一种从富硒荷叶离褶伞菌丝体中提取及测定硒多糖的方法技术

本发明专利技术提供了一种从富硒荷叶离褶伞菌丝体中提取及测定硒多糖的方法;具体包括以下步骤，以20L生物罐发酵培养的富硒荷叶离褶伞菌丝体为原料，优化菌丝体中硒多糖的提取工艺并通过红外光谱对水溶性硒多糖的结构进行分析。通过单因素试验和Box‑Behnken试验设计方法得到硒多糖的最佳提取工艺条件：提取时间为50min、提取温度83℃、料液比1:130g/mL、提取次数2次。测得硒多糖提取率为44.62%，较预测值增加0.02%，此时多糖中硒含量达到31.9μg/g。提取率高。将纯化后的硒多糖进行红外光谱分析，富硒未改变水溶性硒多糖的主体结构，但吡喃环的吸收峰发生了改变，说明在荷叶离褶伞菌丝体富硒培养过程中,硒参与了硒多糖的合成。为荷叶离褶伞菌丝体中硒多糖的开发利用提供理论依据。

A method of extraction from lotus leaf from Se enriched polysaccharide and determination of selenium in fold androsaceu mycelium

【技术实现步骤摘要】
一种从富硒荷叶离褶伞菌丝体中提取及测定硒多糖的方法
本专利技术属于生物医药领域，涉及荷叶离褶伞菌丝体具体涉及一种从富硒荷叶离褶伞菌丝体中提取及测定硒多糖的方法。
技术介绍
荷叶离褶伞(Lyophyllumdecastes(Fr.)Singer)是一种营养价值和药用价值都很高的菌类。且荷叶离褶伞菌丝体具有一定的富硒能力，在富硒的发酵过程中，硒的加入可有效提高菌丝体的干重。硒元素是生命活动的必需元素，与人类的健康密切相关，研究发现，贫血、大骨节病、糖尿病、癌症等疾病都与人体内缺乏硒元素有关。从地理条件分析，我国是一个缺硒大国，粮食等天然食物中硒含量较低，尤其是华北、东北、西北地区属于严重硒匮乏地区，开发高效的富硒食品具有重要的意义。多糖和硒结合成为硒多糖，是一种多糖有机硒化合物，其生物药理活性普遍高于多糖和硒，更容易被机体吸收和利用。硒多糖具有多种生理功能，可抗衰老、防治癌症，治疗多种免疫缺损疾病，诱导干扰素的产生，促进蛋白质和核酸的生物合成等多方面的生物活性。天然硒多糖分布于许多动植物和微生物体内，尤其是存在于植物体内已经得到证实。然而，对硒多糖的全部功能和生化特性尚未完全清楚，在硒多本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从富硒荷叶离褶伞菌丝体中提取硒多糖的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：步骤（1）对发酵制备的富硒荷叶离褶伞菌丝体，放入真空干燥箱中进行干燥，磨粉过100目筛制成样品；步骤（2）精密称取该样品0.5000g，在提取时间15‑75min，提取温度为50‑90℃，料液比1:40‑200 g/mL的条件下进行超声提取1‑4次；步骤（3）提取后在3000r/min的转速下离心15min，合并上清液进行减压浓缩成≤50mL的浓缩液；步骤（4）在浓缩液加入3倍体积95%乙醇，4℃冰箱中静置过夜，得硒多糖沉淀，硒多糖沉淀经乙醇反复洗涤后，用Sevage试剂除去蛋白质，最后将上清液定容至50mL备用；步骤...

【技术特征摘要】
1.一种从富硒荷叶离褶伞菌丝体中提取硒多糖的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：步骤（1）对发酵制备的富硒荷叶离褶伞菌丝体，放入真空干燥箱中进行干燥，磨粉过100目筛制成样品；步骤（2）精密称取该样品0.5000g，在提取时间15-75min，提取温度为50-90℃，料液比1:40-200g/mL的条件下进行超声提取1-4次；步骤（3）提取后在3000r/min的转速下离心15min，合并上清液进行减压浓缩成≤50mL的浓缩液；步骤（4）在浓缩液加入3倍体积95%乙醇，4℃冰箱中静置过夜，得硒多糖沉淀，硒多糖沉淀经乙醇反复洗涤后，用Sevage试剂除去蛋白质，最后将上清液定容至50mL备用；步骤（5）采用蒽酮比色法测定硒多糖的含量，并计算硒多糖提取率、及硒多糖中硒含量。2.如权利要求1所述的一种从富硒荷叶离褶伞菌丝体中提取硒多糖的方法，其特征在于：通过步骤（5）测出的硒多糖提取率，得出四个单因素试验，提取温度、提取时间、料液比和提取次数对硒多糖提取率的影响，初步优化步骤（2）的提取工艺；再通过响应面分析法建立各因素与响应值之间的数学模型，借助DesignExpert8软件处理数据，并进行多元回归分析，得到四个单因素与硒多糖提取率的回归模型：Y=-334.64364+1.42204A+5.95762B+1.25132C+12.91923D+8.48614×10-3AB-1.94563×10-4AC+0.033333AD+1.50053×10-3BC+0.062313BD-0.021828CD-0.02648A2-0.040372B2-5.15448×10-3C2-3.55101D2，式中Y为硒多糖提取率，A、B、C和D为上述4个变量的编码值；分析各因素交会作用对荷叶离褶伞菌丝体中硒多糖提取率的影响，最终得出硒多糖提取率最高的提取时间、提取温度、料液比、提取次数。3.如权利要求1或2所述的一种从富硒荷叶离褶伞菌丝体中提取硒多糖的方法，其特征在于：精密称取过100目筛的富硒荷叶离褶伞菌丝体样品0.5000g，在提取时间为50min、提取温度83℃、料液比1:130g/mL的条件下进行超声提取2次。4.如权利要求1或2所述的一种从富硒荷叶离褶伞菌丝体中提取硒多糖的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的富硒荷叶离褶伞菌丝体其富硒过程具体通过以下步骤得到：步骤A.称取黄豆100g，浸泡过夜后打浆，煮沸5min，冷却至40℃加入5%蛋白酶，恒温水浴8h后用300目筛过滤，滤液备用；步骤B.称取玉米面600g，按1:10加入65℃热水，后加入5%的淀粉酶，恒温水浴至水解液遇碘液无色为止，用300目筛过滤，滤液备用;步骤C.把步骤A得到的黄豆酶解液和步骤B得到的玉米淀粉酶解液的滤液混合，加入葡萄糖200g，定容至20L发酵罐中，121℃灭菌40min，快速冷却至22℃，接入10%的荷叶离褶伞种子培养液，通入无菌空气，使罐内压强为0.02MPa的条件下培养，在发酵的第3d加入灭菌的Na2SeO3溶液，使其在发酵罐中浓度为4μg/mL，发酵的第8d终止发酵，过滤，得到的菌丝体用清水清洗后在冷冻干燥机中冻干，即为富硒荷叶离褶伞菌丝体。5.如权利要求3所述的一种从富硒荷...

【专利技术属性】
技术研发人员：高慧娟，魏生龙，席亚丽，冯九海，梁倩倩，刘志芳，
申请(专利权)人：河西学院，
类型：发明
国别省市：甘肃,62