血纤维蛋白溶解系统激活蛋白技术方案

本发明专利技术阐述了一种新的蛋白质－血纤维蛋白溶解系统激活蛋白。其Ｎ－端氨基酸序列为Ｃｙｓ.Ａｒｇ.Ａｒｇ.Ｇｌｕ.Ｐｈｅ.Ｈｉｓ.Ｉｌｅ.Ａｌａ.Ｓｅｒ.Ｇｌｕ。该蛋白质是从蚯蚓中提取获得，在体内有溶解血栓作用。有作为抗血栓类药物的药用价值。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于治疗和预防与血栓生成及微循环障碍有关疾病的新型溶栓药物。本专利技术还涉及其他缺血性以及微循环障碍疾病的治疗。此外，本专利技术还涉及用于血纤维蛋白溶解系统激活蛋白测定的分析方法和试剂盒、血纤维蛋白溶解系统激活蛋白特异性抗体。本世纪八十年代未九十年代初出现全球性的老年社会，而危害中老年人生命的第一杀手就是心脑血管疾病。据世界卫生组织(WHO)统计，全世界每年约有1200万人死于心脑血管疾病。中国中风发病率约219/10万，患病率为761/10万，全国约有900万人患有中风，在发病人数中约有2/3为缺血性中风，其血栓的形成是导致缺血性中风和其它一些心脑血管疾病的主要原因，据分析从八十年代初至九十年代初十年间，由于我国人在饮食结构、体力活动强度和其他工作生活条件的较大变化，按过去十年有关心脑血管发病因素的增长；情况，有关专家保守的估计，到二十一世纪初，我国中风发病率将上升60％，冠心病发病率将上升80％。为此，科学家为寻求治疗血栓疾病的药物付出了极大的努力。目前应用于治疗血栓疾病主要有链激酶、尿激酶、蛇毒蛋白。但是距离人类抵抗这类疾病的要求还远远不够。1986年，日本科学家美源恒首次应用现代生物技术方法提取蚯蚓中溶栓活性成分。确认口服蚯蚓粗蛋白提取物对血栓溶解、预防血栓形成以及降低血液粘度等方面有效。并且分离了六种蛋白酶组分，申请了专利——US4,568,545。认为血栓溶解的活性组分就是这六个组分其中之一或几个的组合。这六个蛋白酶组分分别是F-O-HM-45分子量24,500±2,000道尔顿F-I-1-HM-54 分子量27,500±2,000道尔顿F-I-2-HM-15 分子量27,000±2,000道尔顿F-II-HM-64 分子量27,800±2,000道尔顿F-III-1-HM-27分子量32,400±2,000道尔顿F-III-2-HM-89分子量32,800±2,000道尔顿在此基础上，我国科学家在90年代初推出了蚯蚓粗蛋白提取物口服溶栓胶囊，目前在我国有多家大型制药企业生产该类药物，如“江中制药”的“博洛克”、“青岛双龙”的“普恩复”等等。在此之后，对蚯蚓中溶栓活性有效组分的确定方面有大量的研究工作。但是，蚯蚓中溶栓活性组分的最终确定的研究一直没有进一步的进展。使蚯蚓的药用功能进一步应用受到限制。本专利技术涉及新的蛋白质和它的用途。此蛋白质是能激活体内纤溶系统的特异性的蛋白酶。使用该蛋白酶用于全身治疗可以溶解已生成的血栓和抑制血栓的生成，显示出强大的抗血栓活性。同时，该蛋白质有改善微循环的作用。提供治疗由血栓形成引起的疾病和微循环障碍有关疾病的方法。本专利技术的另一个目的是提供一种检测蚯蚓或蚯蚓提取物中血纤维蛋白溶解系统激活蛋白的存在和量检测方法及试剂盒。本专利技术的另一个目的是提供用于检测和定量体液中存在的血纤维蛋白溶解系统激活蛋白的特异性抗体的方法。本专利技术的另一个目的是提供对包含血纤维蛋白溶解系统激活蛋白分子的特异性区域具有选择性的血纤维蛋白溶解系统激活蛋白抗体的组合物。本专利技术的另一个目的是提供用于检测和定量血纤维蛋白溶解系统激活蛋白生物合成的组合物。本专利技术的另一个目的是提供检测和定量体中存在的血纤维蛋白溶解系统激活蛋白目标物的存在和数量的方法。通过阅读下面公开的专利技术技术解决方案的详细描述和附加的权利要求后本专利技术的这些目的和其它目的以及特性和优点就会变得明显了。本专利技术中的蛋白质的分子量大约为16200道尔顿(16.2kDa)，与专利US4,568,545中所指蛋白质由明显的不同。本专利技术中的蛋白质由蛋白酶的活性，在体内有明显增强体内纤溶作用、促进血栓溶解；对血液流变学指标有明显改善；而且不影响凝血系统和抗凝指标。此蛋白的特征还在于特殊的N-末端氨基酸序列，这种蛋白质的N-端头十个氨基酸序列(seq ID No1)如下本专利技术所指的血纤维蛋白溶解系统激活蛋白是具有上述特征的蛋白质，Cys·Arg·Arg·Glu·Phe·His·Ile·Ala·Ser·Glu12345678910(seq ID No1)这种蛋白质是从蚯蚓中提取和纯化的。将这种蛋白酶命名为血纤维蛋白溶解系统激活蛋白(fibrinolysis activating protein FAP)。本专利技术提供了通过向患有因血栓生成及微循环障碍有关疾病的患者，以足以溶解血栓的量的包含实质上纯化的血纤维蛋白溶解系统激活蛋白或血纤维蛋白溶解系统激活蛋白的组合物，用来治疗血栓形成引起的疾病或改善微循环的方法。本专利技术对急性缺血性心脑血管病、慢性动脉闭塞症、微循环障碍特别有用。本专利技术也包括检测和测量生物体液和组织中、分离提取物中的血纤维蛋白溶解系统激活蛋白的方法和试剂盒。定位组织中血纤维蛋白溶解系统激活蛋白的试剂盒。所说的测定方法和试剂盒可以是本领域普通技术人员公知的任何形式。本专利技术也包括血纤维蛋白溶解系统激活蛋白的特异性的抗体和抑制血纤维蛋白溶解系统激活蛋白特异性抗体结合的抗体(抗独特型抗体)。这些抗体可以是多克隆抗体或者单克隆抗体。血纤维蛋白溶解系统激活蛋白特异性抗体可以用于检测试剂盒以便检测血纤维蛋白溶解系统激活蛋白的存在的数量和位置，这种血纤维蛋白溶解系统激活蛋白特异性抗体可以检测蚯蚓提取物中血纤维蛋白溶解系统激活蛋白的含量。用于标定蚯蚓提取物的药效。本专利技术也包括用于检测抗血纤维蛋白溶解系统激活蛋白抗体的存在和数量的检测方法和试剂盒，所说的检测方法和试剂盒可以是本领域普通技术人员公知的任何形式。本专利技术还包括用同位素或其它分子或蛋白质标记的血纤维蛋白溶解系统激活蛋白肽片段，所说的标记用分子或蛋白质在现有技术(包括但不限于正电子发射断层摄影术、放射自显影术、流动细胞计量术、放射受体结合测定和免疫组织化学)中用于检测和显示血纤维蛋白溶解系统激活蛋白的作用目标物的存在数量和位置。血纤维蛋白溶解系统激活蛋白肽片断也可以作为血纤维蛋白溶解系统激活蛋白作用目标物的抑制剂，由此阻断目标物的生物活性。这些肽也可用于分离血纤维蛋白溶解系统激活蛋白目标物。本专利技术也包括血纤维蛋白溶解系统激活蛋白、血纤维蛋白溶解系统激活蛋白肽片段、血纤维蛋白溶解系统激活蛋白抗血请、或者与用于治疗和研究的溶栓作用有关的血纤维蛋白溶解系统激活蛋白作用目标物的激活剂和抑制剂。本专利技术包括与血纤维蛋白溶解系统激活蛋白的转录和翻译有关的核糖核酸与脱氧核糖核酸的分子探针。这些分子探针在组织和细胞中提供了检测和测量血纤维蛋白溶解系统激活蛋白作用方式的手段。另外，本专利技术包括核酸序列，这种核酸序列包含编码上述公开的氨基酸序列和编码血纤维蛋白溶解系统激活蛋白及其片段的核苷酸密码子。本专利技术还涉及使用血纤维蛋白溶解系统激活蛋白和肽片段、相应的核酸的序列、与血纤维蛋白溶解系统激活蛋白及其肽特异结合的抗体诊断与血栓生成及微循环障碍有关的疾病和紊乱的方法。本专利技术还包括鉴定血纤维蛋白溶解系统激活蛋白作用的特异性目标物的方法和由此鉴定和分离的目标物分子。申请中申请人发现了一种新的蛋白质分子。在体外这种蛋白质分子有蛋白酶的作用。在体内这种蛋白质分子有明显增强体内纤溶作用、促进血栓溶解；对血液流变学指标有明显改善；而且不影响凝血和抗凝指标。因此，这些蛋白质分子在功能上定义为血纤维蛋白溶解系统激活蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的血纤维蛋白溶解系统激活蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张益民，
申请(专利权)人：张益民，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]