一种双色区分成像的死活细胞荧光探针及其应用制造技术
A double color differential imaging of dead cell fluorescent probe and its application
The present invention provides a dual color imaging can distinguish dead cells of fluorescent probe, the chemical name: 2 (4 diethylamino phenyl) 3 acetoxy benzopyran 4 ketone, through the following steps: 4 diethylamino synthesis of benzaldehyde and o-hydroxyacetophenone in the presence of sodium hydroxide and under the condition of hydrogen peroxide reaction of 2 (4 diethylamino phenyl) 3 hydroxy benzopyran 4 ketone; 2 (4 diethylamino phenyl) 3 hydroxy benzopyran 4 acetyl ketone in acetic anhydride by end product. The invention also provides an application of the fluorescent probe to distinguish the dead cells. The probe synthesis method of the invention is simple and can be used to mark dead cells with two kinds of fluorescent colors, which has great potential for application.
【技术实现步骤摘要】
一种双色区分成像的死活细胞荧光探针及其应用
本专利技术涉及一种区分死活细胞的荧光探针，具体涉及一双色区分成像死活细胞的荧光探针及其合成方法和应用，属于有机小分子荧光探针领域。
技术介绍
区分死活细胞、检测细胞活性在细胞生物学、生理学、病理学和药理学研究中起着重要的作用。药物筛选、毒理学研究中，人们经常需要对细胞活性进行评估，以确认试剂毒性以及药效。目前，人们检测区分死活细胞、检测细胞活性的方法主要有比色法和荧光法，相比于比色法，荧光法灵敏度更高，可以实现荧光成像，能够在组织或活体中实现对死活细胞的区分，因此区分死活细胞、检测细胞活性的荧光指示剂具有更广泛的应用。目前，检测细胞活性的荧光探针主要分为两种：第一，利用死活细胞膜的通透性差异设计的荧光探针。碘化丙啶(PI)和溴化乙锭(EB)是这类探针的代表。它们不能着色活细胞，然而当细胞凋亡、膜通透性增加时能够进入细胞，结合RNA发出强烈荧光，因此可以专一性的着色死细胞。第二，利用酯水解酶在死细胞中失活设计的荧光探针。钙黄绿素(Calcein-AM)属于这种探针。钙黄绿素本身不具有荧光，在活细胞中，酯水解酶能够水解掉钙黄...
【技术保护点】
一种双色区分成像的死活细胞荧光探针，其化学名称为：2‑（4‑二乙胺基苯基）‑3‑乙酰氧基‑苯并吡喃‑4‑酮，其化学结构式如式（
【技术特征摘要】
1.一种双色区分成像的死活细胞荧光探针，其化学名称为：2-（4-二乙胺基苯基）-3-乙酰氧基-苯并吡喃-4-酮，其化学结构式如式（）所示：式(I)。2.一种如权利要求1所述的死活细胞荧光探针的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）4-二乙胺基苯甲醛和邻羟基苯乙酮在乙醇中与NaOH反应后，在碱性条件下与过氧化氢反应，分离提纯后获得2-（4-二乙胺基苯基）-3-羟基-苯并吡喃-4-酮（化合物1）；（2）将步骤（1）中化合物1溶于乙酸酐中，加热反应，分离提纯得荧光探针。3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，4-二乙胺基苯甲醛和邻羟基苯乙酮的摩尔比为1:1-1:1.5；4-二乙胺基苯甲醛的浓度为0.5-1.2mol/L；邻羟基苯乙酮的浓度为0.5-1.4mol/L；化合物1与乙酸酐的摩尔比为1:15-1:35；NaOH浓度为1.5-4mol/L；过氧化氢浓度为2.5-5mol/L。4.根据权利要求2所述的合...
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