弟，赵良功，李晓东，李冰，马丹，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：62[中国|甘肃]