多种抗体标记的SERS探针和基底及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，具体为多种抗体标记的SERS探针和基底及其制备方法和应用。本发明专利技术采用采用多巴胺在自聚合条件下包埋结合多种抗体，得到聚多巴胺和抗体修饰的SERS基底和SERS标记探针，通过免疫结合作用力，利用拉曼光谱技术实现了胰腺癌细胞提取的外泌体以及临床胰腺癌病人的血清样本的高灵敏度检测和诊断，统计学数据分析发现基于MIF抗体的SERS平台能够实现胰腺癌的肿瘤分期判断。本发明专利技术中的SERS探针标记方法简单方便，用于胰腺癌外泌体的检测，快速灵敏，特异性高，所需样本量少，无需高速离心的分离过程，能适用于临床诊断和肿瘤分期转移判断。

Various antibody labeled SERS probes and substrates and their preparation methods and Applications

The invention belongs to the field of molecular biology technology, specifically a SERS probe and substrate with multiple antibody labeling, and its preparation method and application. The invention adopts the self polymerization of dopamine in the condition of embedding combined with a variety of antibodies, and antibody obtained polydopamine modified SERS substrate and the SERS probe labeled by immune binding force, to achieve high sensitivity detection and diagnosis of serum samples of exosomes in pancreatic cancer cell extraction and clinical pancreatic cancer patients using Raman spectroscopy technique. Statistical data analysis showed that SERS staging platform MIF antibody can achieve tumor based on pancreatic cancer. The SERS probe labeling method in this invention is simple and convenient. It is used for the detection of exocrine body of pancreatic cancer. It is fast, sensitive, specific, and requires less sample size. It does not need high-speed centrifugation. It can be applied to clinical diagnosis and tumor metastasis.

【技术实现步骤摘要】
多种抗体标记的SERS探针和基底及其制备方法和应用
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及多种抗体标记的SERS探针和基底及其制备方法和应用。
技术介绍
胰腺癌是预后最差的消化道恶性肿瘤之一，国家肿瘤中心对2015年全国肿瘤登记中心收集的全国各登记处上报的2012年恶性肿瘤登记资料进行分析估计，其中胰腺癌的发病例数为8.6万，发病率为6.35/105，在所有恶性肿瘤发生率中排第10位，其死亡例数达7.7万，死亡率为5.72/105，位居第6位。胰腺癌缺乏特异的临床表现和敏感的早期诊断指标，其诊断和随访常用的血清标志物是CA19-9，但诊断特异性差。目前胰腺癌术前的诊断和分期主要依赖于影像学包括螺旋CT增强扫描和磁共振成像（MRI）的表现，进行原发肿瘤大小（T）、N-区域淋巴结（N）、M-远处转移(M)的分期（TNM）判断。CT扫描时间短，成像速度快，价格便宜，但是辐射量大，不能作为常规的检查方法。MRI软组织分辨率高，能显示细节，无辐射，但是检查时间长，扫描范围的限制难以对远处转移进行评估，但最终确诊仍需病理学检查。所以目前急需开发一些快速、灵敏、特异性高、无创伤、价格适宜的胰腺本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多种抗体标记的SERS探针和基底的制备方法，其特征在于，具体步骤为：（1）在2~20mM核壳结构的金‑银纳米颗粒溶液中，加入anti‑MIF、anti‑GPC1、anti‑EGFR、 anti‑EpCAM、anti‑CD9、 anti‑CD63六种抗体，每种抗体的浓度为5~40μg/mL，每种抗体的加入量为30~150μL；并加入浓度为1~20mg/mL 的多巴胺溶液40~150μL；室温下反应0.5~4小时；反应后的溶液经过离心，再用去离子水进行分散；得到多种抗体标记的SERS探针：（2）取普通的玻璃载玻片泡于8~14M的NaOH中4~7h，再往溶液中添加浓度为10~100mg/ml的多...

【技术特征摘要】
1.一种多种抗体标记的SERS探针和基底的制备方法，其特征在于，具体步骤为：（1）在2~20mM核壳结构的金-银纳米颗粒溶液中，加入anti-MIF、anti-GPC1、anti-EGFR、anti-EpCAM、anti-CD9、anti-CD63六种抗体，每种抗体的浓度为5~40μg/mL，每种抗体的加入量为30~150μL；并加入浓度为1~20mg/mL的多巴胺溶液40~150μL；室温下反应0.5~4小时；反应后的溶液经过离心，再用去离子水进行分散；得到多种抗体标记的SERS探针：（2）取普通的玻璃载玻片泡于8~14M的NaOH中4~7h，再往溶液中添加浓度为10~100mg/ml的多巴胺溶液6~10ml，将上述培养皿放在专用摇床上摇0.5~2h，之后用去离子水冲洗干净；将修饰并清洗后的载玻片置于含有六种抗体anti-MIF、anti-GPC1、anti-EGFR、anti-EpCAM、anti-CD9、anti-CD63的体积浓度为0.2~2%的BSA中，其中，每种抗体的浓度为1~10mg/mL，反应0.5~3h；用去离子水冲洗1~3次后，自然晾干，得到基片。2.由权利要求1所述制备方法制备得到的多种抗体标记的SERS探针和基底。3.如权利要求2所述的多种抗体标记的SERS探针和基底在胰腺癌外泌体的高灵敏检测中的应用，具体步骤如下：（1）细胞培养以及外泌体的提取把胰腺癌细胞系PANC-01在RPMI1640培养基中培养，培养基在使用之前添加2~20%胎牛血清、50~150g/mL苄青霉素和50~150g/mL链霉素，细胞置于含2~10%CO2孵箱内在25~45℃条件下培养至足够数量；采用高速离心方法提取外泌体：首先，将细胞培养液置于离心机于500~2000g离心2~10min，再1000~3000g离心2~10min，去除细胞碎片，取上层清液...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈惠，张人，李腾达，黄志鹏，孔继烈，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31