PAPPA2基因上游片段作为猪免疫性状的分子标记及应用制造技术

本发明专利技术属于猪分子标记筛选技术领域，具体涉及PAPPA2基因的上游序列片段作为猪免疫性状相关检测的分子标记及应用。所述的分子标记由猪PAPPA2基因的上游序列中克隆得到。本发明专利技术筛选得到一种与猪免疫性状相关的分子标记，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，在该序列的第52位碱基处存在一个A/G的等位基因突变，该突变导致Sequenom

Molecular marker and application of PAPPA2 gene upstream fragment as a pig immune character

The invention belongs to the field of pig molecular marker screening technology, and specifically relates to the upstream sequence fragment of PAPPA2 gene as a molecular marker and its application for pig immune traits related detection. The molecular markers described were cloned from the upstream sequence of the porcine PAPPA2 gene. The present invention screened the molecular immune traits of a pig related marker, the nucleotide sequence of SEQ ID NO:1 shows, there is a A/G allele mutation in the sequence of the fifty-second base, the mutation causes Sequenom

【技术实现步骤摘要】
PAPPA2基因上游片段作为猪免疫性状的分子标记及应用
本发现属于猪的分子标记筛选
，具体涉及PAPPA2基因上游片段作为猪免疫性状的分子标记及应用。
技术介绍
猪病已经成为当前制约养猪业健康发展的关键因素之一，尤其是规模化猪场的普及，对疫病的防治更是生猪养殖过程中的重中之重。但是往往由于对某些疫病控制能力弱，疾病检测、诊断、预防和扑灭等措施处理不及时，造成猪病频发。疾病的爆发可直接导致生猪的死亡，出栏率降低，进而影响生猪养殖的经济效益。同时为了预防和治疗疾病而大量使用药物增加了养殖成本和药物残留，残留的药物对生态环境造成一定程度的破坏。而抗生素的滥用不仅导致病菌出现耐药性，增加了养殖场疾病防治的难度，而且还造成猪肉食品存在安全隐患。因此，在生猪养殖过程中的疾病防控，直接关系到这一产业的发展和猪肉食品市场。尽量避免大量使用药物，寻找抗病新策略，从培育抗病品系入手，是改善养猪行业行情的热门研究方向。研究表明免疫与生长具有一定的关系，二者之间存在负相关(唐国庆等,猪抗病育种研究进展.中国畜牧兽医,2002,29(6):29-32；严燕等,猪遗传抗性与抗病育种研究进展.猪业科学,2007,6:58-61.)，而用于检测免疫指标的因子在中外猪种中存在显著差异(刘筱等,猪Toll样受体4基因(TLR4)外显子SNP检测及生物信息学分析.江苏农业学报,2011,27(4):782-789；董文华等,猪CD14基因多态性及其对部分免疫指标的遗传效应分析.中国畜牧杂志,2014,50(13):1-5.)，且在一定程度上可以反映机体的生长状态。因此可以筛选与免疫性状关联的基因作为检测免疫性状的遗传标记。文献报道PAPPA2(Pappalysin2)基因参与调控机体的免疫及生长。PAPPA2又称冠毛素2，是胰岛素生长因子结合蛋白5(IGFBP5)的裂解酶(OvergaardMT等,Pregnancy-associatedplasmaprotein-A2(PAPP-A2),anovelinsulin-likegrowthfactor-bindingprotein-5proteinase.BiolChem,2001,276(24):21849-21853.)，而IGFBP5则属于胰岛素样生长因子结合蛋白家族的一员，在血液和多种组织中表达。作为胰岛素样生长因子(IGF)家族的重要组成部分，胰岛素样生长因子结合蛋白对延长胰岛素样因子的半衰期和调节其生物学功能发挥重要作用(RicherMM等,Theinsulin-likegrowthfactorsandIGFtypeIreceptorduringpostnatalgrowthofthemurinemammarygland:SitsofmRNAexpressionandpotentialfunctions.Endocrinology,1999,140:454-461.)。据报道，IGF不仅可以通过内分泌作用在神经内分泌和免疫系统间传递信号而且还能够以自分泌和旁分泌的方式调节免疫系统(王宇鸿,IGF-1的免疫调节作用.国外医学免疫学分册,2001,24(4):187-190.)。功能研究表明，向小鼠体内注射重组的IGF-1蛋白，B细胞合成免疫球蛋白的能力增强，小鼠机体的免疫机能提高，而该基因的缺陷则会造成机体内各种免疫细胞功能的紊乱(ClarkR等,Insulin-likegrowthfactor-1stimulationoflymphopoiesis.JClinInvest,1993,92(2):540-8.)。另外，IGF可以通过自身、受体及其结合蛋白的方式介导由垂体生长激素(GH)参与的调控身体各器官生长的过程(汪波等,胰岛素样生长因子的研究进展.黑龙江畜牧兽医,2010,(5):25-27.)，而上述调控过程主要依靠IGFBP蛋白的裂解酶参与完成。IGFBP可以被IGFBP酶解而释放出IGF。在众多的结合蛋白中，IGFBP5与IGF的亲和性最高，其主要与细胞外基质结合对IGF-1分子活性起到正向调节作用。研究报道，IGFBP5基因编码区及5’调控区SNP位点的突变会影响猪的生长性状(赵晓枫等,胰岛素生长因子结合蛋白5基因(IGFBP5)部分编码序列的SNP快速筛查及其多态性对猪生产性能的影响.农业生物技术学报,2009,17(5):758-762；吴庆燕等,IGFBP-5基因在不同猪种间的表达差异及5’端序列特征分析.中古兽医学报,2015,35(4):655-660.)。PAPPA2基因作为IGFBP5的裂解酶，可以通过酶解IGFBP5，影响IGFBP5基因调控IGF的分子活性，进而对机体免疫功能和正常生长产生影响，且该基因的异常表达可能与孕妇孕期并发症有关，因此PAPPA2蛋白也被用来作为检测胎盘异常的标记物(Wang等,Expressionofpregnancy-associatedplasmaproteinA2duringpregnancyinhumanandmouse.JEndocrinol,2009,202(3):337-345)。上述研究结果均表明PAPPA2基因在机体免疫和生长过程中发挥重要作用，而该基因上游序列位点的突变则可能会通过调控基因自身表达的活性从而影响动物机体免疫和生长性能的维持。本专利技术申请中，申请人分析了PAPPA2基因的上游片段，鉴定了一个与猪免疫性状密切相关的功能突变位点，为猪免疫性状的标记辅助选择提供了新的SNP分子标记。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点，提供PAPPA2基因上游片段作为猪免疫性状的分子标记及应用。本专利技术通过PCR扩增PAPPA2基因上游片段，利用Sequenom技术，在猪品种杜洛克×二花脸F2代群体中进行分型，分型结果与该群体的免疫指标关联分析，进而鉴定获得与猪免疫性状相关的分子标记。本专利技术为猪的抗病育种提供了新的分子标记资源和应用。本专利技术的技术方案如下所述：申请人通过基因克隆的方法，得到PAPPA2基因上游序列，其核苷酸序列如序列表SEQIDNO：1所述。具体的序列如下所示：AACAAGACCATAGAGGAAACTATGAAATTTCTTCTCACAATAAGAACAGGARTTTCTTAAAAGTCGGTACGTTCATTATTCC上述序列的52bp碱基处的R是A或G，该突变导致Sequenom分型多态性。该基因片段可以作为检测分诊断目的的与猪免疫性状相关的分子标记。申请人提供了一种检测如序列表SEQIDNO：1所述的分子标记的引物对(即扩增PAPPA2基因上游序列的引物对)，在该引物对的正、反向引物的起始处(即下划线所示的序列)各包含10bp的序列标签。该引物对的核苷酸序列如下所示：正向引物：5’-ACGTTGGATGAACAAGACCATAGAGGAAAC-3’反向引物：5’-ACGTTGGATGGGAATAATGAACGTACCGAC-3’。申请人提供了一种检测如序列表SEQIDNO：1所述的分子标记的用于基因分型的延伸引物组合，该引物组合序列的起始处(即下划线所示的序列)各包含4bp的序列标签。该引物组合的核苷酸序列如下所示：引物1：5’-CCCATTCTCACAATAAGA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与猪免疫性状相关的分子标记，其核苷酸序列如下所示：AACAAGACCATAGAGGAAACTATGAAATTTCTTCTCACAATAAGAACAGGARTTTCTTAAAAGTCGGTACGTTCATTATTCC上述序列52bp处的R是A或G，该突变导致Sequenom

【技术特征摘要】
1.一种与猪免疫性状相关的分子标记，其核苷酸序列如下所示：AACAAGACCATAGAGGAAACTATGAAATTTCTTCTCACAATAAGAACAGGARTTTCTTAAAAGTCGGTACGTTCATTATTCC上述序列52bp处的R是A或G，该突变导致SequenomSNP分型多态性。2.一种检测如权利要求1所述的分子标记的引物对，其特征在于，该引物对的核苷酸序列如下所示：正向引物：ACGTTGGATGAACAAGACCATAGAGGAAAC，反向引物：ACGTTG...

【专利技术属性】
技术研发人员：李新云，赵书红，赵志超，栾宇，刘华珍，刘向东，朱猛进，刘小磊，马云龙，余梅，刘望宏，施亮，李家连，钱平，
申请(专利权)人：广西扬翔股份有限公司，华中农业大学，
类型：发明
国别省市：广西,45