一种从发酵黑蒜中分离胶红酵母的方法技术

本发明专利技术公开了一种从发酵黑蒜中分离胶红酵母的方法，包括以下步骤：取发酵黑蒜3颗，研磨后放到250mL的生理盐水中，置于30℃的摇床中，震荡2h；改良PDA配方：在PDA培养基中，琼脂为22‑25g/L，青霉素为150‑200mg/L、200目石英砂为50‑70g/L；将30mL上清液倒入改良PDA培养基中制成含菌培养基，倒平板置于30℃的培养箱中培养；2‑3d后有长出了较多菌落，挑取一个单独菌落在改良PDA平板上画线分离，再次生长出单个菌落；反复从平板上挑取单个菌落转种，最后就得到纯种的胶红酵母。本发明专利技术容易得到形态特征明显的单个菌落，富含虾青素、类胡萝卜素和β‑葡聚糖。

A method for separating red yeast from fermented black garlic

The invention discloses a method for separating gel red yeast from fermentation of black garlic, which comprises the following steps: take fermentation black garlic 3, in normal saline 250mL after grinding in the table placed in the temperature of 30 DEG in shock 2H; modified PDA formula: in PDA medium, agar was 22 25g/L. 150 200mg/L penicillin and 200 mesh quartz sand is 50 70g/L; the 30mL supernatant into modified PDA culture medium made of bacteria culture medium, culturing box back panel is placed on the 30 DEG C; 2 3D after grow more colonies were a separate colony line separation in modified PDA tablet again, the growth of single colonies; repeated single colonies were screened out from the flat turn, finally get the pure gum red yeast. The invention is easy to get obvious morphological characteristics of single colony, rich in carotenoids and astaxanthin, beta glucan.

【技术实现步骤摘要】
一种从发酵黑蒜中分离胶红酵母的方法
本专利技术属于生物
，具体来说涉及一种从发酵黑蒜中分离胶红酵母的方法。
技术介绍
黑蒜又名发酵黑蒜，是由大蒜经高温发酵成的半成品，是用新鲜生蒜，带皮在发酵箱里发酵60-90天后制成的食品，黑蒜中的微量元素含量较高，味道酸甜，无蒜味，发酵黑蒜的抗氧化能力比普通大蒜的强。胶红酵母属于担子菌纲，菌落为奶油状、粉红色至红色的粘液，是简单的假菌丝，细胞形状为圆形，为营养体细胞出芽生殖。富含虾青素、类胡萝卜素和β-葡聚糖。类胡萝卜素是一种橘黄色脂溶性化合物，具有营养增补剂和食品着色剂的双重功效。动物体内不能合成类胡萝卜素，必须由食物提供，它是动物体内维生素A的重要来源，有补肝明目的作用，可治疗夜盲症。类胡萝卜素也是一种抗氧化剂，进而防止老化和衰老引起的多种退化性疾病。同时，在抗癌、预防心脑血管疾病、白内障上有显著的功效。丙酮酸作为膳食补充剂，具有加速脂肪消耗、减轻体重等功效；对心脏有特殊的保护作用，可增强心脏肌肉的效能，减少心脏病或心脏局部缺血造成的损伤；同时，丙酮酸具有吞噬体内自由基和抑制自由基的生成等显著效果。由于胶红酵母的粘性特别强，不易得到形态特征明显的单个菌落。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种容易得到形态特征明显的单个菌落，富含虾青素、类胡萝卜素和β-葡聚糖的从发酵黑蒜中分离胶红酵母的方法。本专利技术的一种从发酵黑蒜中分离胶红酵母的方法，包括以下步骤：(1)取发酵黑蒜3颗，研磨后放到250mL的生理盐水中，置于30℃的摇床中，震荡2h；(2)改良PDA配方：在PDA培养基中，琼脂为22-25g/L，青霉素为150-200mg/L、200目石英砂为50-70g/L。(3)将30mL上清液倒入改良PDA培养基中制成含菌培养基，倒平板置于30℃的培养箱中培养；(4)2-3d后有长出了较多菌落，挑取一个单独菌落在改良PDA平板上画线分离，再次生长出单个菌落；(5)反复从平板上挑取单个菌落转种，最后就得到纯种的胶红酵母；(6)挑少许菌落制片在显微镜下观察，其显微形态为圆形或椭圆形，无性繁殖为单边芽殖。菌种的保种和传代：保种用的培养基为PDA培养基。保存方法有2种：(1)用15×200mm的试管，盛PDA培养基5ml，做成斜面，接种真菌，30℃培养2～3天，置4℃保存。3个月转种一次。(2)甘油管保存法。挑取单个菌落置于5mL生理盐水中，震荡1分钟，取1.5mL的离心管加入0.5mL菌液和0.5mL40％已灭菌的甘油，混匀后置-40℃，一年转种一次。分子生物学鉴定将菌种接种到PDA培养基上活化2-3次，挑取单个菌落接种到100mL马铃薯液体培养基中，取1-2mL过夜培养的酵母菌培养液，加入1.5mL离心管中，室温10000rpm离心一分钟，弃上清，收集菌体。用SK8257_Ezup柱式酵母基因组DNA抽提试剂盒提取DNA，进行PCR扩增，PCR采用的引物为ITS1：5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′；ITS4：5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′。经PCR扩增后用1％琼脂糖凝胶电泳进行DNA电泳检测，最后将序列进行测序。胶红酵母H1(Rhodotorulamucilaginosa)FBKL3.0021的内转录间隔区(internaltranscribedspacer,ITS)的核酸序列长度为592个碱基，通过美国生物技术信息中心(NationalCenterforBiorechnologyInformation,NCBI)进行序列同源性分析，将胶红酵母H1(Rhodotorulamucilaginosa)序列通过Blast比对，发现其与Rhodotorulamucilaginosa菌种的同源性达到了100％，结合形态学特征，根据MycoBank数据库鉴定该菌种为红酵母属中的胶红酵母。该菌种已于2017年5月12日保藏在中国典型培养物保藏中心(地址：中国武汉武汉大学)，保藏号：CCTCCM2017254，名称为：胶红酵母H-1(RhodotorulamucilaginosaH-1)。本专利技术与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：本专利技术在培养基中加入了青霉素来抑制细菌的生长从而得到纯种的胶红酵母，增大培养基中琼脂含量，同时在每升改良PDA培养基中加入石英砂来获得胶红酵母的单个菌落，胶红酵母在增加黑蒜的抗氧化性上有增强作用，本专利技术为胶红酵母的来源提供了一条新的途径。具体实施方式实施例1一种从发酵黑蒜中分离胶红酵母的方法，包括以下步骤：(1)取发酵黑蒜3颗，研磨后放到250mL的生理盐水中，置于30℃的摇床中，震荡2h；(2)改良PDA配方：在PDA培养基中，琼脂为25g/L，青霉素为180mg/L、200目石英砂为60g/L。(3)将30mL上清液倒入改良PDA培养基中制成含菌培养基，倒平板置于30℃的培养箱中培养；(4)2-3d后有长出了较多菌落，挑取一个单独菌落在改良PDA平板上画线分离，再次生长出单个菌落；(5)反复从平板上挑取单个菌落转种，最后就得到纯种的胶红酵母；(6)挑少许菌落制片在显微镜下观察，其显微形态为圆形或椭圆形，无性繁殖为单边芽殖。菌种的保种和传代：保种用的培养基为PDA培养基。保存方法有2种：(1)用15×200mm的试管，盛PDA培养基5ml，做成斜面，接种真菌，30℃培养2～3天，置4℃保存。3个月转种一次。(2)甘油管保存法。挑取单个菌落置于5mL生理盐水中，震荡1分钟，取1.5mL的离心管加入0.5mL菌液和0.5mL40％已灭菌的甘油，混匀后置-40℃，一年转种一次。实施例2一种从发酵黑蒜中分离胶红酵母的方法，包括以下步骤：(1)取发酵黑蒜3颗，研磨后放到250mL的生理盐水中，置于30℃的摇床中，震荡2h；(2)改良PDA配方：在PDA培养基中，琼脂为25g/L，青霉素为150mg/L、200目石英砂为50g/L。(3)将30mL上清液倒入改良PDA培养基中制成含菌培养基，倒平板置于30℃的培养箱中培养；(4)2-3d后有长出了较多菌落，挑取一个单独菌落在改良PDA平板上画线分离，再次生长出单个菌落；(5)反复从平板上挑取单个菌落转种，最后就得到纯种的胶红酵母；(6)挑少许菌落制片在显微镜下观察，其显微形态为圆形或椭圆形，无性繁殖为单边芽殖。菌种的保种和传代：保种用的培养基为PDA培养基。保存方法有2种：(1)用15×200mm的试管，盛PDA培养基5ml，做成斜面，接种真菌，30℃培养2～3天，置4℃保存。3个月转种一次。(2)甘油管保存法。挑取单个菌落置于5mL生理盐水中，震荡1分钟，取1.5mL的离心管加入0.5mL菌液和0.5mL40％已灭菌的甘油，混匀后置-40℃，一年转种一次。实施例3一种从发酵黑蒜中分离胶红酵母的方法，包括以下步骤：(1)取发酵黑蒜3颗，研磨后放到250mL的生理盐水中，置于30℃的摇床中，震荡2h；(2)改良PDA配方：在PDA培养基中，琼脂为22g/L，青霉素为200mg/L、200目石英砂为70g/L。(3)将30mL上清液倒入改良PDA培养基中制成含菌培养基，倒平板置于30℃的培养箱中培养；(4)2-3d后有长出了较多菌落，挑取一个单独菌落在改良PD本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从发酵黑蒜中分离胶红酵母的方法，包括以下步骤：（1）取发酵黑蒜3颗，研磨后放到250mL的生理盐水中，置于30℃的摇床中，震荡2h；（2）改良PDA配方：在PDA培养基中，琼脂为22‑25g/L，青霉素为150‑200mg/L、200目石英砂为50‑70g/L；（3）将30mL上清液倒入改良PDA培养基中制成含菌培养基，倒平板置于30℃的培养箱中培养；（4）2‑3d后有长出了较多菌落，挑取一个单独菌落在改良PDA平板上画线分离，再次生长出单个菌落；（5）反复从平板上挑取单个菌落转种，最后就得到纯种的胶红酵母。

【技术特征摘要】
1.一种从发酵黑蒜中分离胶红酵母的方法，包括以下步骤：（1）取发酵黑蒜3颗，研磨后放到250mL的生理盐水中，置于30℃的摇床中，震荡2h；（2）改良PDA配方：在PDA培养基中，琼脂为22-25g/L，青霉素为150-200mg/L、200目石英砂为50-70g/L；（3）将30mL上清液倒入改良PDA培养基中制成含菌培养基，倒平板置于30℃的培养箱中培养；（4）2-3d后有长出了较多菌落，挑取一个单独菌落在改良PDA平板上画线分离，再次生长出单个菌落；（5）反复从平板上挑取单个菌落转种，最后就得到纯种的胶红酵母。2.如权利要求1的发酵黑蒜中分离胶红酵母的方法，其中菌种的保种和...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹文涛，邹显友，何志勇，冷刚，邹石铭，
申请(专利权)人：贵州东智生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州,52