一种C反应蛋白磁微粒检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种C反应蛋白检测试剂盒及其使用方法，该试剂盒包括由若干并排设置的孔位组成的试剂条，试剂条包含的试剂有CRP磁珠工作液、CRP吖啶酯标记工作液；该试剂盒还包括校准品、预激发液、激发液以及磁珠清洗液，且在试剂条上的一孔位内设有磁棒套。本发明专利技术提供的C反应蛋白检测试剂盒及其使用方法基于化学发光免疫分析技术，提高了C反应蛋白检测的灵敏度、特异性和精密性，并使检测能够适用于更多样本类型，且能够最大限度地消除样本差异对检测的影响。

A magnetic particle detection kit for C reactive protein and its application

The invention discloses a C reaction protein detection kit and method of use thereof, the kit includes a set of holes formed by several side by side reagent, reagent containing the CRP beads solution, CRP labeled acridinium ester liquid; the kit also includes a calibrator, prespark fluid, fluid excitation and the bead cleaning liquid, and the reagent strip on a hole is arranged in the bar set. The invention provides a C reaction protein detection kit and use method thereof based on chemiluminescence immunoassay technology, improved C reactive protein detection sensitivity, specificity and precision, and the detection can be applied to more types of samples, and to maximize the elimination of differences on the effects of sample detection.

【技术实现步骤摘要】
一种C反应蛋白磁微粒检测试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及C反应蛋白检测
，尤其涉及一种C反应蛋白检测试剂盒及其使用方法。
技术介绍
C-反应蛋白(C-reactiveprotein，CRP)由肝细胞合成，在胎儿期产生，非母体胎盘传递。其产生机理是：当机体受感染或组织受损伤时巨噬细胞和其他白细胞等被激活，产生白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子TNF-a等细胞因子及其他介导物，这些细胞因子和介导物到达肝脏，刺激肝细胞和上皮细胞合成CRP。在结构上，CRP含5个多肽链亚单位，非共价地结合为盘形多聚体，分子量为11.5万～14万，CRP是一种典型的急性时相蛋白。常规CRP测定包括定性、半定量和定量分析，可用于评价感染，组织损伤和炎症性疾病。对于常规的CRP测定，参考值通常被认为是临床上含量高于10mg/L。在健康人群血液中CRP水平低于5mg/L，而在各种条件下，急性炎症4～8小时内，CRP值达到约20至500mg/L。常规CRP作为急性炎症评估指标比红细胞沉降率(ESR)和白细胞计数更敏感、更可靠。超敏C反应蛋白常见的用途可作为心血管疾病风险识别的辅助手段。配合传统的急性冠脉综合征临床诊断使用，可作为冠状动脉疾病或急性冠脉综合征复发的预警指示物。目前对C反应蛋白的免疫学检测，主要有免疫比浊法、免疫层析法、酶联免疫法和化学发光法等。其中罗氏和雅培，以及目前C反应蛋白检测市场占有率最高的芬兰Quikread，均采用免疫比浊法。免疫层析法分为胶体金法和荧光免疫层析，其中国内很多公司都采用了胶体金法，而荧光免疫层析则以韩国的i-chroma试剂为主，苏州光景生物和上海博阳生物则采用了时间分辨荧光免疫层析。酶联免疫法使用的厂家较少，如深圳海格德生物。化学发光免疫分析，是目前市场上免疫检测使用广泛、发展最为迅速的技术，它是用化学发光物质直接标记抗原或抗体，其发光强度与样本中的待测物浓度呈正相关。该方法灵敏度高、特异性好，根据其标记方法的不同，又可分为直接化学发光和酶促化学发光。深圳新产业检测C反应蛋白就采用了直接化学发光免疫分析法。胶体金法，是由胶体金颗粒在硝酸纤维素膜上聚集成肉眼可见的有色条带，而判别样本中待测物的浓度，该方法最为方便快捷，但是其敏度较低，特异性较差。荧光免疫层析，脱胎于胶体金法，把标记物从胶体金颗粒，替换为各种荧光纳米微球，借助仪器对荧光信号进行测定，然后计算出待测物的浓度。该方法由于是采用层析的反应模式，所以不同类型样本的层析形态和速度会对免疫反应产生影响，从而导致其重复性和特异性不能达到一个比较理想的水平。免疫比浊法，是通过对液体浊度的检测而反映出待测物的浓度，该方法同样受样本性状的影响，如高血脂等样本会影响结果的判断。化学发光法，以深圳新产业的产品为例，它采用的是直接化学发光免疫分析技术，发光标记物为异鲁米诺。该方法所用的试剂为均为大包装，检测时由移液器加到反应管中反应，该方法具有灵敏度高、特异性好、检测范围宽的优点，但是由于其包装盒检测方式所限，其检测的灵活性较差，且试剂一旦开封，其保存稳定性就会受到周围环境的影响。
技术实现思路
本专利技术为解决现有技术中的上述问题，提供一种可以定量检测全血、血清或血浆中C反应蛋白含量的检测试剂盒以及使用方法。本专利技术所提供的C反应蛋白检测试剂盒及其使用方法，采用化学发光免疫分析技术，提高了C反应蛋白检测的灵敏度、特异性和精密性，并使检测能够适用于更多样本类型，且能够最大限度地消除样本差异对检测的影响，另外通过对包装和检测方式进行设计，提高了检测的灵活性，并规避了试剂开封后需要稳定保存的问题。专利技术C反应蛋白检测试剂盒的原理：采用的是化学发光免疫分析技术，发光标记物为吖啶酯，而抗体包被载体为超顺磁微粒，免疫检测原理为双抗体夹心法。磁微粒是指可均匀分散于一定基液中的胶态复合材料，本专利技术所用的磁微粒内核为Fe3O4，外壳为聚乙烯醇，表面修饰有链霉亲合素，直径为100nm，具有超顺磁性和极高的比表面积，且可以与生物素结合。吖啶酯在在碱性H2O2溶液中，分子受到过氧化氢离子进攻时，生成不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO2和电子激发态的N-甲基吖啶酮，当其回到基态时发出最大发射波长为430nm的光子，该发光为闪光，会在约0.2-0.4s的很短时间内达到最大值，半衰期只有不到1s。基于上述背景，本专利技术C反应蛋白检测试剂盒的具体反应过程如下：首先是抗-CRP抗体包被的磁微粒与样本中的CRP特异性结合，然后该复合物与吖啶酯标记的抗-CRP抗体反应，形成抗-CRP抗体(a)磁微粒+CRP+吖啶酯标记抗-CRP抗体(b)复合物，然后把该复合物置于碱性H2O2溶液中，吖啶酯发光，检测其发光信号，其信号强度与待测物浓度正相关。磁微粒由于其较大的比表面积，可以包被大量的抗-CRP抗体，且磁微粒可以均匀分散在液体中，所以整个反应过程为准均相反应，其检测灵敏度和精密性能够得到保证，而且这种形式的反应速率较高，能够极大的缩短整个反应过程，更早得到检测结果。在检测CRP时，需要用稀释液对样本进行100倍稀释，而且每一步反应之后，都会对磁微粒进行清洗，从而提高了试剂的特异性，并消除了不同样本对检测造成的差异。不同于一般的化学发光试剂，在本专利技术中的C反应蛋白检测试剂盒中，检测需要的各个组分，都是按照单个测试的使用量，分装到特定的试剂条中，各个组分独立放置且用铝膜进行密封。每个试剂条可以单独随时进行测试，而且只有在上机开始测试时，才会开封，这样就消除了开封后保存可能对检测造成的影响。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术的第一个方面是提供一种C反应蛋白检测试剂盒，包括由若干并排设置的孔位组成的试剂条，所述试剂条包含的试剂有CRP磁珠工作液、CRP吖啶酯标记工作液。进一步地，在所述C反应蛋白检测试剂盒上，所述CRP磁珠工作液是含有标记有抗-CRP抗体的磁性微球。进一步地，在所述C反应蛋白检测试剂盒上，所述CRP吖啶酯标记工作液是含有吖啶酯标记的抗-CRP抗体。进一步地，在所述C反应蛋白检测试剂盒上，所述试剂条上的一孔位内设有磁棒套。进一步优选地，在所述C反应蛋白检测试剂盒上，所述试剂盒还包括校准品、预激发液以及磁珠清洗液。更进一步地，在所述C反应蛋白检测试剂盒上，所述试剂条上的0号位设有磁棒套；1、2号位设有磁珠清洗液；3号位设有CRP磁珠工作液；6号位设有CRP吖啶酯标记工作液；7、8号位设有磁珠清洗液；10号位设有预激发液。本专利技术的第二个方面是提供了一种C反应蛋白检测试剂盒的制备方法。进一步地，提供了一种所述CRP磁珠工作液的制备方法，包括如下步骤：步骤1，生物素标记抗体抗体透析：取所需量的CRP磁珠包被抗体，用CRP透析液于4℃或室温透析不少于16-24h，期间换液不少于4次，透析液与原料的总透析体积比不低于250：1，收集透析完成的抗体保存于2-8℃待用，保存时间不超过7天；生物素溶解：用DMSO溶解生物素至浓度为1-5mg/mL；或者从-20℃取出用DMSO溶解好的生物素，解冻待用；生物素标记：把透析好的抗体用CRP透析液将抗体稀释到1.5mg/ml，按质量比CRP抗体：生物素＝10：1。将生物素滴加到透析后的原料中，滴加时应慢慢晃动原本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括由若干并排设置的孔位组成的试剂条，所述试剂条包含的试剂有CRP磁珠工作液、CRP吖啶酯标记工作液。

【技术特征摘要】
1.一种C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括由若干并排设置的孔位组成的试剂条，所述试剂条包含的试剂有CRP磁珠工作液、CRP吖啶酯标记工作液。2.根据权利要求1所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述CRP磁珠工作液是含有标记有抗-CRP抗体的磁性微球。3.根据权利要求1所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述CRP吖啶酯标记工作液是含有吖啶酯标记的抗-CRP抗体。4.根据权利要求2所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂条上的一孔位内设有磁棒套。5.根据权利要求1所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括校准品、预激发液以及磁珠清洗液。6.根据权利要求5所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂条上的0号位设有磁棒套；1、2号位设有磁珠清洗液；3号位设有CRP磁珠工作液；6号位设有CRP吖啶酯标记工作液；7、8号位设有磁珠清洗液；10号位设有预激发液。7.一种采用权利要求1-4任一项所述试剂盒的使用方法，其特征在于，检测时，所述试剂条(4)置放于孵育仓(3)内，所述孵育仓(3)设置于输送带(2)上，所述输送带(2)连接水平位移电机(1)，所述输送带(2)的末端设有分析读数模块(13)；并采用可相对磁棒套(5)上下移动的上吸式磁珠转移枪实现所述试剂条上取磁棒套、吸取磁珠、磁珠洗脱、磁珠混匀、磁棒套打脱动作；所述上吸式磁珠转移枪，包括可与所述磁棒套(5)过盈连接的提取枪枪头(12)、位于所述提取枪枪头(12)轴心线上用于吸附磁珠(16)的磁棒(15)，所述磁棒(15)由提取电机(10)驱动并相对所述提取枪枪头(12)上下移动；包括如下使用步骤：步骤1，选择项目：根据样本选择CRP项目，把试剂条插入仪器反应通道中，点击开始；步骤2，扫码：仪器扫描试剂条封口铝膜表面的二维码，确认批号、校准曲线等信息是否与...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝亚澎，胡星海，
申请(专利权)人：苏州新波生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32