转染GFP的克隆猪、敲除GT的克隆猪及其生产方法技术

本发明专利技术公开了表达绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）的克隆猪和敲除１，３－半乳糖基转移酶（ＧＴ）基因的克隆猪。本发明专利技术还公开了生产这些克隆猪的方法，该方法包括下列步骤：建立体细胞系；制备转染ＧＦＰ或敲除ＧＴ基因的核供体细胞；用核供体细胞和受体卵母细胞产生转基因核移植胚胎；将转基因核移植胚胎移植到代孕母猪体内。本发明专利技术中表达ＧＦＰ的克隆猪有利于大规模生产动物疾病模型，而且敲除ＧＴ基因的克隆猪可以被用作器官供体，使人体中不产生超急性免疫排斥的异种移植成为可能。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

概括地说，本专利技术涉及一种生产克隆猪的方法和使用这种方法生产的猪，所述方法通过将所需的基因导入体细胞的基因寻靶技术和体细胞核移植技术而使所述克隆猪具有特定的遗传特性。
技术介绍
在过去的20年中转基因动物技术一直备受瞩目。转基因技术在提供高价值的产品方面极其重要，并被广泛应用于生物医学和生物学研究。在工业上可将转基因技术广泛应用于生产高质量家畜产品、高附加值的药用活性物质、增强了抗多种病原物的抗性的动物和动物疾病模型以及基因治疗。在生产转基因动物的基因寻靶步骤中通常使用绿色荧光蛋白(GFP)，由于它具有以下特征便于标记染色体蛋白及标记染色体DNA的特定区域，并可与许多细胞质蛋白结合且是无毒的，所以将其广泛用于在活体细胞中表达同源的细胞骨架丝。1994年，Chalfie等使用从水母(Aequoreavictoria)中获得的GFP作为荧光指示剂在包括猪胚胎在内的活体细胞中观察到多种分子生物学变化。从那以后，开发了增强型GFP(EGFP)，并将其作为在多种转基因动物中使用的标记。由Gordon等提出的原核显微注射是一种将异源基因导入细胞以产生转基因动物的技术，其特征是将异源基因直接本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表达绿色荧光蛋白基因的克隆猪的生产方法，该方法包括如下步骤：（ａ）通过培养来源于猪的细胞系制备核供体细胞；（ｂ）将携带绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）基因的ＤＮＡ构建体和脂组分或非脂阳离子聚合体介质混合，以形成脂（或阳离子聚合体） －ＤＮＡ复合物，将得到的复合物加到核供体细胞的培养基中并进一步培养所述核供体细胞，以将所述ＧＦＰ基因导入所述核供体细胞并在其中表达ＧＦＰ基因；（ｃ）将转染的核供体细胞转移到去核的猪受体卵母细胞中，以产生转基因的核移植胚胎，并激活所述 核移植胚胎；以及（ｄ）将所述核移植胚胎移植到代孕母猪体内，以产生成活后代。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄寓锡，李柄千，姜成根，韩在容，林正默，李昌奎，李殷松，郑义培，赵钟基，金大暎，玄尚桓，李甲相，金惠洙，李昭炫，李成哲，廉受清，
申请(专利权)人：Seoul大学校产学协力财团，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]