Cu‑64标记的Dimer‑San A环肽衍生物胰腺癌分子探针的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种Cu‑64标记的Dimer‑San A环肽衍生物胰腺癌分子探针的制备方法，该方法包括以下步骤：⑴将NOTA‑Dimer‑Sansalvamide A溶解于乙腈，配制成浓度为1μg/μL的多肽溶液；⑵

【技术实现步骤摘要】
Cu-64标记的Dimer-SanA环肽衍生物胰腺癌分子探针的制备方法
本专利技术涉及一种探针的制备方法，尤其涉及Cu-64标记的Dimer-SanA环肽衍生物胰腺癌分子探针的制备方法。
技术介绍
胰腺癌是世界第五大恶性肿瘤，其中位生存期低于6个月，总的5年生存率低于6%，仅10%的患者适合手术治疗，其预后差与该病未能早期诊断密切相关。随着我国人口的老龄化，胰腺癌在我国的发病率有所增加，其将成为未来几年我国一个主要的健康问题。目前，胰腺癌的常规影像诊断有超声（包括内镜超声）、CT以及MRI，然而这些结构影像对胰腺癌诊断特异性差，胰腺癌与慢性胰腺炎、尤其是慢性肿块性胰腺炎的鉴别诊断是影像医学与临床医学长期以来亟待解决的难题。18F-FDGPET/CT的临床应用，大大提高了胰腺癌诊断的准确性。但18F-FDG作为一种肿瘤非特异性显像剂，其自身的局限性也显而易见---在胰腺癌的鉴别诊断方面存在假阳性与假阴性。Meta分析研究显示：18F-FDGPET/CT鉴别诊断胰腺癌与胰腺炎的灵敏度、特异性分别为90%、84%。18F-FDG制备通过自动化化学合成模块（chemistryprocesscontrolunit，CPCU），采用软件控制自动合成。合成方法是以1,3,4,6-四-氧-乙酰基-2-氧-三氟甲烷磺酰基-β-D-吡喃甘露糖（简称三氟甘露糖）为原料，在相转移催化剂Kryptofix2.2.2(氨基聚醚2.2.2)促进下，18F离子与三氟甘露糖2位上的羟基发生亲核取代反应，生成18F-FDG保护型的前体，经酸或碱水解脱去乙酰保护基得到18F-FDG。18F-FDGPET/CT作为肿瘤非特异性显像剂，在肿瘤早期良恶性鉴别诊断方面存在明显不足：假阳性与假阴性并存，从而导致肿瘤良恶性诊断的误诊与漏诊。为了克服18F-FDG的不足，有学者标记了CA199抗体片段进行胰腺癌的分子影像诊断，但放射免疫显像不论是使用放射性核素标记单克隆抗体或者其片段，均存在分子量较大，血液清除缓慢（4-20h），在较短时间内难以得到较高的T/NT比值的问题；再者，CA199是胰腺癌非特异性抗原，在胰腺炎性病变中亦有明显表达。受体显像所用的标记配体分子量小、血液清除快、组织穿透力强、T/NT比值高、无免疫原性，具有灵敏度高、特异性强和准确性好等优点，是分子核医学最活跃的前沿研究领域之一。热休克蛋白90（heartshockprotein90，Hsp90）是一种高度保守的在生物界普遍存在、有特殊分子伴侣功能的蛋白，分子量约为83～90KDa。Hsp90含有三个高度保守的结构域：即N端三磷酸腺苷结合域、中间结构域、C末端结构域，以同源二聚体形式存在，主要与细胞周期和细胞凋亡调控相关。研究证实，Hsp90在包括胰腺癌在内的多种恶性肿瘤细胞中异常高表达，是正常细胞的2-10倍，并与肿瘤的发生、发展、分级、分期及预后密切相关；Hsp90在肿瘤细胞质中被激活并定位到细胞表面，而在正常细胞中仅驻留在细胞质中。因此，Hsp90作为一潜在的肿瘤治疗研究靶点日益受到关注，也为其成为靶标的分子影像研究奠定了基础。SansalvamideA(简称SanA)是1999年由美国Belofsky等从海洋菌属Fusarium中分离出来的一种由两个亮氨酸、一个缬氨酸、一个苯丙氨酸和一个α-羟基异己酸组成的环五肽酯类化合物，具有很高的亲脂性及显著的抗肿瘤能力，其对美国国立癌症研究所的60种恶性肿瘤细胞系具有显著的抗增殖活性，且对包括胰腺癌细胞系在内多种肿瘤细胞具有治疗靶向性。将SanA分子中的酯键改造成酰胺键，所得化合物为环五肽（称SanA环肽）。研究发现，利用氟、氯、甲氧基等基团取代SanA环肽分子中苯环对位氢原子，所得SanA环肽衍生物的抗肿瘤生物活性明显优于SanA。SanA及其衍生物抗胰腺癌活性的研究，国内尚属空白，而国外研究较多。有学者认为SanA具有杀死多种胰腺癌细胞系的重要作用。它的衍生物具有独特的抗癌特性，并与目前抗胰腺癌的药物没有结构同源性。PanPS等合成了31种SanA环肽衍生物，对两种胰腺癌细胞系(分别是PL45和BxPC-3)的抗癌活性进行了研究，其中6种衍生物的抗胰腺癌效果是临床常用药物如(如,5-FU)的140多倍，而正常细胞对其则具有较好的耐受性。到目前为止，合成的SanA环肽衍生物有100余种，其抗肿瘤活性差别明显。大量对SanA环肽衍生物结构-抗癌效应关系的研究发现，为保证其较高的抗癌活性，该衍生物必须含有两个连续D-氨基酸和/或N-甲氧基。Pan等合成了78种SanA环肽衍生物，其中第1号衍生物（简称DiamerSanA），显示出最强的抗胰腺癌（PL45、BxPC3）活性，对胰腺癌PL45细胞的半数抑制率（IC50）仅为1-20nM，是报道的抗胰腺癌活性最强的SanA环肽衍生物。64Cu(T1/2=12.7h)被国际原子能机构（IAEA）称为“新兴PET核素”，具有广阔的应用前景。与18F（T1/2=110min）等PET核素相比，64Cu具有相对较长的半衰期(T1/2=12.7h)，可进行较长时间的显像研究，并且便于核素中长程的运输。64Cu同时发射有β+电子（17%）和β-电子（39%），可以用于PET成像和放射性治疗，有望集中放射性核素的诊疗一体化研究。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种有效提高标记率的Cu-64标记的Dimer-SanA环肽衍生物胰腺癌分子探针的制备方法。为解决上述问题，本专利技术所述的Cu-64标记的Dimer-SanA环肽衍生物胰腺癌分子探针的制备方法，包括以下步骤：⑴将NOTA-Dimer-SansalvamideA溶解于乙腈，配制成浓度为1μg/μL的多肽溶液；⑵在37~111MBq的64CuCl2中加入300μL0.1M且pH=5.5的乙酸氨(NH4OAc)缓冲液进行反应，得到反应液64Cu(OAc)2；⑶将5~10μg所述多肽溶液加入到所述反应液64Cu(OAc)2中，于45℃加热45min，并在加热的过程中持续震荡，得到产物64Cu-NOTA-Dimer-SansalvamideA，简称64Cu-NOTA-Dimer-San，其结构式如下：；⑷所述产物64Cu-NOTA-Dimer-San用悬干机于40ºC除去溶剂，并用含有5%DMSO的磷酸盐缓冲液（PBS）溶解，最后经0.22μm滤膜过滤，即得64Cu标记的Dimer-SansalvamideA环肽衍生物胰腺癌分子探针。所述步骤⑷中磷酸盐缓冲液的用量与所述标记物64Cu-NOTA-Dimer-San的比例为300~500μL：5~10μg。本专利技术与现有技术相比具有以下优点：1、本专利技术首次以NOTA-Dimer-San分子作为金属离子64Cu的标记前体，以Hsp90为显像的靶点，构建64Cu标记的NOTA-Dimer-San新型显像剂。本专利技术以SansalvamideA衍生物中活性最强的环肽Dimer-SansalvamideA(简称Dimer-SanA)作为标记前体(IC50为1-20nM)，其结构式如下：该标记前体在保留该类衍生物重要活性功能基团的前提下，通过在Dimer-SanA分子的苯环上引入氨基，耦联1，4，7-三氮环本文档来自技高网...

【技术保护点】
Cu‑64 标记的Dimer‑San A环肽衍生物胰腺癌分子探针的制备方法，包括以下步骤：⑴将NOTA‑Dimer‑Sansalvamide A溶解于乙腈，配制成浓度为1 μg/μL的多肽溶液；⑵在37~111 MBq的

【技术特征摘要】
1.Cu-64标记的Dimer-SanA环肽衍生物胰腺癌分子探针的制备方法，包括以下步骤：⑴将NOTA-Dimer-SansalvamideA溶解于乙腈，配制成浓度为1μg/μL的多肽溶液；⑵在37~111MBq的64CuCl2中加入300μL0.1M且pH=5.5的乙酸氨缓冲液进行反应，得到反应液64Cu(OAc)2；⑶将5~10μg所述多肽溶液加入到所述反应液64Cu(OAc)2中，于45℃加热45min，并在加热的过程中持续震荡，得到产物64Cu-NOTA-Dimer-SansalvamideA，简...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉民，陈凯，王晓慧，
申请(专利权)人：李玉民，陈凯，王晓慧，
类型：发明
国别省市：甘肃,62