褐点石斑鱼鳔细胞系的构建方法技术

本发明专利技术涉及一种褐点石斑鱼鳔细胞系的构建方法，它是以褐点石斑鱼鳔组织为材料启动原代培养，在含胎牛血清、羧甲基壳寡糖、碱性成纤维样细胞生长因子、Ⅰ型胰岛素样生长因子、Ｎ－乙酰葡萄糖盐酸盐和对数期褐点石斑鱼心脏细胞培养上清液的ｐＨ值为７．０～７．４的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液中培养；采用胰蛋白酶消化法进行传代培养；由本发明专利技术构建的褐点石斑鱼鳔细胞系，目前已传至第６２代，其工艺科学合理，可望应用于生态毒理学研究，对海洋中存在的各种环境毒物进行污染监测和安全性评价；还可应用于鱼类病毒的分离、鉴定、体外繁殖以及病毒与宿主细胞相互作用等方面的研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用褐点石斑鱼鳔组织细胞建立鳔细胞系的方法——褐点石斑鱼 鳔细胞系的构建方法。
技术介绍
近年来，随着各种海洋鱼类病毒性疾病大规模爆发和海洋环境污染的日益加剧， 水产养殖业损失巨大，同时，海洋中各种环境污染物，包括基因毒物、诱变剂、致癌 物、环境激素和内分泌干扰物等在水体中存在和在鱼体内的富集对人类健康带来了极 大的威胁，急需各种鱼类病毒疫苗，并建立海洋环境监测系统。而鱼类细胞系，特别 是海洋重要经济鱼类的各种组织细胞系，正是作为研究病毒感染途径、感染机理，研 制鱼类病毒疫苗的重要体外研究体系，也是进行环境污染监测和安全性评价的重要体 外研究模型，尽快建立多种海洋重要经济鱼类细胞系并在此基础上进行鱼类病毒学和 环境毒理学研究，是该领域的研究热点和主攻方向之一。褐点石斑鱼(五/ /"e; /^/^/^cogw加^y)俗称"老虎斑"，是我国重要的海水养殖 鱼类，广泛分布于印度洋和太平洋的热带海域，具有较高的经济价值。目前，还未有 建立褐点石斑鱼其鳔组织细胞系的相关报道，也没有通过鳔细胞系在病毒病和环境监 测中进行应用研究的成功报道。成功建立褐点石斑鱼鳔细胞系可望应用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种褐点石斑鱼鳔细胞系的构建方法，首先将鲜活褐点石斑鱼暂养于浓度均为１０００单位／毫升的青霉素和链霉素的高双抗海水中消毒处理，２４小时后以７５％酒精再次消毒，置于超净工作台中解剖取下鳔组织，用磷酸盐缓冲液漂洗后剪成大致１ｍｍ↑［３］的组织块；离心收集的鳔组织块则用含有５％胎牛血清和０．０５‰～０．１５‰的羧甲基壳寡糖的ｐＨ值为７．０～７．４的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液充分悬浮，均匀接种于使用０．０１％明胶进行预处理的２５毫升培养瓶中，２２～２４℃下正置干贴１６～２０小时后，每瓶加入５毫升褐点石斑鱼鳔细胞专用增殖培养液，置２２～２４℃生化培养箱中培养，每隔３～５天吸出２．５毫升上述２５毫升培养瓶中的...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：樊廷俊，魏云波，姜国建，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]