生产重组人溶菌酶的动物乳腺生物反应器——人溶菌酶转基因克隆大型家畜的方法技术

本发明专利技术涉及生产重组人溶菌酶的动物乳腺生物反应器－人溶菌酶转基因克隆大型家畜的方法，其操作步骤如下：（１）构建含有人溶菌酶基因的乳腺特异表达载体，（２）构建双标记选择载体和单标记选择载体，通过电击方法进行细胞转染，获得转基因细胞，（３）转基因细胞作为核供体进行体细胞克隆，获得转基因克隆动物。利用体细胞克隆技术生产转人溶菌酶基因的转基因牛，从而通过高产奶牛的乳腺大量生产具有活性的人溶菌酶。本发明专利技术所研究的重组人溶菌酶，具有与天然人溶菌酶相同的生物活性，既可开发出具有高附加值的保健牛奶，也可纯化出人溶菌酶并开发成药品和保健品。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程领域，特别是涉及转基因—克隆

技术介绍
转基因动物研究是人类按着自己的意愿有目的、有计划、有根据、有预见地改变动物的遗传组成，而改变其遗传组成的目的是多种多样的。比如遗传学家希望通过改变动物的遗传组成来观察其表型变化，生理学家希望通过特定基因的表达来研究该基因对机体生理状况的影响。与动物生产有关的转基因研究则希望通过转基因技术来赋予动物新的表型性状。该项研究在实验技术上依赖分子生物学、动物胚胎和配子操作技术。转基因动物的制作方法目前主要有原核期胚胎的显微注射，逆转录病毒感染发育早期的动物胚胎，精子载体法，ES细胞技术，PGCs技术，体细胞核移植技术，逆转录病毒载体感染MII期的卵母细胞，精子头与DNA合并注射卵母细胞法。这些方法上的改进与提高大大地促进了转基因动物研究由实验室向生产实践转化的进程。其中最传统和最常用的方法是原核期胚胎的显微注射，该方法由美国人Gordon专利技术，是目前应用比较广泛、效果比较稳定的制作转基因动物的方法之一。即在显微操作仪下通过一毛细玻璃管将外源DNA注射进动物受精卵细胞的原核内，再将该受精卵细胞移植进受体细胞子宫内，在受精卵本文档来自技高网...

【技术保护点】
生产重组人溶菌酶的动物乳腺生物反应器－人溶菌酶转基因克隆大型家畜的方法，其操作步骤如下：（１）构建含有人溶菌酶基因的乳腺特异表达载体，（２）构建双标记选择载体和单标记选择载体，通过电击方法进行细胞转染，获得转基因细胞，（３）转基因细胞作为核供体进行体细胞克隆，获得转基因克隆动物。

【技术特征摘要】
1.生产重组人溶菌酶的动物乳腺生物反应器——人溶菌酶转基因克隆大型家畜的方法，其操作步骤如下(1)构建含有人溶菌酶基因的乳腺特异表达载体，(2)构建双标记选择载体和单标记选择载体，通过电击方法进行细胞转染，获得转基因细胞，(3)转基因细胞作为核供体进行体细胞克隆，获得转基因克隆动物。2.根据权利要求1所述的生产重组人溶菌酶的动物乳腺生物反应器——人溶菌酶转基因克隆大型家畜的方法，所述人溶菌酶基因含有人溶菌酶基因信号肽序列，1-4外显子，1-3内含子。3.根据权利要求1所述的生产重组人溶菌酶的动物乳腺生物反应器——人溶菌酶转基因克隆大型家畜的方法，所述人溶菌酶基因的特异表达载体是pBC1-HLY或pBC2-HLY。4.根据权利要求1所述的生产重组人溶菌酶的动物乳腺生物反应器——人溶菌酶转基因克隆大型家畜的方法，所述人溶菌酶基因还含有牛beta-casein信号肽序列，1-4外显子，1-3内含子。5.根据权利要求4所述的生产重组人溶菌酶的动...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤波，戴蕴平，龚国春，于政权，张磊，李宁，
申请(专利权)人：李宁，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]